Тест на индол — это биохимический тест, проводимый на бактериальных видах для определения способности организма преобразовывать триптофан в индол . Это разделение осуществляется цепочкой различных внутриклеточных ферментов , системой, обычно называемой « триптофаназой ». [ требуется цитата ]
Индол образуется путем восстановительного дезаминирования из триптофана через промежуточную молекулу индолпировиноградной кислоты. Триптофаназа катализирует реакцию дезаминирования, в ходе которой удаляется аминная (-NH 2 ) группа молекулы триптофана. Конечными продуктами реакции являются индол, пировиноградная кислота , аммоний (NH 4 + ) и энергия. Пиридоксальфосфат требуется в качестве кофермента .
Как и во многих биохимических тестах на бактериях, результаты теста на индол определяются изменением цвета после реакции с добавленным реагентом.
Чистую бактериальную культуру необходимо выращивать в стерильном триптофановом или пептонном бульоне в течение 24–48 часов перед проведением теста. После инкубации в культуральный бульон добавляют пять капель реагента Ковача ( изоамиловый спирт , пара-диметиламинобензальдегид , концентрированная соляная кислота ).
Положительный результат проявляется в наличии красного или красновато-фиолетового цвета в поверхностном спиртовом слое бульона. Отрицательный результат проявляется в желтом цвете. Также может возникнуть переменный результат, показывающий оранжевый цвет. Это связано с присутствием скатола , также известного как метилиндол или метилированный индол, еще одного возможного продукта деградации триптофана.
Положительный красный цвет образуется в результате ряда реакций. Пара-диметиламинобензальдегид реагирует с индолом, присутствующим в среде, образуя красный краситель розиндол. Изоамиловый спирт образует комплекс с красителем розиндол, что приводит к его осаждению . Оставшийся спирт и осадок затем поднимаются на поверхность среды.
Разновидность этого теста с использованием реагента Эрлиха (использующего этиловый спирт вместо изоамилового спирта, разработанного Паулем Эрлихом ) применяется при проведении теста на неферментирующих и анаэробных микроорганизмах .
Бактерии, дающие положительный результат на расщепление индола из триптофана, включают: Aeromonas hydrophila , Aeromonas punctata , Bacillus alvei , Edwardsiella sp., Escherichia coli , Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae , Klebsiella oxytoca , Proteus sp. (не P. mirabilis и P. penneri ), Plesiomonas shigelloides , Pasteurella multocida , Pasteurella pneumotropica , Vibrio sp. и Lactobacillus reuteri .
Бактерии, которые дают отрицательные результаты в тесте на индол, включают: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida , Alcaligenes sp., большинство Bacillus sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., большинство Haemophilus sp., большинство Klebsiella sp., Neisseria sp., Mannheimia haemolytica , Pasteurella ureae , Proteus mirabilis , P. penneri , Pseudomonas sp., Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp. и Rhizobium sp.
Тест на индол — один из четырех тестов серии IMViC , который проверяет наличие кишечной бактерии. Другие три теста включают: тест с метиловым красным [M], тест Фогеса-Проскауэра [V] и тест с цитратом [C]. [1]