Модель репарации двухцепочечных разрывов относится к различным моделям путей, которые клетки используют для репарации двухцепочечных разрывов (DSB). Репарация DSB является важным клеточным процессом, поскольку накопление нерепарированных DSB может привести к хромосомным перестройкам, образованию опухолей или даже гибели клетки. [1] В клетках человека существует два основных механизма репарации DSB: гомологичная рекомбинация (HR) и негомологичное соединение концов (NHEJ). HR опирается на неповрежденную матрицу ДНК в качестве эталона для репарации DSB, что приводит к восстановлению исходной последовательности. [2] NHEJ модифицирует и лигирует поврежденные концы независимо от гомологии. [2] С точки зрения выбора пути репарации DSB большинство клеток млекопитающих, по-видимому, предпочитают NHEJ, а не HR. Это связано с тем, что использование HR может привести к делеции или амплификации гена в клетках, содержащих повторяющиеся последовательности. [1] С точки зрения моделей репарации в клеточном цикле , HR возможен только во время фаз S и G2 , тогда как NHEJ может происходить на протяжении всего процесса. [3] Все эти пути репарации регулируются всеобъемлющим механизмом ответа на повреждение ДНК . [4] Помимо HR и NHEJ, существуют и другие модели репарации, которые существуют в клетках. Некоторые из них относятся к категории HR, такие как зависящий от синтеза отжиг напряжения , репликация, вызванная разрывом, и отжиг одноцепочечной цепи; в то время как другие представляют собой совершенно альтернативную модель репарации, а именно, путь микрогомологически-опосредованного соединения концов (MMEJ). [5]
DSB может возникать естественным образом из-за присутствия реактивных видов, образующихся в результате метаболизма, а также различных внешних факторов (например, ионизирующего излучения или химиотерапевтических препаратов). [1]
В клетках млекопитающих существует множество клеточных процессов, которые вызывают DSB. Во-первых, топологическое напряжение ДНК от топоизомеразы во время нормального роста клеток может вызывать большинство DSB клетки. [6] Во-вторых, клеточные процессы, такие как мейоз и созревание антител, могут вызывать DSB, вызванный нуклеазой. [7] В-третьих, расщепление различных структур ДНК, таких как обращенные или заблокированные репликационные вилки ДНК , R-петли и межцепочечные сшивки ДНК, также могут вызывать DSB. [7]
Гомологичная рекомбинация включает обмен ДНК-материалами между гомологичными хромосомами. Существует несколько путей HR для восстановления DSB, которые включают репарацию двухцепочечных разрывов (DSBR), синтез-зависимый отжиг цепей (SDSA), репликацию, вызванную разрывом (BIR), и одноцепочечный отжиг (SSA). [8]
Регуляция HR в клетках млекопитающих включает ключевые белки HR, такие как BRCA1 и BRCA2 . [9] И как уже упоминалось, поскольку HR может привести к агрессивной хромосомной перестройке, потере генетической информации, которая может способствовать гибели клетки, это объясняет, почему HR строго регулируется. [8]
HR восстанавливает DSB, копируя неповрежденные и гомологичные молекулы ДНК. Тупые концы DSB преобразуются в одноцепочечную ДНК с 3'-расширениями, что позволяет рекомбиназе RAD51 (эукариотическому гомологу прокариотического RecA ) связываться с ней, образуя филамент нуклеопротеина. [3] [10] Функция филамента заключается в обнаружении шаблонной ДНК и формировании совместной гетеродуплексной молекулы. Другие белки, такие как белок RP-A и RAD52, также координируют свое действие в образовании гетеродуплекса, [10] белок RP-A должен быть удален, чтобы RAD51 сформировал филамент, [11] тогда как RAD52 является ключевым медиатором HR. [3] После этого одноцепочечная ДНК 3' внедряется в шаблонную ДНК и вытесняет цепь ДНК, образуя D-петлю. ДНК-полимераза и другие вспомогательные факторы заменяют отсутствующую ДНК посредством синтеза ДНК. Затем лигаза присоединяет разрыв цепи ДНК, [10] что приводит к образованию 2 соединений Холлидея . Затем рекомбинированные цепи ДНК подвергаются разделению путем расщепления. Ориентация расщепления определяет, приведет ли разделение к кроссоверным или некроссоверным продуктам. [12] Наконец, цепи окончательно разделяются и возвращаются к своей первоначальной форме.
, основной путь разрешения зависит от комплекса BTR (BLM геликаза-топоизомеразаIIIα-RMI1-RM2), где он индуцирует разрешение двух соединений Холлидея, но этот путь благоприятствует некроссоверному расщеплению. [12]
Синтез-зависимый от деформации отжиг является наиболее предпочтительным механизмом репарации в соматических клетках . [3] Путь SDSA похож на DSBR до момента, следующего за образованием D-петли. Вместо того, чтобы образовывать соединения Холлидея после синтеза ДНК, зарождающаяся цепь диссоциирует через геликазу RETL1 и отжигается обратно на другой конец резецированной цепи. [3] [9] [13] Это объясняет, почему SDSA приводит к непересекающемуся пути. [3] Оставшийся пробел заполняется, и надрез прикрепляется лигазой. [9]
Хотя исследований, посвященных репликации, вызванной разрывом, немного, известно, что это одноконцевой механизм рекомбинации, при котором только один из концов DSB будет вовлечен в инвазию цепи. [14] Это означает, что в отличие от DSBR, BIR не связывается со вторым концом DSB после инвазии цепи и репликации. [14]
Одноцепочечный отжиг включает гомологичные/повторяющиеся последовательности, фланкирующие DSB. [7] Процесс начинается с ключевого фактора резекции конца CtlP, который опосредует резекцию конца DSB, что приводит к образованию 3'-расширения одноцепочечной ДНК. При посредничестве RAD52 фланкирующие гомологичные последовательности отжигаются и образуют промежуточный синапс. [7] Затем негомологичное 3'-расширение удаляется комплексом ERCC1 - XPF посредством эндонуклеолитического расщепления, при этом RAD52 увеличивает эффективность активности комплекса ERCC1 - XPF. [7] Только после удаления 3'-одноцепочечной ДНК полимераза заполнит недостающие пробелы, а лигаза — свяжет нити. [7] Поскольку SSA приводит к удалению повторяющихся последовательностей, это может потенциально привести к исправлению, подверженному ошибкам. [3]
Одноцепочечный отжиг отличается от SDSA и DSBR во многих отношениях. Например, 3'-расширение после резекции конца в SSA отжигается с повторяющимися/гомологичными последовательностями другого конца, тогда как в других путях вторжение цепи в другую гомологичную матрицу ДНК. [15] Более того, SSA не требует RAD51 , поскольку он не включает вторжение цепи, а скорее отжиг гомологичных последовательностей. [3]
Негомологичное соединение концов (NHEJ) является одним из основных путей восстановления DSB помимо HR. [16] Основная концепция NHEJ включает три этапа. Во-первых, концы DSB захватываются группой ферментов. Затем ферменты образуют мостик, который соединяет концы DSB вместе, и, наконец, следует повторное лигирование цепей ДНК. [17] Чтобы инициировать весь процесс, белковый комплекс Ku70 / 80 связывается с поврежденными концами цепей DSB. Это формирует предварительный каркас, который позволяет привлекать различные факторы NHEJ, такие как каталитическая субъединица ДНК-зависимой протеинкиназы (DNA-PKcs), ДНК-лигаза IV и белок рентгеновского перекрестного комплемента 4 (XRCC4), чтобы сформировать мостик и соединить оба конца поврежденных цепей ДНК вместе. [18] [19] [20] [21] Затем следует обработка любых не поддающихся лигированию концов ДНК группой белков, включая Artemis , PNKP , APLF и Ku, перед тем как XRCC4 и ДНК-лигаза IV лигируют связанную ДНК. [17] [22]
Микрогомологичное соединение концов (MMEJ), также известное как alt-негомологичное соединение концов, является еще одним путем восстановления DSB. Процесс MMEJ можно обобщить в пять этапов: разрезание концов ДНК от 5' до 3', отжиг микрогомологии, удаление гетерологичных лоскутов и лигирование и синтез заполняющей пробелы ДНК. [5] Было обнаружено, что выбор между MMEJ и NHEJ в основном зависит от уровней Ku и параллельного клеточного цикла. [23]
Реакция на повреждение ДНК (DDR) является всеобъемлющим механизмом, который опосредует обнаружение и ответ клетки на повреждение ДНК. Это включает в себя процесс обнаружения DSB внутри клетки и последующий запуск и регулирование путей восстановления DSB. Обнаружение повреждения ДНК выше по течению через DDR приведет к активации нисходящих реакций, таких как старение , апоптоз клеток , остановка транскрипции и активация механизмов восстановления ДНК. [4] Такие белки, как белки ATM , ATR и ДНК-зависимая протеинкиназа (DNA-PK), жизненно важны для процесса обнаружения DSB в DDR, и эти белки привлекаются к сайту DSB в ДНК. [24] В частности, ATM была идентифицирована как протеинкиназа, отвечающая за глобальную медитацию клеточных ответов на DSB, которая включает в себя различные пути восстановления DSB. [24] После привлечения вышеупомянутых белков к участкам повреждения ДНК они, в свою очередь, запускают клеточные реакции и пути восстановления для смягчения и устранения нанесенного ущерба. [4] Короче говоря, эти жизненно важные восходящие белки и нисходящие пути восстановления вместе образуют DDR, который играет важную роль в регуляции путей восстановления DSB.
Изображение в этом разделе иллюстрирует молекулярные этапы в пути ответа на повреждение ДНК, в котором комплекс анемии Фанкони активируется во время восстановления двухцепочечного разрыва. ATM (ATM) также является протеинкиназой , которая рекрутируется и активируется двухцепочечными разрывами ДНК . Двухцепочечные повреждения ДНК активируют комплекс ядра анемии Фанкони (FANCA/B/C/E/F/G/L/M). [25] Комплекс ядра FA моноубиквитинирует нижестоящие мишени FANCD2 и FANCI. [26] ATM активирует (фосфорилирует) CHEK2 и FANCD2 [27] CHEK2 фосфорилирует BRCA1. [28] Убиквинированные комплексы FANCD2 с BRCA1 и RAD51 . [29] Белок PALB2 действует как концентратор, [30] объединяя BRCA1, BRCA2 и RAD51 в месте двухцепочечного разрыва ДНК, а также связывается с RAD51C, членом паралогического комплекса RAD51 RAD51B - RAD51C - RAD51D - XRCC2 (BCDX2). Комплекс BCDX2 отвечает за набор или стабилизацию RAD51 в местах повреждения. [31] RAD51 играет важную роль в гомологичной рекомбинационной репарации ДНК во время репарации двухцепочечных разрывов. В этом процессе происходит АТФ-зависимый обмен цепями ДНК, при котором цепочка-шаблон вторгается в спаренные основания нити гомологичных молекул ДНК. RAD51 участвует в поиске гомологии и стадиях спаривания нитей этого процесса.
Поскольку клетки разработали различные модели восстановления DSB, считается, что определенные пути являются предпочтительными для их способности восстанавливать DSB в зависимости от клеточного контекста. [32] Эти условия включают тип вовлеченного DSB, вид вовлеченных клеток и стадию клеточного цикла. [33]
Клетки развили множество путей репарации DSB в ответ на различные типы DSB. [33] Следовательно, в разных ситуациях предпочтительны различные пути. Например, откровенные DSB, которые являются DSB, индуцированными такими веществами, как ионизирующее излучение и нуклеазы , могут быть восстановлены как HR, так и NHEJ. С другой стороны, DSB из-за коллапса репликативной вилки в основном благоприятствует HR. [33] [34]
Говорят, что предпочтительный путь в конкретной ситуации также во многом зависит от вида клетки, типа клетки и фаз клеточного цикла ; и все они модулируются и запускаются различными вышестоящими регуляторными белками. [33] По сравнению с высшими эукариотами , дрожжевые клетки приняли HR в качестве основного пути восстановления для DSB. [35] Было обнаружено, что неточный NHEJ, основной путь для NHEJ для восстановления «грязных» концов из-за IR, неэффективен при восстановлении DSB в дрожжевых клетках. Была выдвинута гипотеза, что эта неэффективность по сравнению с клетками млекопитающих обусловлена отсутствием трех жизненно важных белков NHEJ, включая DNA-PKcs , BRCA1 и Artemis . [33] В отличие от yests, высшие эукариоты имеют гораздо более высокую частоту и эффективность в принятии путей NHEJ. [36] Исследования предполагают, что это связано с большим размером генома высших эукариот, поскольку это означает, что больше белков, связанных с NHEJ, кодируются для путей восстановления NHEJ; а больший геном подразумевает сложное препятствие для поиска гомологичного шаблона для HR. [33]
Пути HR и NHEJ предпочтительны в различных фазах клеточного цикла по множеству факторов. Поскольку фазы S и G2 клеточного цикла генерируют больше хроматид , повышенная доступность шаблона для HR приводит к повышению регуляции пути. [37] Этот рост еще больше увеличивается из-за активации CDK1 и повышения уровней RAD51 и RAD52 во время фазы G1. [33] [38] Несмотря на это, NHEJ не является неактивным во время повышения регуляции HR. Фактически, было показано, что NHEJ активен на всех стадиях клеточного цикла и предпочтителен в фазе G1 во время низких интервалов действия резекции. [39] [40] Это предполагает конкуренцию между HR и NHEJ за восстановление DSB в клетках. [38] Однако следует отметить, что наблюдается смещение приоритета от NHEJ к HR, когда клеточный цикл переходит от фазы G1 к фазе S/G2 в эукариотических клетках. [38]
В диплоидных эукариотических организмах события мейоза можно рассматривать как происходящие в три этапа. (1) Гаплоидные гаметы подвергаются сингамии/ оплодотворению , в результате чего наборы хромосом разного родительского происхождения объединяются, чтобы разделить одно и то же ядро . (2) Гомологичные хромосомы, происходящие из разных клеток (т. е. не сестринские хромосомы), выравниваются в пары и подвергаются рекомбинации, включающей репарацию двухцепочечных разрывов. (3) Два последовательных деления клеток (без дупликации хромосом) приводят к гаплоидным гаметам, которые затем могут повторить мейотический цикл. На этапе (2) повреждения в ДНК зародышевой линии могут быть удалены путем репарации двухцепочечных разрывов. [41] В частности, двухцепочечные разрывы в одной дуплексной молекуле ДНК могут быть точно восстановлены с использованием информации из гомологичной неповрежденной молекулы ДНК с помощью процесса гомологичной рекомбинации . [41]
Хотя не существует универсальной модели, объясняющей этиологию заболеваний, вызванных дефицитом репарации ДНК, считается, что накопление невосстановленных повреждений ДНК может привести к различным заболеваниям, включая различные метаболические синдромы и типы рака . [42] [43] Некоторые примеры заболеваний, вызванных дефектами механизмов репарации DSB, перечислены ниже:
Женщины, как правило, живут дольше мужчин, а гендерный разрыв в продолжительности жизни предполагает различия в процессе старения между полами. Были изучены различия в репарации двухцепочечных разрывов ДНК циклических человеческих лимфоцитов во время старения. [47] Было обнаружено, что репарация двухцепочечных разрывов ДНК изменяется с возрастом, и эти изменения различны у мужчин и женщин. [47]
Активация транскрипции генов во время онкогенеза часто связана с введением двухцепочечных разрывов ДНК и их восстановлением с помощью процесса, использующего RAD51 . [48] Эта связанная с транскрипцией репарация ДНК имеет тенденцию происходить в определенных областях ДНК, называемых суперэнхансерами . [48]
{{cite book}}
: |work=
проигнорировано ( помощь )