stringtranslate.com

Электроэлюция

Оборудование для биоаналитического гель-электрофореза с непрерывным элюированием : камера для электрофореза, перистальтический насос , коллектор фракций, насос рециркуляции буфера и УФ-детектор холодильнике ), блок питания и регистратор (на столе). [1]

Электроэлюция — это метод, используемый для извлечения образца нуклеиновой кислоты или белка из электрофорезного геля путем подачи отрицательного тока в плоскость наименьшего измерения геля, вытягивая макромолекулу на поверхность для извлечения и последующего анализа. [2] Например, электроблоттинг и препаративный нативный ПААГ основаны на одном и том же принципе . [3] [4]

Извлечение ДНК

Используя этот метод, фрагменты ДНК могут быть извлечены из определенной области агарозного или полиакриламидного геля. Кусок геля, содержащий фрагмент, вырезается (вырезается из всего геля) и помещается в диализный мешок с буфером . Электрофорез заставляет ДНК мигрировать из геля в буфер диализного мешка. Фрагменты ДНК извлекаются из этого буфера и очищаются с помощью экстракции фенолом-хлороформом с последующим осаждением этанолом . Этот метод прост, быстр и обеспечивает высокую степень извлечения (75%) фрагментов ДНК из кусочков геля. [3]

Извлечение белка

Белки непрерывно элюируются из гелевой колонки и разделяются на различные фракции в соответствии с их изоэлектрической точкой . [1] Препаративный нативный ПААГ обеспечивает более 95% восстановления металлопротеинов . [4]

Ссылки

  1. ^ ab Kastenholz B, Garfin DE (2010). "Выделение кислых, основных и нейтральных металлопротеинов методом QPNC-PAGE" (PDF) . Nature Precedings : 1–4. doi : 10.1038/npre.2010.4617.1 .
  2. ^ Seelert H, Krause F (2008). «Препаративная изоляция белковых комплексов и других биочастиц путем элюирования из полиакриламидных гелей». Электрофорез . 29 (12): 2617–36. doi :10.1002/elps.200800061. PMID  18494038. S2CID  35874355.
  3. ^ ab Zarzosa-Álvarez, Ana L.; et al. (2010). "Электроэлюирование фрагментов ДНК". Journal of Visualized Experiments . 43 (43): 2136. doi :10.3791/2136. PMC 3157863. PMID 20834225  . 
  4. ^ ab Kastenholz, B (2004). «Препаративный нативный непрерывный электрофорез в полиакриламидном геле (PNC-PAGE): эффективный метод выделения кофакторов кадмия в биологических системах». Analytical Letters . 37 (4). Informa UK Limited: 657–665. doi : 10.1081/al-120029742. ISSN  0003-2719. S2CID  97636537.