Окрашивание трихромом — это метод гистологического окрашивания , в котором используются два или более кислотных красителя в сочетании с поликислотой . Окрашивание дифференцирует ткани, окрашивая их в контрастные цвета. Он увеличивает контрастность микроскопических особенностей клеток и тканей , благодаря чему их легче увидеть при просмотре через микроскоп .
Слово трихром означает «три цвета». Первым протоколом окрашивания, который был описан как «трихром», было окрашивание трихромом по Мэллори , которое дифференциально окрашивало эритроциты в красный цвет, мышечную ткань в красный цвет и коллаген в синий цвет. Некоторые другие протоколы трихромного окрашивания — это трихромное окрашивание Массона , трихромное окрашивание Лилли и трихромное окрашивание Гёмёри .
Без трихромного окрашивания отличить один признак от другого может быть крайне сложно. Гладкую мышечную ткань , например, трудно отличить от коллагена. Окрашивание трихромом может окрасить мышечную ткань в красный цвет, а коллагеновые волокна в зеленый или синий цвет. Биопсии печени могут содержать тонкие коллагеновые волокна между клетками печени, и количество коллагена можно оценить на основе метода окрашивания. Трихромные методы в настоящее время используются, среди прочего, для дифференциации мышц от коллагена, альфа-клеток гипофиза от бета-клеток, фибрина от коллагена и митохондрий в свежезамороженных срезах мышц, а также для других целей. Это помогает выявить увеличение коллагеновой ткани (т. е. фиброзные изменения), например, при циррозе печени , и отличить опухоли, возникающие из мышечных клеток и фибробластов. [1]
В технике трихромного окрашивания используются два или более кислотных красителя . Обычно кислотные красители окрашивают одни и те же основные белки, но, применяя их последовательно, можно манипулировать схемой окрашивания. Поликислота (например, фосфорномолибденовая кислота или фосфорновольфрамовая кислота ) используется для избирательного удаления красителя. Считается, что поликислоты ведут себя как красители с высокой молекулярной массой : они вытесняют легко удаляемый краситель из коллагена. [ нужна цитата ]
Обычно сначала наносят красный краситель в разбавленной уксусной кислоте, чтобы прокрасить все компоненты. Затем наносится поликислота, удаляющая красный краситель из коллагена и некоторых других компонентов методом вытеснения. Наносится второй кислотный краситель (синий или зеленый) в разбавленной уксусной кислоте, который, в свою очередь, вытесняет поликислоту, в результате чего коллаген окрашивается в цвет, контрастирующий с используемым исходным красителем. Если необходимо окрасить эритроциты, перед окрашиванием красным красителем наносят желтый или оранжевый краситель с небольшой молекулярной массой. Обычно его применяют из насыщенного раствора в 80% этаноле и часто в сочетании с пикриновой кислотой (которая сама по себе является красителем) и поликислотой. В методах используются незначительные различия в реакции тканей на красители, плотности, доступности и так далее. [ нужна цитата ]
Трихромные красители, при которых красители и поликислота наносятся последовательно, называются многоступенчатыми трихромами . В «одноэтапных» методах все красители — с поликислотой или без нее — объединяются в одном растворе. Одним из старейших одноэтапных подходов к окрашиванию трихромом является метод Ван Гисона, при котором мышцы и цитоплазма окрашиваются в желтый цвет, а коллаген — в красный. Другой вариант — трехцветное окрашивание Гёмёри , которое очень похоже на трихромное окрашивание Массона. При методе «желтого растворения» сначала наносится красный краситель в разбавленной уксусной кислоте, затем срез очень тщательно обезвоживается, чтобы не осталось влаги. Затем красный краситель заменяется желтым красителем в растворителе, например целлозольве (2-этоксиэтанол). Название «желтый раствор» представляет собой смесь терминов «желтый» и «целлосольв» . Флоксин-тартразин Лендрума для клеточных включений является одним из примеров окрашивания желтым раствором. [ нужна цитата ]
Среди красителей, используемых для трихромного окрашивания, выделяют:
СМИ, связанные с окрашиванием трихромом, на Викискладе?