Расширение Poly(A) Test (ePAT) описывает метод определения длины поли(A)-хвоста молекул мРНК . Он был разработан и описан А. Янике и др. в 2012 году.
Метод состоит из трех отдельных этапов: на первом этапе полиаденилированная РНК гибридизуется с ДНК- олигонуклеотидом, содержащим полидезокситимидиновую последовательность на 5'-конце. Затем полимераза Кленова катализирует удлинение 3'-конца мРНК, используя ДНК-олигонуклеотид в качестве матрицы. Эта реакция происходит при 25 °C. На втором этапе синтез обратной транскриптазы удлиняет ДНК-олигонуклеотиды, которые отжигаются до удлиненного 3'-конца мРНК. Для того чтобы гарантировать, что ДНК-олигомеры, гибридизованные с внутренними последовательностями поли(А), не служат праймерами для обратной транскрипции, второй этап проводится при 55 °C. Третий и последний этап включает амплификацию вновь синтезированной кДНК с помощью ПЦР . Для этой ПЦР требуется один ген-специфический и один универсальный праймер. Анализ длины ампликонов позволяет оценить последовательность, фланкированную двумя праймерами, т.е. длину поли(А)-хвоста образца мРНК.
По мнению авторов, измерение длины поли(А)-хвостов и их распределение среди различных транскриптов позволяет использовать этот метод для определения состояния трансляции клетки вместо более утомительного анализа состояний трансляции белка. [1]