Биохимическая потребность в кислороде (также известная как БПК или биологическая потребность в кислороде ) — это аналитический параметр , представляющий количество растворенного кислорода (РК), потребляемого аэробными бактериями, растущими на органическом материале, присутствующем в пробе воды при определенной температуре в течение определенного периода времени. Значение БПК чаще всего выражается в миллиграммах кислорода, потребленного на литр образца в течение 5 дней инкубации при 20 °C, и часто используется как показатель степени загрязнения воды органическими веществами . [1]
Снижение биохимической потребности в кислороде (БПК) используется в качестве показателя эффективности очистных сооружений. БПК сточных вод используется для обозначения кратковременного воздействия на уровень кислорода в принимающей воде.
Анализ БПК аналогичен по функциям анализу химического потребления кислорода (ХПК), поскольку оба метода измеряют количество органических соединений в воде. Однако анализ ХПК менее конкретен, поскольку он измеряет все, что может быть химически окислено, а не только уровни биологически окисленного органического вещества.
Большинство природных вод содержат небольшое количество органических соединений. Водные микроорганизмы научились использовать некоторые из этих соединений в пищу . Микроорганизмы, живущие в насыщенных кислородом водах, используют растворенный кислород для окислительного разложения органических соединений, высвобождая энергию , которая используется для роста и размножения . Популяции этих микроорганизмов имеют тенденцию увеличиваться пропорционально количеству доступной пищи. Этот микробный метаболизм создает потребность в кислороде, пропорциональную количеству органических соединений, полезных в пищу. При некоторых обстоятельствах микробный метаболизм может потреблять растворенный кислород быстрее, чем атмосферный кислород может растворяться в воде или производиться автотрофным сообществом (водорослями, цианобактериями и макрофитами). Рыбы и водные насекомые могут погибнуть, когда кислород истощается в результате микробного метаболизма. [2]
Биохимическая потребность в кислороде — это количество кислорода, необходимое для микробного метаболизма органических соединений в воде. Эта потребность возникает в течение некоторого переменного периода времени в зависимости от температуры, концентрации питательных веществ и ферментов, доступных местным микробным популяциям. Количество кислорода, необходимое для полного окисления органических соединений до углекислого газа и воды в результате поколений микробного роста, гибели, распада и каннибализма, представляет собой общую биохимическую потребность в кислороде (общий БПК). Общий БПК имеет большее значение для пищевых сетей , чем для качества воды . Истощение растворенного кислорода, скорее всего, станет очевидным во время первоначального взрыва популяции водных микробов в ответ на большое количество органического материала. Однако если микробная популяция дезоксигенирует воду, этот недостаток кислорода ограничивает рост популяции аэробных водных микробных организмов, что приводит к долгосрочному избытку пищи и дефициту кислорода. [3]
Стандартная температура, при которой следует проводить тестирование БПК, была впервые предложена Королевской комиссией по удалению сточных вод в ее восьмом отчете в 1912 году:
(c) Сточные воды, чтобы соответствовать общему стандарту, не должны содержать при сбросе более 3 частей на 100 000 взвешенных веществ, а с включенными в них взвешенными веществами не должны поглощаться при температуре 65°F более 2,0 частей на 100 000 растворенных веществ. кислорода через 5 дней. Этот общий стандарт должен быть установлен либо Статутом, либо приказом Центрального органа и может быть изменен этим органом через интервал не менее десяти лет.
Позже это было стандартизировано до 68 ° F, а затем до 20 ° C. Эта температура может существенно отличаться от температуры естественной среды испытуемой воды.
Хотя Королевская комиссия по удалению сточных вод предложила 5 дней в качестве адекватного испытательного периода для рек Соединенного Королевства Великобритании и Ирландии , для рек Северной Америки исследовались более длительные периоды . Инкубационные периоды продолжительностью 1, 2, 5, 10 и 20 дней использовались до середины 20 века. [4] Поддерживая доступность растворенного кислорода при выбранной температуре, исследователи обнаружили, что до 99 процентов общего БПК было использовано в течение 20 дней, 90 процентов в течение 10 дней и примерно 68 процентов в течение 5 дней. [5] Переменный сдвиг микробной популяции в сторону нитрифицирующих бактерий ограничивает воспроизводимость теста в течение периодов, превышающих 5 дней. Протокол 5-дневных испытаний с приемлемо воспроизводимыми результатами, в которых особое внимание уделяется углеродистому БПК, был одобрен Агентством по охране окружающей среды США (EPA). Этот 5-дневный результат теста БПК можно описать как количество кислорода, необходимое водным микроорганизмам для стабилизации разлагаемого органического вещества в аэробных условиях. [6] В этом контексте стабилизацию можно воспринимать в общих чертах как превращение пищи в живую водную фауну . Хотя эта фауна будет продолжать испытывать биохимическую потребность в кислороде по мере своей смерти, это, как правило, происходит в более стабильной развитой экосистеме , включая более высокие трофические уровни . [3]
Королевская комиссия по загрязнению рек , созданная в 1865 году, и формирование Королевской комиссии по удалению сточных вод в 1898 году привели к выбору в 1908 году БПК 5 в качестве окончательного теста на органическое загрязнение рек. Пять дней были выбраны в качестве подходящего испытательного периода, поскольку это предположительно самое продолжительное время, которое требуется речной воде для перемещения от источника до устья в Великобритании . В своем шестом отчете Королевская комиссия рекомендовала, чтобы стандартный набор составлял 15 весовых частей на миллион воды. вода. [7] Однако в Девятом отчете комиссия пересмотрела рекомендуемый стандарт:
Путем простого расчета было бы обнаружено, что сточные воды, в которых содержится 2–0 частей растворенного кислорода на 100 000, требуют разбавления как минимум 8 объемами речной воды, занимающими 0,2 части, если полученная смесь не должна занимать более 0,4 части. Наш опыт показал, что в подавляющем большинстве случаев объем речной воды в 8 раз превышает объем сточных вод и что цифра 2–0 частей растворенного кислорода на 100 000, которая, как было доказано на практике, была бы безопасной. цифра, которую следует принять для целей общего стандарта, взятая в сочетании с условием, что сточные воды не должны содержать более 3–0 частей на 100 000 взвешенных твердых веществ. [7]
Это был краеугольный камень 20:30 (БПК: взвешенные вещества) + стандарт полной нитрификации , который использовался в Великобритании в качестве критерия до 1970-х годов для качества сточных вод канализационных сооружений .
Соединенные Штаты включают ограничения на сбросы БПК в свои правила вторичной очистки . Обычно ожидается, что вторичная очистка сточных вод удалит 85 процентов БПК, измеренного в сточных водах, и приведет к концентрации БПК в сточных водах со средним значением за 30 дней менее 30 мг/л и средним значением за 7 дней менее 45 мг/л. Правила также описывают «обработку, эквивалентную вторичной очистке», как удаление 65 процентов БПК и создание концентраций БПК в сточных водах со средним значением за 30 дней менее 45 мг/л и средним значением за 7 дней менее 65 мг/л. [8]
В большинстве нетронутых рек 5-дневный БПК углекислого газа будет ниже 1 мг/л. Умеренно загрязненные реки могут иметь значение БПК в диапазоне от 2 до 8 мг/л. Реки можно считать сильно загрязненными, если значения БПК превышают 8 мг/л. [9] Муниципальные сточные воды , которые эффективно очищаются трехступенчатым процессом, будут иметь значение около 20 мг/л или меньше. Неочищенные сточные воды различаются, но в среднем составляют около 600 мг/л в Европе и всего лишь 200 мг/л в США или там, где наблюдается сильная инфильтрация/приток грунтовых или поверхностных вод . В целом более низкие значения в США объясняются гораздо большим потреблением воды на душу населения, чем в других частях мира. [1]
БПК используется для измерения загрузки отходов на очистные сооружения и для оценки эффективности удаления БПК такими системами очистки.
Винклер опубликовал методологию простой, точной и прямой процедуры анализа растворенного кислорода в 1888 году. [10] С тех пор анализ уровня растворенного кислорода в воде стал ключом к определению поверхностных вод. Метод Винклера по-прежнему остается одним из двух аналитических методов, используемых для калибровки кислородных электродов; другая процедура основана на растворимости кислорода при насыщении в соответствии с законом Генри .
Существует два признанных метода измерения растворенного кислорода для БПК и ряд других методов, которые в настоящее время не признаны на международном уровне в качестве стандартных методов.
Этот стандартный метод признан Агентством по охране окружающей среды и обозначен как Метод 5210B в Стандартных методах исследования воды и сточных вод. [11] Чтобы получить БПК 5 , концентрации растворенного кислорода (РК) в образце должны быть измерены до и после инкубационного периода и соответствующим образом скорректированы с помощью соответствующего коэффициента разбавления образца. Этот анализ проводят с использованием инкубационных бутылей емкостью 300 мл, в которые забуференную воду для разведения дозируют семенными микроорганизмами и хранят в течение 5 дней в темной комнате при температуре 20 ° C, чтобы предотвратить образование DO посредством фотосинтеза. Бутылки традиционно изготавливались из стекла, которое требовало очистки и ополаскивания между пробами. Доступна одноразовая пластиковая бутылка БПК , одобренная SM 5210B, что исключает этот этап. В дополнение к различным разведениям образцов БПК для этой процедуры требуются контрольные растворы воды, контрольные образцы глюкозы-глутаминовой кислоты (ГГК) и контрольные семена. Бланк воды для разбавления используется для подтверждения качества воды для разбавления, которая используется для разбавления других образцов. Это необходимо, поскольку примеси в воде для разбавления могут привести к значительным изменениям результатов. Контроль GGA представляет собой стандартизированный раствор для определения качества семян, в котором рекомендуемая концентрация БПК 5 составляет 198 мг/л ± 30,5 мг/л. Для измерения углеродистого БПК (cBOD) после добавления к образцу воды для разбавления добавляется ингибитор нитрификации. Ингибитор препятствует окислению аммиачного азота, обеспечивающего азотистый БПК (nBOD). При проведении теста БПК 5 принято измерять только cБПК, поскольку потребность в азоте не отражает потребность в кислороде из органических веществ. Это связано с тем, что nBOD образуется при распаде белков, тогда как cBOD образуется при распаде органических молекул.
БПК 5 рассчитывается по формуле:
где:
Этот метод ограничен измерением потребления кислорода только за счет окисления углерода. Окисление аммиака ингибируется.
Пробу хранят в герметичном контейнере, оснащенном датчиком давления . Вещество, поглощающее углекислый газ (обычно гидроксид лития ), добавляется в контейнер выше уровня пробы. Пробу хранят в условиях, идентичных методу разведения. Кислород потребляется, и, поскольку окисление аммиака ингибируется, выделяется углекислый газ. Общее количество газа и, следовательно, давление уменьшаются из-за поглощения углекислого газа. По падению давления электроника датчика рассчитывает и отображает потребленное количество кислорода.
Основными преимуществами этого метода по сравнению с методом разбавления являются:
Альтернативой измерению БПК является разработка биосенсоров, которые представляют собой устройства для обнаружения аналита, сочетающие в себе биологический компонент с физико-химическим компонентом детектора. Ферменты являются наиболее широко используемыми биологическими чувствительными элементами при изготовлении биосенсоров. Их применение в конструкции биосенсоров ограничено утомительным, трудоемким и дорогостоящим методом очистки ферментов. Микроорганизмы представляют собой идеальную альтернативу этим узким местам. [12]
Многие микроорганизмы, полезные для оценки БПК, относительно легко содержать в чистых культурах, выращивать и собирать с небольшими затратами. Более того, использование микробов в области биосенсоров открыло новые возможности и преимущества, такие как простота обращения, подготовки и низкая стоимость устройства. Ряд чистых культур, например Trichosporoncutaneum, Bacillus cereus, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas sp. и т. д. по отдельности, использовались многими работниками для создания биосенсора БПК. С другой стороны, многие рабочие иммобилизовали активный ил или смесь двух или трех видов бактерий на различных мембранах для создания биосенсора БПК. Наиболее часто применялись мембраны из поливинилового спирта, пористые гидрофильные мембраны и др. [13].
Определенный микробный консорциум может быть сформирован путем проведения систематического исследования, т.е. предварительного тестирования выбранных микроорганизмов для использования в качестве посевного материала при БПК-анализе широкого спектра промышленных сточных вод. Такой составленный консорциум может быть иммобилизован на подходящей мембране, т.е. на мембране из заряженного нейлона. Заряженная нейлоновая мембрана подходит для иммобилизации микробов благодаря специфическому связыванию между отрицательно заряженной бактериальной клеткой и положительно заряженной нейлоновой мембраной. Таким образом, преимущества нейлоновой мембраны перед другими мембранами заключаются в следующем: Двойное связывание, т.е. адсорбция и захват, что приводит к более стабильной иммобилизованной мембране. Такие специальные аналитические устройства по БПК на базе микробного консорциума могут найти широкое применение для мониторинга степени концентрации загрязняющих веществ в самых разных промышленных сточных водах за очень короткое время. [13]
Биосенсоры можно использовать для косвенного измерения БПК с помощью быстрого (обычно <30 минут) определения заменителя БПК и соответствующего метода калибровочной кривой (первопроходец Karube et al., 1977). Следовательно, биосенсоры теперь коммерчески доступны, но у них есть несколько ограничений, таких как высокие затраты на техническое обслуживание, ограниченная длина пробега из-за необходимости реактивации и неспособность реагировать на изменение качественных характеристик, что обычно происходит в потоках очистки сточных вод; например, процессы диффузии биоразлагаемого органического вещества в мембрану и различная реакция разных видов микробов, что приводит к проблемам с воспроизводимостью результатов (Praet et al., 1995). Еще одним важным ограничением является неопределенность, связанная с функцией калибровки для перевода заменителя БПК в реальный БПК (Рустум и др. , 2008).
Суррогат БПК 5 был разработан с использованием производного резазурина , который показывает степень поглощения кислорода микроорганизмами для минерализации органических веществ. [14] Перекрестная проверка, выполненная на 109 образцах в Европе и США, показала строгую статистическую эквивалентность результатов обоих методов. [15]
Разработан электрод, основанный на люминесценции фотоактивного химического соединения и тушении этого излучения кислородом. Этот фотофизический механизм тушения описывается уравнением Штерна–Фольмера для растворенного кислорода в растворе: [16]
Определение концентрации кислорода методом гашения люминесценции имеет линейный отклик в широком диапазоне концентраций кислорода и имеет превосходную точность и воспроизводимость. [17]
Разработка аналитического прибора, который использует окислительно-восстановительную (окислительно-восстановительную) химию кислорода в присутствии разнородных металлических электродов, была начата в 1950-х годах. [18] В этом окислительно-восстановительном электроде использовалась кислородопроницаемая мембрана, обеспечивающая диффузию газа в электрохимическую ячейку и определение его концентрации с помощью полярографических или гальванических электродов. Этот аналитический метод чувствителен и точен до уровня растворенного кислорода ± 0,1 мг/л. Калибровка окислительно-восстановительного электрода этого мембранного электрода по-прежнему требует использования таблицы законов Генри или теста Винклера для растворенного кислорода .
Были предложения по автоматизации для быстрого прогнозирования БПК, чтобы его можно было использовать для онлайн-мониторинга и контроля процессов. Например, использование метода компьютерного машинного обучения для быстрого получения выводов о БПК с использованием легко измеряемых параметров качества воды. Такие данные, как скорость потока, химическая потребность в кислороде, аммиак, азот, pH и взвешенные твердые вещества, можно получить напрямую и надежно с помощью онлайн-аппаратных датчиков. При проверке этой идеи измерения этих значений вместе с БПК, которые проводились в течение трех лет, использовались для обучения и тестирования модели прогнозирования. Этот метод может учесть некоторые недостающие данные. Он указал, что такой подход возможен, но требует наличия достаточного количества исторических данных. [19]
До недавнего времени мониторинг БПК в режиме реального времени был недостижим из-за его сложного характера. Недавнее исследование ведущего британского университета обнаружило связь между множеством параметров качества воды, включая электропроводность, мутность, TLF и CDOM. [20] [21] Все эти параметры можно контролировать в режиме реального времени с помощью комбинации традиционных методов (электропроводность через электроды) и новых методов, таких как флуоресценция. Мониторинг триптофанподобной флуоресценции (TLF) успешно использовался в качестве показателя биологической активности и подсчета, особенно с акцентом на Escherichia coli (E. Coli). [22] [21] [23] [24] Мониторинг на основе TLF применим в широком диапазоне сред, включая, помимо прочего, очистные сооружения и пресную воду. Таким образом, произошел значительный сдвиг в сторону комбинированных сенсорных систем, которые могут контролировать параметры и использовать их в режиме реального времени для получения показаний БПК лабораторного качества.
Разработка аналитического прибора, который использует окислительно-восстановительную (окислительно-восстановительную) химию кислорода в присутствии разнородных металлических электродов, была начата в 1950-х годах. [25] В этом окислительно-восстановительном электроде (также известном как датчик растворенного кислорода [26] ) использовалась кислородопроницаемая мембрана, обеспечивающая диффузию газа в электрохимическую ячейку и определение его концентрации с помощью полярографических или гальванических электродов. Этот аналитический метод чувствителен и точен до уровня растворенного кислорода ± 0,1 мг/л. Калибровка окислительно-восстановительного электрода этого мембранного электрода по-прежнему требует использования таблицы законов Генри или теста Винклера для растворенного кислорода .
Метод испытания включает переменные, ограничивающие воспроизводимость. Тесты обычно показывают отклонения от среднего значения на плюс-минус десять-двадцать процентов. [28] : 82
Некоторые отходы содержат химические вещества, способные подавлять микробиологический рост или активность. Потенциальные источники включают промышленные отходы, антибиотики в фармацевтических или медицинских отходах , дезинфицирующие средства на предприятиях пищевой промышленности или коммерческих очистных сооружениях, дезинфекцию хлорированием , используемую после обычной очистки сточных вод, а также составы для контроля запаха, используемые в резервуарах для хранения санитарных отходов в пассажирских транспортных средствах или переносных туалетах. Подавление микробного сообщества, окисляющего отходы, приведет к снижению результата теста. [28] : 85
Тест основан на микробной экосистеме с ферментами, способными окислять доступный органический материал. Некоторые сточные воды, например, от вторичной биологической очистки сточных вод , уже содержат большую популяцию микроорганизмов, акклиматизированных к тестируемой воде. Значительная часть отходов может быть использована в течение периода хранения до начала процедуры испытания. С другой стороны, органические отходы из промышленных источников могут потребовать применения специализированных ферментов. Микробным популяциям из стандартных источников семян может потребоваться некоторое время для производства этих ферментов. Специализированная семенная культура может быть подходящей для отражения условий развитой экосистемы в принимающих водах. [28] : 85–87