Нейролигины ( NLGN ), мембранный белок типа I , являются белком клеточной адгезии на постсинаптической мембране, который опосредует образование и поддержание синапсов между нейронами . Нейролигины действуют как лиганды для β-нейрексинов , которые являются белками клеточной адгезии, расположенными пресинаптически. Нейролигины и β-нейрексин «пожимают руки», что приводит к соединению между двумя нейронами и образованию синапса. [2] Нейролигины также влияют на свойства нейронных сетей, определяя синаптические функции, и они опосредуют передачу сигналов путем рекрутирования и стабилизации ключевых синаптических компонентов. Нейролигины взаимодействуют с другими постсинаптическими белками для локализации рецепторов и каналов нейротрансмиттеров в постсинаптической плотности по мере созревания клетки. [3] Кроме того, нейролигины экспрессируются в периферических тканях человека и, как было обнаружено, играют роль в ангиогенезе . [4] У людей изменения в генах, кодирующих нейролигины, связаны с аутизмом и другими когнитивными расстройствами . [5] Антитела у матери от предыдущих мужских беременностей против нейролигина 4 из Y-хромосомы увеличивают вероятность гомосексуализма у потомства мужского пола.
Нейролигины связываются с помощью Ca 2+ с доменами LNS α-нейрексина (ламинин, нейрексин и связывающие половые гормоны глобулин-подобные складчатые единицы) и с доменом LNS β-нейрексина, который затем устанавливает гетерофильный транссинаптический код распознавания. [6] Благодаря наблюдению за кристаллической структурой нейролигина-1 было установлено, что нейролигин-1 образует белковый димер , когда два мономера нейрексина-1 бета связываются с двумя противоположными поверхностями нейролигина-1. Это образует гетеротетрамер, который содержит интерфейс для связывания Ca 2+ . Взаимодействие нейролигина и нейрексина с образованием гетеротетрамера отслеживается альтернативно сплайсированными сайтами, расположенными вблизи интерфейса связывания для Ca 2+ как в нейролигине-1, так и в нейрексине-1 бета. [7] Впоследствии присутствие собственных димеров нейролигина было подтверждено в нейронах с помощью биохимического обнаружения , которое включало гетеродимеры, состоящие из различных видов нейролигина, [8] увеличивая потенциальную гетерогенность комплексов димеров эндогенного ядра нейролигина.
Внеклеточный домен NLGN в основном состоит из области, гомологичной ацетилхолинэстеразам , но аминокислоты , важные для катализа в AChE, не сохраняются в NLGN, которые не обладают эстеразной активностью. Более того, эта гомологичная AChE область имеет решающее значение для правильного функционирования NLGN. [2]
Нейролигины были обнаружены как у позвоночных, так и у беспозвоночных, включая людей, грызунов, кур, Drosophila melanogaster , Caenorhabditis elegans , медоносных пчел и Aplysia . У мышей и крыс обнаружено три гена для экспрессии нейролигина, в то время как у людей экспрессируется пять генов. [9] Дрозофилы экспрессируют четыре гена, медоносные пчелы экспрессируют пять генов, а C. elegans и Aplysia экспрессируют один ген для нейролигина. [10]
Известные гены нейролигина у Homo sapiens включают NLGN1 , NLGN2 , NLGN3 , NLGN4X и NLGN5 (также известный как NLGN4Y). Было обнаружено, что каждый ген оказывает уникальное влияние на синаптическую передачу.
Экспрессия нейролигинов может различаться у разных видов. Нейролигин 1 экспрессируется в ЦНС в возбуждающих синапсах. У людей экспрессия нейролигина 1 низкая до рождения и увеличивается между 1-8 днями после рождения и остается высокой в течение всей взрослой жизни. Это постнатальное увеличение во время активного синаптогенеза соответствует повышенной экспрессии постсинаптического плотного белка-95 (PSD-95). Нейролигин 2 в основном концентрируется в ингибирующих синапсах в ЦНС, но у мышей и людей он также может экспрессироваться в таких тканях, как поджелудочная железа, легкие, эндотелий, матка и толстая кишка. Нейролигин 3 экспрессируется в нейронах ЦНС, а также в различных глиальных клетках у мышей и крыс и в мозге, сердце, скелетных мышцах, плаценте и поджелудочной железе у людей. Нейролигин 4X экспрессируется в сердце, печени, скелетных мышцах, поджелудочной железе и в низких концентрациях в мозге. Нейролигин 5 (или 4Y), расположенный на хромосоме Y, отличается от нейролигина 4X всего 19 аминокислотами. [9] мРНК нейролигина присутствует в эндотелиальных клетках человека из крупных кровеносных сосудов [11] и в ганглиях задних корешков . [12]
Альтернативный сплайсинг , модификация, которая происходит после транскрипции мРНК, регулирует селективность связывания нейролигинов с α- или β-нейрексинами, а также функцию синапсов. Альтернативный сплайсинг в нейролигинах происходит в основном функциональном домене, гомологичном ацетилхолинэстеразе регионе. [13] Поскольку нейролигин имеет два консервативных сайта сплайсинга в этом регионе, сайты A и B, для каждого гена нейролигина возможно до четырех различных изоформ . [9] Нейрексины также подвергаются альтернативному сплайсингу, и определенные варианты сплайсинга нейролигинов и нейрексинов более селективны друг для друга. Специфическое спаривание вариантов сплайсинга также влияет на синаптическую функцию. Например, нейролигины, лишенные вставки сплайсинга B, и β-нейрексины со вставкой S4 способствуют дифференциации ингибирующих, ГАМКергических синапсов. С другой стороны, нейролигины со вставкой B и β-нейрексины без вставки S4 способствуют дифференциации возбуждающих глутаматергических синапсов. Вставка A может способствовать локализации нейролигина и функционированию в ингибирующих синапсах, но механизмы неизвестны. [13]
Нейрексин и нейролигин работают вместе, чтобы собирать и поддерживать компоненты цитоскелета , необходимые для локализации синаптических везикул. Нейрексин необходим для содержания потенциалзависимых каналов Ca 2+ , которые требуются для высвобождения везикул, в то время как нейролигин связывает нейрексин, чтобы локализовать необходимые рецепторы нейротрансмиттеров и белки для постсинаптической специализации. На постсинаптическом участке нейролигины связаны со специализированными белками, которые стимулируют специфические рецепторы нейротрансмиттеров и каналы для плотного занятия специализированных областей постсинаптического окончания во время созревания синапса. Поскольку все развивающиеся синапсы содержат нейрексины и нейролигины, развивающиеся клетки могут устанавливать множество различных связей с другими клетками. [3]
Нейролигина достаточно для формирования новых функциональных пресинаптических окончаний in vitro. [9] Однако данные свидетельствуют о том, что дополнительные молекулы адгезии, такие как иммуноглобулиновый домен и белки семейства кадгеринов, опосредуют начальный контакт между аксонами и дендритами для синапса. Нейрексины и нейролигины затем усиливают контакт. [13]
В дополнение к селективности вариантов сплайсинга, уровни нейролигинов, нейрексинов и других взаимодействующих белков, присутствующих на пре- и постсинаптических мембранах, влияют на дифференциацию и баланс синапсов. Поскольку синапсы формируются во время синаптогенеза , они дифференцируются в одну из двух категорий: возбуждающие или тормозные. Возбуждающие синапсы увеличивают вероятность запуска потенциала действия в постсинаптическом нейроне и часто являются глутаматергическими , или синапсами, в которых высвобождается нейротрансмиттер глутамат. Тормозящие синапсы уменьшают вероятность запуска потенциала действия в постсинаптическом нейроне и часто являются ГАМКергическими , в которых высвобождается нейротрансмиттер ГАМК. Особенно во время раннего развития нейроны должны получать соответствующий баланс возбуждающего и тормозного синаптического входа, называемый соотношением E/I. Фактически, дисбаланс в соотношении E/I, как полагают, связан с расстройствами аутистического спектра. [14]
Нейролигин 1 локализуется в возбуждающих синапсах, нейролигин 2 — в тормозных синапсах, а нейролигин 3 — в обоих. Снижение уровней нейролигинов 1, 2 и 3 приводит к сильному снижению тормозного входа, но небольшому снижению возбуждающего входа. [13] Кроме того, нейролигины взаимодействуют с PSD-95 , внутриклеточным белком, который закрепляет синаптические белки в постсинаптической плотности возбуждающих синапсов, и гефирином , соответствующим белком-каркасом тормозных постсинапсов. [15] Кроме того, нейролигин 2 и 4 специфически взаимодействуют с коллибистином, белком, который регулирует локализацию гефирина. Уровень PSD-95, по-видимому, влияет на баланс возбуждающих и тормозных входов. Увеличение соотношения PSD-95 к нейролигину привело к увеличению соотношения E/I, а уменьшение соотношения PSD-95/нейролигин имело противоположный эффект. [14] Кроме того, повышенная экспрессия PSD-95 перенаправляет нейролигин-2 из возбуждающих в тормозные синапсы, усиливая возбуждающий вход и снижая тормозной вход. [13] Эти взаимодействия нейролигина, нейрексина и взаимодействующих белков, таких как PSD-95, указывают на потенциальный регуляторный механизм, который контролирует развитие и баланс возбуждающих и тормозных синапсов, регулируемых гомеостатическими механизмами обратной связи. [14]
Дисфункция нейролигина связана с расстройствами аутистического спектра . У пациентов с РАС были обнаружены различные генетические изменения в генах нейролигина, включая точечные мутации , миссенс-мутации и внутренние делеции . [11] В исследованиях, проведенных на членах семьи с Х-сцепленным аутизмом, были выявлены специфические мутации NLGN3 и NLGN4. Было показано, что эти мутации влияют на функционирование нейролигинов и мешают синаптической передаче. 19 из 69 известных белков, мутировавших при Х-сцепленном аутизме, кодируют постсинаптические белки, включая нейролигины.
Кроме того, материнские антитела против нейролигина Y-хромосомы NLGN4Y участвуют в развитии мужской гомосексуальности у плода. [16]
Был клонирован мутировавший ген NLGN3, R451C. Было показано, что мутант вызывает дефектный транспорт нейролигина и задержку мутантного белка в эндоплазматическом ретикулуме . [17] Небольшое количество мутантного белка, достигшее клеточной мембраны, продемонстрировало сниженную связывающую активность для нейрексина-1, что согласуется с потерей функции. [18] Мутантный ген был клонирован и введен мышам, что привело к нарушению социальных взаимодействий, улучшению способностей к пространственному обучению и увеличению ингибиторной синаптической передачи. Удаление NLGN3 не вызвало этих эффектов, таким образом указывая, что R451C является мутацией с приобретением функции. Это подтверждает утверждение о том, что повышенная ингибиторная синаптическая передача может способствовать расстройствам аутистического спектра у человека. [19]
Мутации в NLGN4 также были обнаружены у людей с Х-сцепленным аутизмом. Было обнаружено, что мутация сдвига рамки считывания 1186T вызывает ранний стоп-кодон и преждевременное усечение белка. Эта мутация приводит к внутриклеточной задержке мутантных белков, что может привести к нарушению функции молекулы адгезии синаптических клеток [17] и изменению связывания белка нейролигина с его пресинаптическими партнерами, нейрексинами, тем самым прерывая важную синаптическую функцию. [20] Другие мутации NLGN4, обнаруженные в связи с расстройствами аутистического спектра, включают делецию 2-bp, 1253delAG, в гене NLGN4, которая вызывает сдвиг рамки считывания и преждевременный стоп-кодон. [21] Другая мутация — гемизиготная делеция в гене NLGN4, охватывающая экзоны 4, 5 и 6. Было предсказано, что делеция 757 кб приведет к значительному укорочению белка. [22]