Радиоиммуноанализ ( РИА ) — это иммуноанализ , который использует радиоактивно меченые молекулы в поэтапном формировании иммунных комплексов . РИА — это очень чувствительный метод анализа in vitro , используемый для измерения концентраций веществ, обычно измеряющий концентрации антигенов (например, уровни гормонов в крови ) с использованием антител .
Хотя метод RIA чрезвычайно чувствителен и крайне специфичен , требуя специализированного оборудования, он остается одним из наименее дорогих методов для выполнения таких измерений. Он требует специальных мер предосторожности и лицензирования, поскольку используются радиоактивные вещества. [ необходима цитата ]
Напротив, иммунорадиометрический анализ (ИРМА) представляет собой иммуноанализ, в котором используются радиоактивно меченые молекулы, но не поэтапно, а немедленно.
Радиоаллергосорбентный тест (РАСТ) является примером радиоиммунологического анализа. Он используется для выявления аллергена , вызывающего аллергию .
Классически, для проведения радиоиммуноанализа известное количество антигена делается радиоактивным , часто путем маркировки его гамма-радиоактивными изотопами йода , такими как 125-I , или тритием [1], присоединенными к тирозину . Затем этот радиоактивно меченый антиген смешивается с известным количеством антител для этого антигена, и в результате они специфически связываются друг с другом. Затем добавляется образец сыворотки пациента, содержащий неизвестное количество того же антигена. Это заставляет немеченый (или «холодный») антиген из сыворотки конкурировать с радиоактивно меченым антигеном («горячим») за сайты связывания антитела. По мере увеличения концентрации «холодного» антигена все больше его связывается с антителом, вытесняя радиоактивно меченый вариант и снижая соотношение связанного с антителом радиоактивно меченого антигена к свободному радиоактивно меченому антигену. Затем связанные антигены разделяются, и радиоактивность свободного (несвязанного) антигена, оставшегося в супернатанте, измеряется с помощью гамма-счетчика . Затем это значение сравнивается со стандартизированной калибровочной кривой для определения концентрации немеченого антигена в образце сыворотки пациента. [2] РИА могут обнаружить несколько пикограмм аналита в экспериментальных пробирках, если использовать антитела с высокой аффинностью. [1]
Этот метод может быть использован для любой биологической молекулы в принципе и не ограничивается сывороточными антигенами, и не требуется использовать косвенный метод измерения свободного антигена вместо прямого измерения захваченного антигена. Например, если нежелательно или невозможно пометить радиоактивным изотопом интересующий антиген или целевую молекулу, можно провести РИА, если доступны два разных антитела, которые распознают мишень, и мишень достаточно велика (например, белок), чтобы представить несколько эпитопов антителам. Одно антитело будет помечено радиоактивным изотопом, как указано выше, в то время как другое останется немодифицированным. РИА начнется с того, что «холодному» немеченому антителу позволят взаимодействовать и связываться с целевой молекулой в растворе. Предпочтительно, чтобы это немеченое антитело было каким-то образом иммобилизовано, например, связано с агарозным шариком, покрыто поверхностью и т. д. Затем «горячему» радиоактивно меченому антителу позволяют взаимодействовать с первым комплексом антитело-целевая молекула. После обширной промывки измеряется прямое количество связанного радиоактивного антитела и количество целевой молекулы количественно определяется путем сравнения его с контрольным количеством, анализируемым в то же время. Этот метод в принципе похож на нерадиоактивный метод сэндвич- ELISA . [3]
Этот метод был разработан Соломоном Берсоном и Розалин Сассман Ялоу в госпитале Управления по делам ветеранов в Бронксе , Нью-Йорк. [4] [5] Это революционное развитие принесло доктору Ялоу Нобелевскую премию по медицине в 1977 году, став второй женщиной, когда-либо ее получившей. [6] В своей благодарственной речи доктор Ялоу сказала: «Мир не может позволить себе потерю талантов половины своего населения, если мы хотим решить многочисленные проблемы, которые нас преследуют». [7] Ялоу разделила Нобелевскую премию с Роджером Гийеменом и Эндрю Шалли , которые получили премию на основе своих исследований в области «производства пептидных гормонов мозгом». [6]
этапы в радиоиммунологическом методе