Асимметричная ПЦР — это разновидность ПЦР , используемая для преимущественной амплификации одной цепи исходной ДНК больше, чем другой. [1] Этот метод применяется в некоторых типах секвенирования и гибридизационного зондирования , где требуется наличие только одной из двух комплементарных цепей . [2]
Методология
Асимметричная ПЦР отличается от обычной ПЦР избыточным количеством праймеров для выбранной цепи. Из-за медленной (арифметической) амплификации на поздних стадиях реакции (после того, как лимитирующий праймер был израсходован) требуются дополнительные циклы ПЦР. [3]
Модификация этого процесса, известная как линейная послеэкспоненциальная ПЦР (LATE-PCR) , использует ограничивающий праймер с более высокой температурой плавления , чем избыточный праймер, для поддержания эффективности реакции, поскольку концентрация ограничивающего праймера уменьшается в середине реакции. [4]
Приложения
Асимметричная ПЦР может использоваться для образования одноцепочечной ДНК из двухцепочечной ДНК, которая затем используется для секвенирования ДНК в методе мутагенеза . [ необходима цитата ] Одноцепочечная ДНК также важна для генерации аптамеров . [1]
Ссылки
- ^ ab Citartan, Marimuthu; et al. (декабрь 2011 г.). «Асимметричная ПЦР для получения одноцепочечной ДНК хорошего качества в направлении производства аптамеров ДНК» (PDF) . Songklanakarin J. Sci. Technol . 34 (2): 125–131. Архивировано из оригинала (PDF) 2020-01-11 . Получено 2017-11-18 .
- ^ Wooddell, CI; Burgess, RR (1996). «Использование асимметричной ПЦР для генерации длинных праймеров и одноцепочечной ДНК для включения сшивающих аналогов в определенные сайты ДНК-зонда». Genome Res . 6 (9): 886–892. doi : 10.1101/gr.6.9.886 . PMID 8889557.
- ^ Хейат, Мохаммад и др. (14 января 2017 г.). «Основные стратегии оптимизации условий асимметричной ПЦР как надежного метода получения большого количества аптамеров одноцепочечной ДНК». Биотехнология и прикладная биохимия . 64 (4): 541–548. doi :10.1002/bab.1507. PMID 27222205. S2CID 21792777.
- ^ Санчес, Дж. Акилес и др. (4 декабря 2003 г.). «Линейная после экспоненциальная (LATE) ПЦР: передовой метод асимметричной ПЦР и ее применение в количественном анализе в реальном времени». Труды Национальной академии наук . 101 (7): 1933–1938. doi : 10.1073/pnas.0305476101 . PMC 357030. PMID 14769930 .
