Гистонметилтрансферазы ( HMT ) являются ферментами , модифицирующими гистоны (например, гистон-лизин N-метилтрансферазы и гистон-аргинин N-метилтрансферазы), которые катализируют перенос одной, двух или трех метильных групп на остатки лизина и аргинина гистоновых белков . Присоединение метильных групп происходит преимущественно на определенных остатках лизина или аргинина на гистонах H3 и H4. [1] Существуют два основных типа гистонметилтрансфераз: лизин-специфические (которые могут содержать или не содержать домен SET ( S u(var)3-9, Enhancer of Zeste, T rithorax) и аргинин-специфические. [2] [3] [4] В обоих типах гистонметилтрансфераз S-аденозилметионин (SAM) служит в качестве кофактора и донорной метильной группы. [1] [5] [6] [7]
Геномная ДНК эукариот ассоциируется с гистонами, образуя хроматин . [8] Уровень уплотнения хроматина в значительной степени зависит от метилирования гистонов и других посттрансляционных модификаций гистонов. [9] Метилирование гистонов является основной эпигенетической модификацией хроматина [9] , которая определяет экспрессию генов, геномную стабильность, созревание стволовых клеток, развитие клеточной линии, генетический импринтинг, метилирование ДНК и митоз клеток. [2]
Класс лизин-специфических гистоновых метилтрансфераз подразделяется на SET-домен-содержащие и не-SET-домен-содержащие. Как указано в их названиях, они отличаются наличием SET-домена, который является типом белкового домена.
Гены человека, кодирующие белки с активностью гистонметилтрансферазы, включают:
Структуры, участвующие в активности метилтрансферазы, — это домен SET (состоящий приблизительно из 130 аминокислот), домены pre-SET и post-SET. Домены pre-SET и post-SET фланкируют домен SET с обеих сторон. Область pre-SET содержит остатки цистеина, которые образуют треугольные цинковые кластеры, прочно связывая атомы цинка и стабилизируя структуру. Сам домен SET содержит каталитическое ядро, богатое β-тяжами, которые, в свою очередь, составляют несколько областей β-слоев. Часто β-тяжи, обнаруженные в домене pre-SET, будут образовывать β-слои с β-тяжами домена SET, что приводит к небольшим изменениям в структуре домена SET. Эти небольшие изменения изменяют специфичность целевого остатка для метилирования и позволяют метилтрансферазам домена SET нацеливаться на множество различных остатков. Это взаимодействие между доменом pre-SET и каталитическим ядром имеет решающее значение для функции фермента. [1]
Для того чтобы реакция могла произойти, S-аденозилметионин (SAM) и остаток лизина субстратного гистона должны быть сначала связаны и правильно ориентированы в каталитическом кармане домена SET. Затем близлежащий остаток тирозина депротонирует ε-аминогруппу остатка лизина. [10] Затем цепь лизина совершает нуклеофильную атаку на метильную группу на атоме серы молекулы SAM, перенося метильную группу на боковую цепь лизина.
Вместо SET, не-SET-содержащая домен гистоновая метилтрансфераза использует фермент Dot1. В отличие от домена SET, который нацелен на лизиновый хвостовой участок гистона, Dot1 метилирует остаток лизина в глобулярном ядре гистона и является единственным ферментом, который, как известно, делает это. [1] Возможный гомолог Dot1 был обнаружен в археях, которые в недавних исследованиях продемонстрировали способность метилировать архейный гистоноподобный белок.
N-конец Dot1 содержит активный сайт. Петля, служащая сайтом связывания для SAM, связывает N-концевой и C-концевой домены каталитического домена Dot1. C-конец важен для субстратной специфичности и связывания Dot1, поскольку этот регион несет положительный заряд, что обеспечивает благоприятное взаимодействие с отрицательно заряженным остовом ДНК. [11] Из-за структурных ограничений Dot1 способен метилировать только гистон H3.
Существует три различных типа протеинаргининметилтрансфераз (PRMT) и три типа метилирования, которые могут происходить в остатках аргинина на хвостах гистонов. Первый тип PRMT ( PRMT1 , PRMT3 , CARM1 ⧸PRMT4 и Rmt1⧸Hmt1) производит монометиларгинин и асимметричный диметиларгинин (Rme2a). [12] [13] [14] Второй тип (JBP1⧸ PRMT5 ) производит монометил или симметричный диметиларгинин (Rme2s). [5] Третий тип (PRMT7) производит только монометилированный аргинин. [15] Различия в паттернах метилирования PRMT возникают из-за ограничений в кармане связывания аргинина. [5]
Каталитический домен PRMT состоит из домена связывания SAM и домена связывания субстрата (всего около 310 аминокислот). [5] [6] [7] Каждый PRMT имеет уникальную N-концевую область и каталитическое ядро. Остаток аргинина и SAM должны быть правильно ориентированы внутри кармана связывания. SAM закреплен внутри кармана гидрофобным взаимодействием между адениновым кольцом и фенильным кольцом фенилаланина. [7]
Глутамат на соседней петле взаимодействует с азотами на целевом остатке аргинина. Это взаимодействие перераспределяет положительный заряд и приводит к депротонированию одной азотной группы, [16] которая затем может совершить нуклеофильную атаку на метильную группу SAM. Различия между двумя типами PRMT определяют следующий шаг метилирования: либо катализируя диметилирование одного азота, либо допуская симметричное метилирование обеих групп. [5] Однако в обоих случаях протон, отделенный от азота, рассеивается через систему протонного реле гистидина-аспартата и высвобождается в окружающую матрицу. [17]
Метилирование гистонов играет важную роль в эпигенетической регуляции генов . Метилированные гистоны могут либо подавлять, либо активировать транскрипцию, как показывают различные экспериментальные данные, в зависимости от места метилирования. Например, вероятно, что метилирование лизина 9 на гистоне H3 (H3K9me3) в промоторной области генов предотвращает чрезмерную экспрессию этих генов и, следовательно, задерживает переход клеточного цикла и/или пролиферацию. [18] Напротив, метилирование остатков гистонов H3K4, H3K36 и H3K79 связано с транскрипционно активным эухроматином. [2]
В зависимости от места и симметрии метилирования метилированные аргинины считаются активирующими (гистон H4R3me2a, H3R2me2s, H3R17me2a, H3R26me2a) или репрессивными (H3R2me2a, H3R8me2a, H3R8me2s, H4R3me2s) гистоновыми метками. [15] Как правило, эффект гистонметилтрансферазы на экспрессию генов сильно зависит от того, какой остаток гистона она метилирует. См. Гистон#Регулирование хроматина .
Аномальная экспрессия или активность ферментов, регулирующих метилирование, была отмечена в некоторых типах рака у человека, что предполагает связь между метилированием гистонов и злокачественной трансформацией клеток или образованием опухолей. [18] В последние годы эпигенетическая модификация гистоновых белков, особенно метилирование гистона H3, при развитии рака стала областью новых исследований. В настоящее время общепризнано, что в дополнение к генетическим аберрациям рак может быть инициирован эпигенетическими изменениями, при которых экспрессия генов изменяется без геномных аномалий. Эти эпигенетические изменения включают потерю или увеличение метилирования как в ДНК, так и в гистоновых белках. [18]
Пока нет убедительных доказательств того, что рак развивается исключительно из-за аномалий в метилировании гистона или его сигнальных путях, однако они могут быть способствующим фактором. Например, снижение метилирования лизина 9 на гистоне 3 (H3K9me3) наблюдалось при нескольких типах рака человека (таких как колоректальный рак, рак яичников и рак легких), которые возникают либо из-за дефицита метилтрансфераз H3K9, либо из-за повышенной активности или экспрессии деметилаз H3K9. [18] [19] [20]
Метилирование гистонового лизина играет важную роль в выборе пути восстановления двухцепочечных разрывов ДНК . [21] Например, триметилированный H3K36 необходим для гомологичной рекомбинационной репарации, тогда как диметилированный H4K20 может привлекать белок 53BP1 для восстановления путем негомологичного соединения концов .
Гистонметилтрансфераза может быть использована в качестве биомаркера для диагностики и прогнозирования рака. Кроме того, все еще остается много вопросов о функции и регуляции гистонметилтрансфераз при злокачественной трансформации клеток, канцерогенезе ткани и опухолеобразовании. [18]