stringtranslate.com

Время разбавления яда гадюки Рассела

Гадюка Рассела, Daboia russelii

Время разбавленного яда гадюки Рассела ( dRVVT ) — лабораторный тест, часто используемый для обнаружения волчаночного антикоагулянта (LA). Это оценка времени свертывания крови в присутствии разбавленного количества яда гадюки Рассела ( Daboia russelii ), очень ядовитой змеи, обитающей на Индийском субконтиненте и названной в честь герпетолога Патрика Рассела . [1]

История

Яд гадюки Рассела (RVV) был известен своей способностью свертывать кровь много лет назад. [2] Он широко использовался как кровоостанавливающее средство для свертывания небольших ран, когда для бритья чаще использовались бритвенные лезвия (например, «Stypven», Burroughs-Wellcome Pharma). RVV оказался полезным в лабораторных тестах на факторы свертывания крови V, X, протромбин и фосфолипиды. [3]

Впервые он был использован в тестах на свертываемость для волчаночного антикоагулянта (LA) в индивидуальном случае в 1975 году. [4] Тест «разбавленного времени действия яда гадюки Рассела (dRVVT)» затем был применен в 1985 году для обнаружения LA у большого количества пациентов и стал более широко использоваться для этой цели. Этот многоступенчатый метод включал добавление отдельных растворов разбавленного фосфолипида , RVV и хлорида кальция к тестовой плазме, а затем измерение того, сколько времени потребовалось для свертывания смеси. [5]

В 1989 году исследователи из больницы Уэстмид разработали более простой анализ, объединив яд, фосфолипид и кальций в один реагент. Его первое применение на пациентах с LA было сообщено в 1990 году. [6] Он был коммерциализирован как «LA Screen» компанией Gradipore Ltd, Сидней (позже Life Diagnostics) и широко распространен компанией American Diagnostica Inc (Нью-Йорк) как «dVVTest».

Реагент был улучшен в 1992 году, сделав его устойчивым к широко используемому интерферирующему антикоагулянту гепарину . В то же время была выпущена новая версия, устойчивая к LA, с повышенным содержанием фосфолипидов. Она была представлена ​​как «LA-Confirm» компанией Gradipore и «dVVConfirm» компанией American Diagnostica. Результаты с этим реагентом с высоким содержанием фосфолипидов не были продлены большинством LA, но оставались такими же затронутыми, как и в «скрининговом» тесте, всеми другими переменными в тестовых плазмах (информация о продукте Gradipore). Сочетание скрининговых и подтверждающих реагентов dRVVT упростило идентификацию LA. [7] С тех пор производство этих реагентов перешло к крупным диагностическим компаниям, таким как Diagnostica Stago, Precision Biologic и IL/Werfen.

Механизм

Анализ dRVVT основан на яде гадюки Расселли . Яд содержит ферменты (RVV-X), которые напрямую активируют фактор свертывания X (минуя внутренние и внешние каскады). [8] В присутствии кальция и фосфолипидов эти факторы превращают протромбин в тромбин , что приводит к образованию фибринового сгустка. Анализ использует низкие концентрации яда и фосфолипидов, что приводит к стандартному времени свертывания от 35 до 37 секунд. Тест состоит из трех фаз: в фазе скрининга используется меньшее количество фосфолипидов (время свертывания 35–37 секунд) для повышения чувствительности к волчаночному антикоагулянту. [9] В подтверждающей фазе полная доза фосфолипидов (время свертывания 30–35 секунд) помогает подтвердить результаты. В исследовании смешивания плазма пациента смешивается с нормальной объединенной плазмой (NPP) в соотношении 1:1 для оценки дефицита фактора свертывания. Если время свертывания увеличивается во время скрининга, могут присутствовать антитела к волчанке. Исследование смешивания различает антитела к волчанке и дефицит фактора. Избыток фосфолипидов в подтверждающей фазе сокращает время свертывания, если присутствуют антитела к волчанке. [10]

Интерпретация

На протяжении трех фаз рассчитываются следующие коэффициенты, помогающие интерпретировать диагноз:

i) Коэффициент скрининга dRVVT (LA1R): плазма пациента с реагентом LA1/NPP
ii) коэффициент подтверждения dRVVT (LA2R): плазма пациента с реагентом LA2/NPP
iii) Нормализованное отношение экрана (Screen NR): LA1R/LA2R
iv) Соотношение смеси LA1 (LA1MR): смесь плазмы пациента и NPP в соотношении 50:50 с использованием LA1/NPP
v) Соотношение смеси LA2 (LA2MR): смесь плазмы пациента и NPP в соотношении 50:50 с использованием LA2/NPP
vi) Нормализованное соотношение смеси (Mix NR): LA1MR/LA2MR

Используя эти соотношения и анализируя возможные комбинации результатов, осуществляется интерпретация теста и составление отчетов. [11]

Дополнительные расчеты производятся с использованием процентной коррекции dRVVT и нормализованной процентной коррекции, как указано ниже:

i) Процентная коррекция = [Экран пациента dRVVT/Подтверждение пациента dRVVT] x 100
ii) Нормализованная процентная коррекция = [(коэффициент экрана dRVVT − коэффициент подтверждения dRVVT) /коэффициент экрана dRVVT] × 100 [12]

Нормализованная процентная коррекция >10% считается положительной и предполагает наличие волчаночного антикоагулянта. [12]

Ограничения

Тесты dRVVT сильно подвержены влиянию новых прямых пероральных антикоагулянтов (DOAC), и ложноположительные результаты LA получаются особенно при использовании ривароксабана . [13] Теперь возможно целенаправленно удалять DOAC из тестовых плазм с помощью активированного угля и обеспечивать правильную диагностику LA с помощью системы dRVVT, несмотря на их первоначальное присутствие. [14]

Использование в диагностике

DRVVT является одним из компонентов исследования предполагаемых антифосфолипидных антител , другим компонентом является серологическое тестирование на антикардиолипиновые антитела и антитела к β2 гликопротеину-I с использованием технологии ELISA . Критерии Саппоро требуют, чтобы по крайней мере один из вышеуказанных лабораторных тестов был положительным, и у пациента должно быть по крайней мере одно клиническое проявление антифосфолипидного синдрома , такое как сосудистый тромбоз или фетальная смертность/заболеваемость, для диагностики антифосфолипидного синдрома. [15] Положительные результаты лабораторных тестов должны быть получены в двух случаях с интервалом не менее 12 недель для постановки диагноза. Синдром антифосфолипидных антител является важным маркером рецидивирующего тромбоза и часто требует неопределенной антикоагулянтной (кроверазжижающей) терапии. Варфарин, по-видимому, предпочтительнее DOAC, поскольку последние недавно были признаны менее эффективными, чем ожидалось. [16]

Критерии были определены в 1999 году и пересмотрены в 2006 году. [17]

Ссылки

  1. ^ Favaloro EJ (4 августа 2019 г.). «Тест времени действия яда гадюки Рассела (RVVT) для исследования волчаночного антикоагулянта (LA)». Американский журнал гематологии . 94 (11): 1290–1296. doi : 10.1002/ajh.25606 . PMID  31379004. S2CID  199438687.
  2. ^ Macfarlane RG (июль 1967). «Яд гадюки Рассела, 1934-64». British Journal of Haematology . 13 (4): 437–51. doi :10.1111/j.1365-2141.1967.tb00754.x. PMID  6067638. S2CID  2208466.
  3. ^ Marsh NA (июль 1998 г.). «Использование фракций змеиного яда в коагуляционной лаборатории». Свертывание крови и фибринолиз . 9 (5): 395–404. doi :10.1097/00001721-199807000-00001. PMID  9712287.
  4. ^ Экснер Т., Рикард КА, Кроненберг Х. (октябрь 1975 г.). «Исследования фосфолипидов в действии ингибитора коагуляции при волчанке». Патология . 7 (4): 319–28. doi :10.3109/00313027509081688. PMID  1223721. S2CID  24552164.
  5. ^ Thiagarajan P, Pengo V, Shapiro SS (октябрь 1986 г.). «Использование времени разбавленного яда гадюки Рассела для диагностики волчаночных антикоагулянтов». Blood . 68 (4): 869–74. doi : 10.1182/blood.V68.4.869.869 . PMID  3092888.
  6. ^ Экснер Т., Пападопулос Г., Коуттс Дж. (август 1990 г.). «Использование упрощенного времени разбавления яда гадюки Рассела (DRVVT) подтверждает неоднородность среди «волчаночных антикоагулянтов»". Свертывание крови и фибринолиз . 1 (3): 259–66. doi :10.1097/00001721-199008000-00002. PMID  2129412.
  7. ^ Лабораторное тестирование на волчаночный антикоагулянт: утвержденное руководство . Институт клинических и лабораторных стандартов. 2014. ISBN 978-1-56238-959-8.
  8. ^ Кастро-Аморим Дж., Оливейра А., Мукерджи АК., Рамос М.Дж., Фернандес ПА. (2023-07-10). «Раскрытие механизма реакции активатора фактора X яда гадюки Рассела: парадигма реактивности цинковых металлопротеиназ?». Журнал химической информации и моделирования . 63 (13): 4056–4069. doi :10.1021/acs.jcim.2c01156. ISSN  1549-9596. PMC 10336966. PMID 37092784  . 
  9. ^ Hillarp A, Strandberg K, Gustafsson KM, Lindahl TL (август 2020 г.). «Раскрытие сложных эффектов прямых пероральных антикоагулянтов при анализе времени действия разбавленного яда гадюки Рассела». Журнал тромбоза и гемостаза . 18 (8): 1866–1873. doi :10.1111/jth.14829. PMID  32294291.
  10. ^ Вандевельде А., Девриз К. М. (13.04.2022). «Лабораторная диагностика антифосфолипидного синдрома: идеи и препятствия». Журнал клинической медицины . 11 (8): 2164. doi : 10.3390/jcm11082164 . ISSN  2077-0383. PMC 9025581. PMID 35456258  . 
  11. ^ Bailly J, Louw S, De Koker A, Potgieter J, Coetzee M, Chapanduka ZC, Opie J (1 января 2020 г.). «Руководство по тестированию волчаночных антикоагулянтов в Южной Африке». Журнал медицинской лабораторной науки и технологий Южной Африки . 2 (1): 6–12. doi :10.36303/JMLSTSA.2020.2.1.39. ISSN  2664-2549.
  12. ^ ab Moore GW (март 2014 г.). «Современные руководящие принципы и рекомендации по лабораторному обнаружению волчаночных антикоагулянтов». Семинары по тромбозу и гемостазу . 40 (2): 163–171. doi : 10.1055/s-0033-1364185 . ISSN  0094-6176. PMID  24500573.
  13. ^ Flieder T, Weiser M, Eller T, Dittrich M, von Bargen K, Alban S, Kuhn J, Knabbe C, Birschmann I (май 2018 г.). «Влияние DOAC на различные анализы DRVVT для диагностики волчаночных антикоагулянтов». Thrombosis Research . 165 : 101–106. doi :10.1016/j.thromres.2018.03.009. PMID  29627719.
  14. ^ Favaloro EJ, Gilmore G, Arunachalam S, Mohammed S, Baker R (август 2019 г.). «Нейтрализация ривароксабана вызвала помехи в лабораторных испытаниях на волчаночный антикоагулянт (LA): сравнительное исследование с использованием DOAC Stop и андексанета альфа» (PDF) . Thrombosis Research . 180 : 10–19. doi : 10.1016/j.thromres.2019.05.013. PMID  31158643. S2CID  174807712.
  15. ^ Миякис С., Локшин М.Д., Ацуми Т., Бранч Д.В., Брей Р.Л., Сервера Р., Дерксен Р.Х., Де Гроот П.Г. и др. (2006). «Международное консенсусное заявление об обновлении критериев классификации определенного антифосфолипидного синдрома (APS)». Журнал тромбоза и гемостаза . 4 (2): 295–306. doi :10.1111/j.1538-7836.2006.01753.x. hdl : 11379/21509 . PMID  16420554. S2CID  9752817.
  16. ↑ Каджи М., Мэтью А., Рамаппа П. (9 октября 2019 г.). «Неудачи лечения прямыми пероральными антикоагулянтами». Американский журнал терапии . 28 (1): е87–е95. дои : 10.1097/MJT.0000000000001083. PMID  31599766. S2CID  204029056.
  17. ^ Кауль М., Эркан Д., Саммаритано Л., Локшин М. Д. (июль 2007 г.). «Оценка пересмотренных критериев классификации антифосфолипидного синдрома 2006 г.». Ann. Rheum. Dis . 66 (7): 927–30. doi :10.1136/ard.2006.067314. PMC 2497429. PMID  17337473 .