В биологии внеклеточный матрикс ( ВКМ ), [1] [2] также называемый межклеточным матриксом (ММ), представляет собой сеть, состоящую из внеклеточных макромолекул и минералов, таких как коллаген , ферменты , гликопротеины и гидроксиапатит , которые обеспечивают структурную и биохимическую поддержку окружающих клеток. [3] [4] [5] Поскольку многоклеточность развивалась независимо в различных многоклеточных линиях, состав ВКМ различается между многоклеточными структурами; однако адгезия клеток, межклеточная коммуникация и дифференциация являются общими функциями ВКМ. [6]
Животный внеклеточный матрикс включает интерстициальный матрикс и базальную мембрану . [7] Интерстициальный матрикс присутствует между различными животными клетками (т. е. в межклеточных пространствах). Гели полисахаридов и волокнистых белков заполняют интерстициальное пространство и действуют как буфер сжатия против нагрузки, оказываемой на ВКМ. [8] Базальные мембраны представляют собой листообразные отложения ВКМ, на которых покоятся различные эпителиальные клетки. Каждый тип соединительной ткани у животных имеет тип ВКМ: коллагеновые волокна и костный минерал составляют ВКМ костной ткани ; ретикулярные волокна и основное вещество составляют ВКМ рыхлой соединительной ткани ; а плазма крови является ВКМ крови .
Растительный ECM включает компоненты клеточной стенки , такие как целлюлоза, в дополнение к более сложным сигнальным молекулам. [9] Некоторые одноклеточные организмы принимают многоклеточные биопленки , в которых клетки встроены в ECM, состоящий в основном из внеклеточных полимерных веществ (EPS). [10]
Компоненты ECM производятся внутриклеточно резидентными клетками и секретируются в ECM посредством экзоцитоза . [11] После секреции они затем объединяются с существующим матриксом. ECM состоит из взаимосвязанной сетки волокнистых белков и гликозаминогликанов (GAG).
Гликозаминогликаны (ГАГ) представляют собой углеводные полимеры и в основном прикреплены к белкам внеклеточного матрикса для образования протеогликанов (гиалуроновая кислота является заметным исключением; см. ниже). Протеогликаны имеют чистый отрицательный заряд, который притягивает положительно заряженные ионы натрия (Na + ), которые притягивают молекулы воды через осмос, сохраняя ECM и резидентные клетки гидратированными. Протеогликаны также могут помогать улавливать и хранить факторы роста внутри ECM.
Ниже описаны различные типы протеогликанов, обнаруженные во внеклеточном матриксе.
Гепарансульфат (HS) — линейный полисахарид, который содержится во всех тканях животных. Он встречается в виде протеогликана (PG), в котором две или три цепи HS прикреплены в непосредственной близости к клеточной поверхности или белкам ECM. [12] [13] Именно в этой форме HS связывается с различными белковыми лигандами и регулирует широкий спектр биологических активностей, включая процессы развития , ангиогенез , свертывание крови и метастазы опухолей .
Во внеклеточном матриксе, особенно в базальных мембранах , основными белками, к которым присоединяется гепарансульфат, являются многодоменные белки перлекан , агрин и коллаген XVIII .
Хондроитинсульфаты способствуют прочности хрящей, сухожилий , связок и стенок аорты . Известно также, что они влияют на нейропластичность . [14]
Кератансульфаты имеют переменное содержание сульфата и, в отличие от многих других ГАГ , не содержат уроновую кислоту . Они присутствуют в роговице , хрящах, костях и рогах животных .
Гиалуроновая кислота (или «гиалуронан») — это полисахарид, состоящий из чередующихся остатков D-глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина, и в отличие от других ГАГ не встречается в виде протеогликана. Гиалуроновая кислота во внеклеточном пространстве придает тканям способность противостоять сжатию, обеспечивая противодействующую силу тургора (отека) путем поглощения значительного количества воды. Таким образом, гиалуроновая кислота в изобилии содержится в ECM несущих нагрузку суставов. Она также является главным компонентом интерстициального геля. Гиалуроновая кислота находится на внутренней поверхности клеточной мембраны и транслоцируется из клетки во время биосинтеза. [15]
Гиалуроновая кислота действует как экологический сигнал, который регулирует поведение клеток во время эмбрионального развития, процессов заживления, воспаления и развития опухоли . Она взаимодействует со специфическим трансмембранным рецептором CD44 . [16]
Коллаген является наиболее распространенным белком в ECM и является наиболее распространенным белком в организме человека. [17] [18] Он составляет 90% содержания белка костного матрикса. [19] Коллагены присутствуют в ECM в виде фибриллярных белков и обеспечивают структурную поддержку резидентным клеткам. Коллаген экзоцитозируется в форме предшественника ( проколлаген ), который затем расщепляется проколлагеновыми протеазами, чтобы обеспечить внеклеточную сборку. Такие расстройства, как синдром Элерса-Данлоса , несовершенный остеогенез и буллезный эпидермолиз , связаны с генетическими дефектами генов, кодирующих коллаген . [11] Коллаген можно разделить на несколько семейств в соответствии с типами структур, которые они образуют:
Эластины , в отличие от коллагенов, придают тканям эластичность, позволяя им растягиваться при необходимости, а затем возвращаться в исходное состояние. Это полезно в кровеносных сосудах , легких , коже и выйной связке , и эти ткани содержат большое количество эластина. Эластины синтезируются фибробластами и гладкомышечными клетками. Эластины крайне нерастворимы, а тропоэластины секретируются внутри молекулы-шаперона , которая высвобождает молекулу-предшественника при контакте с волокном зрелого эластина. Затем тропоэластины дезаминируются, чтобы включиться в эластиновую нить. Такие расстройства, как кутис-лакса и синдром Уильямса, связаны с дефицитом или отсутствием эластиновых волокон в ВКМ. [11]
В 2016 году Хулейхель и др. сообщили о наличии ДНК, РНК и связанных с матрицей нановезикул (MBV) в биокаркасах ECM. [20] Было обнаружено, что форма и размер MBV соответствуют ранее описанным экзосомам . Груз MBV включает различные белковые молекулы, липиды, ДНК, фрагменты и микроРНК. Подобно биокаркасам ECM, MBV могут изменять состояние активации макрофагов и изменять различные клеточные свойства, такие как: пролиферация, миграция и клеточный цикл. В настоящее время MBV считаются неотъемлемым и функциональным ключевым компонентом биокаркасов ECM.
Фибронектины — это гликопротеины , которые соединяют клетки с коллагеновыми волокнами в ECM, позволяя клеткам перемещаться через ECM. Фибронектины связывают коллаген и интегрины клеточной поверхности, вызывая реорганизацию цитоскелета клетки для облегчения перемещения клеток. Фибронектины секретируются клетками в развернутой, неактивной форме. Связывание с интегринами разворачивает молекулы фибронектина, позволяя им образовывать димеры , чтобы они могли нормально функционировать. Фибронектины также помогают в месте повреждения ткани, связываясь с тромбоцитами во время свертывания крови и облегчая перемещение клеток в пораженную область во время заживления ран. [11]
Ламинины — это белки, которые находятся в базальных пластинках практически всех животных. Вместо того, чтобы образовывать коллагеноподобные волокна, ламинины образуют сети паутинных структур, которые противостоят растягивающим силам в базальной пластинке. Они также способствуют адгезии клеток. Ламинины связывают другие компоненты ECM, такие как коллагены и нидогены . [11]
Существует множество типов клеток, которые способствуют развитию различных типов внеклеточного матрикса, обнаруженного во множестве типов тканей. Локальные компоненты ВКМ определяют свойства соединительной ткани.
Фибробласты являются наиболее распространенным типом клеток в соединительной ткани ECM, в которой они синтезируют, поддерживают и обеспечивают структурный каркас; фибробласты секретируют предшественники компонентов ECM, включая основное вещество . Хондроциты находятся в хряще и производят хрящевой матрикс. Остеобласты отвечают за формирование костей.
ECM может существовать в различных степенях жесткости и эластичности , от мягких мозговых тканей до твердых костных тканей. Эластичность ECM может отличаться на несколько порядков. Это свойство в первую очередь зависит от концентраций коллагена и эластина , [4] и недавно было показано, что оно играет влиятельную роль в регуляции многочисленных функций клеток.
Клетки могут ощущать механические свойства окружающей среды, прикладывая силы и измеряя возникающую ответную реакцию. [21] Это играет важную роль, поскольку помогает регулировать многие важные клеточные процессы, включая клеточное сокращение, [22] миграцию клеток , [23] пролиферацию клеток , [24] дифференциацию [25] и гибель клеток ( апоптоз ). [26] Ингибирование немышечного миозина II блокирует большинство этих эффектов, [25] [23] [22] указывая на то, что они действительно связаны с ощущением механических свойств ВКМ, что стало новым направлением исследований за последнее десятилетие.
Различные механические свойства в ECM оказывают влияние как на поведение клеток, так и на экспрессию генов . [27] Хотя механизм, посредством которого это происходит, не был полностью объяснен, адгезионные комплексы и актин - миозиновый цитоскелет , сократительные силы которого передаются через трансклеточные структуры, как полагают, играют ключевую роль в еще не открытых молекулярных путях. [22]
Эластичность ECM может направлять клеточную дифференциацию , процесс, посредством которого клетка переходит из одного типа клеток в другой. В частности, было показано, что наивные мезенхимальные стволовые клетки (МСК) определяют линию и принимают фенотипы с чрезвычайной чувствительностью к эластичности на уровне ткани. МСК, помещенные на мягкие матрицы, имитирующие мозг, дифференцируются в нейроноподобные клетки, демонстрируя схожую форму, профили РНК-интерференции , цитоскелетные маркеры и уровни факторов транскрипции . Аналогично более жесткие матрицы, имитирующие мышцы, являются миогенными, а матрицы с жесткостью, имитирующей коллагеновую кость, являются остеогенными. [25]
Жесткость и эластичность также направляют миграцию клеток , этот процесс называется дуротаксис . Этот термин был придуман Ло CM и коллегами, когда они обнаружили тенденцию отдельных клеток мигрировать вверх по градиентам жесткости (к более жестким субстратам) [23] и с тех пор широко изучался. Считается, что молекулярные механизмы, лежащие в основе дуротаксиса , существуют в основном в фокальной адгезии , большом белковом комплексе , который действует как основное место контакта между клеткой и ECM. [28] Этот комплекс содержит много белков, которые необходимы для дуротаксиса, включая структурные якорные белки ( интегрины ) и сигнальные белки (адгезионная киназа ( FAK ), талин , винкулин , паксиллин , α-актинин , ГТФазы и т. д.), которые вызывают изменения формы клеток и сократимости актомиозина. [29] Считается, что эти изменения вызывают перестройки цитоскелета , чтобы облегчить направленную миграцию .
Благодаря своей разнообразной природе и составу ECM может выполнять множество функций, таких как обеспечение поддержки, отделение тканей друг от друга и регулирование межклеточной коммуникации. Внеклеточный матрикс регулирует динамическое поведение клетки. Кроме того, он изолирует широкий спектр клеточных факторов роста и действует как локальное хранилище для них. [7] Изменения физиологических условий могут запускать активность протеаз , которая вызывает локальное высвобождение таких хранилищ. Это обеспечивает быструю активацию клеточных функций, опосредованную локальным фактором роста, без синтеза de novo .
Формирование внеклеточного матрикса необходимо для таких процессов, как рост, заживление ран и фиброз . Понимание структуры и состава ECM также помогает в понимании сложной динамики инвазии опухоли и метастазирования в биологии рака , поскольку метастазирование часто включает разрушение внеклеточного матрикса ферментами, такими как сериновые протеазы , треониновые протеазы и матриксные металлопротеиназы . [7] [30]
Жесткость и эластичность ECM имеют важное значение для миграции клеток , экспрессии генов [31] и дифференциации . [25] Клетки активно ощущают жесткость ECM и мигрируют преимущественно к более жестким поверхностям в феномене, называемом дуротаксис . [23] Они также обнаруживают эластичность и соответствующим образом корректируют экспрессию своих генов, что все чаще становится предметом исследований из-за его влияния на дифференциацию и прогрессирование рака. [32]
В мозге, где гиалуронан является основным компонентом ECM, матрица проявляет как структурные, так и сигнальные свойства. Высокомолекулярный гиалуронан действует как диффузионный барьер, который может локально модулировать диффузию во внеклеточном пространстве. После деградации матрицы фрагменты гиалуронана высвобождаются во внеклеточное пространство, где они функционируют как провоспалительные молекулы, организуя реакцию иммунных клеток, таких как микроглия . [33]
Многие клетки связываются с компонентами внеклеточного матрикса. Клеточная адгезия может происходить двумя способами: посредством фокальных адгезий , соединяющих ECM с актиновыми филаментами клетки, и гемидесмосом , соединяющих ECM с промежуточными филаментами, такими как кератин . Эта адгезия клетки к ECM регулируется специфическими молекулами клеточной адгезии на поверхности клетки (CAM), известными как интегрины . Интегрины — это белки клеточной поверхности, которые связывают клетки со структурами ECM, такими как фибронектин и ламинин, а также с белками интегринов на поверхности других клеток.
Фибронектины связываются с макромолекулами ECM и облегчают их связывание с трансмембранными интегринами. Присоединение фибронектина к внеклеточному домену инициирует внутриклеточные сигнальные пути, а также ассоциацию с клеточным цитоскелетом через набор адаптерных молекул, таких как актин . [8]
Было обнаружено, что внеклеточный матрикс вызывает восстановление и заживление тканей. Хотя механизм действия, посредством которого внеклеточный матрикс способствует конструктивному ремоделированию тканей, до сих пор неизвестен, исследователи теперь полагают, что связанные с матрицей нановезикулы (MBV) играют ключевую роль в процессе заживления. [20] [34] Например, у человеческих плодов внеклеточный матрикс работает со стволовыми клетками для роста и восстановления всех частей человеческого тела, и плоды могут восстановить все, что было повреждено в утробе матери. Ученые долгое время считали, что матрикс перестает функционировать после полного развития. В прошлом его использовали, чтобы помочь лошадям заживлять порванные связки, но сейчас его изучают дальше как устройство для регенерации тканей у людей. [35]
С точки зрения восстановления травм и тканевой инженерии внеклеточный матрикс служит двум основным целям. Во-первых, он не дает иммунной системе активироваться из-за травмы и реагировать воспалением и рубцовой тканью. Во-вторых, он помогает окружающим клеткам восстанавливать ткань вместо того, чтобы формировать рубцовую ткань. [35]
Для медицинских целей требуемый ECM обычно извлекается из свиных пузырей , легкодоступного и относительно неиспользуемого источника. В настоящее время он регулярно используется для лечения язв путем закрытия отверстия в ткани, выстилающей желудок, но в настоящее время многие университеты, а также правительство США проводят дальнейшие исследования для применения у раненых солдат. По состоянию на начало 2007 года испытания проводились на военной базе в Техасе. Ученые используют порошкообразную форму на ветеранах войны в Ираке, чьи руки были повреждены во время войны. [36]
Не все устройства ECM происходят из мочевого пузыря. Внеклеточный матрикс, полученный из подслизистой оболочки тонкого кишечника свиньи, используется для восстановления «дефектов межпредсердной перегородки» (ASD), «открытого овального окна» (PFO) и паховой грыжи . Через год 95% коллагенового ECM в этих заплатах были заменены организмом на нормальную мягкую ткань сердца. [37]
Белки внеклеточного матрикса обычно используются в системах культивирования клеток для поддержания стволовых и предшественников клеток в недифференцированном состоянии во время культивирования клеток и функционируют для индукции дифференциации эпителиальных, эндотелиальных и гладкомышечных клеток in vitro. Белки внеклеточного матрикса также могут использоваться для поддержки 3D-культуры клеток in vitro для моделирования развития опухолей. [38]
Класс биоматериалов, полученных путем обработки тканей человека или животных с целью сохранения частей внеклеточного матрикса, называется биоматериалом ВКМ .
Растительные клетки мозаично расположены, образуя ткани . Клеточная стенка — это относительно жесткая структура, окружающая растительную клетку . Клеточная стенка обеспечивает боковую прочность, чтобы противостоять осмотическому тургорному давлению , но она достаточно гибкая, чтобы обеспечить рост клеток при необходимости; она также служит средой для межклеточной коммуникации. Клеточная стенка состоит из нескольких слоев ламинированных микрофибрилл целлюлозы , встроенных в матрицу гликопротеинов , включая гемицеллюлозу , пектин и экстенсин . Компоненты гликопротеиновой матрицы помогают клеточным стенкам соседних растительных клеток связываться друг с другом. Избирательная проницаемость клеточной стенки в основном регулируется пектинами в гликопротеиновой матрице. Плазмодесмы ( единственное число : плазмодесмы) — это поры, которые пересекают клеточные стенки соседних растительных клеток. Эти каналы строго регулируются и избирательно позволяют молекулам определенных размеров проходить между клетками. [15]
Функциональность внеклеточного матрикса животных (Metazoa) развилась у общего предка Pluriformea и Filozoa после того, как Ichthyosporea отделились. [39]
Важность внеклеточного матрикса давно признана (Льюис, 1922), но термин стал использоваться сравнительно недавно (Господарович и др., 1979). [40] [41] [42] [43]
прозрачная коллагеновая матрица состоит из очищенного в медицинских целях свиного кишечника, который расщепляется клетками-мусорщиками (макрофагами) иммунной системы. Примерно через год коллаген почти полностью (90-95%) заменяется нормальной тканью организма: остается только крошечный металлический каркас. Полностью рассасывающийся имплантат в настоящее время находится в стадии разработки.