Гематоксилин или гематоксилин ( / ˌ h iː m ə ˈ t ɒ k s ɪ l ɪ n / ) , также называемый натуральным черным 1 или CI 75290 , представляет собой соединение, извлеченное из сердцевины дерева кампешевое дерево ( Haematoxylum campechianum ) [1] [2] с химической формулой C
16ЧАС
14О
6. Этот краситель, полученный естественным путем , использовался в качестве гистологического красителя , чернил [ 3] [4] [5] [6] и красителя в текстильной и кожевенной промышленности. [7] [8] Как краситель, гематоксилин назывался пало де кампече, [8] экстрактом кампешевого дерева, [7] синим деревом [9] и черным деревом. [9] В гистологии окрашивание гематоксилином обычно сопровождается контрастным окрашиванием эозином . [1] [10] [11] В паре эта процедура окрашивания известна как окрашивание гематоксилином и эозином и является одной из наиболее часто используемых комбинаций в гистологии . [1] [7] [12] [13] [14] Помимо использования в окраске гематоксилином и эозином, гематоксилин также является компонентом окраски по Папаниколау (или окраски по Папаниколау), которая широко используется при изучении цитологических образцов. [1] [14]
Хотя краситель обычно называют гематоксилином, активным красителем является окисленная форма гематеина , которая образует сильно окрашенные комплексы с некоторыми ионами металлов (обычно солями Fe(III) и Al(III)). [1] [7] [8] [15] [16] В чистом виде гематоксилин представляет собой бесцветное кристаллическое твердое вещество, [7] [17] хотя коммерческие образцы обычно имеют цвет от светло- до темно-коричневого в зависимости от уровня присутствующих примесей. [2] [18]
Гематоксилин был синтезирован , [19] [20] хотя никогда в коммерчески выгодных количествах. [14] [21] Исторически кампешевое дерево экспортировалось, а гематоксилин извлекался в Европе. В последнее время извлечение происходит ближе к месту заготовки кампешевого дерева. [18] Извлечение гематоксилина из кампешевого дерева в промышленных масштабах осуществлялось по «французскому процессу» путем кипячения древесной щепы или по «американскому процессу» с паром и давлением. [9] [22] После извлечения краситель может продаваться в виде жидкого концентрата или высушиваться и продаваться в кристаллической форме. [9] Современные методы производства используют воду, эфир или спирт в качестве растворителя , после чего экстракты могут быть дополнительно очищены до необходимого уровня чистоты. [18]
Коммерческий продукт может различаться от партии к партии и между производителями [18] как по уровню примесей, так и по соотношению гематоксилина к гематеину. [23] [2] [24] Для гистологического использования эта изменчивость может повлиять на взаимодействие красителя с образцами биологических тканей, и поэтому вызывает беспокойство у гистологов и патологов . [23] [2] [18] Гематоксилин, как и другие биологические красители, может быть сертифицирован Комиссией по биологическим красителям , что означает, что конкретная партия красителя работает в стандартизированном тесте, хотя это не определяет фактическую чистоту красителя. [23]
Окрашивание гематоксилином обычно сопровождается (или контрастно окрашивается) другим гистологическим красителем, эозином . [10] [11] [1] В паре эта процедура окрашивания известна как окрашивание гематоксилином и эозином и является одной из наиболее часто используемых комбинаций в гистологии . [1] [12] [7] [14] Гематоксилин также является компонентом окраски по Папаниколау (или окраски ПАП), которая широко используется при изучении цитологических образцов, в частности, в ПАП-тесте , используемом для выявления рака шейки матки . [14] [1]
В основном используемый в качестве ядерного красителя (для окрашивания клеточного ядра), гематоксилин также окрашивает грубый эндоплазматический ретикулум , рибосомы , коллаген , миелин , эластичные волокна и кислые муцины . [10] Гематоксилин сам по себе не является эффективным красителем, но при окислении до гематеина и в сочетании с протравой окрашивает хроматин в ядрах клеток в темно-синий или черный цвет. [1] [ 7] [25] [10] Цвет и специфичность красителей гематоксилином контролируются химической природой и количеством используемой протравы, а также pH окрашивающего раствора, поэтому были разработаны различные составы гематоксилина. [1] [10] [15]
Составы красителей на основе гематоксилина можно в целом классифицировать на основе того, как окисляется (или созревает ) гематоксилин , и по выбору используемой протравы. [1] Составы красителей на основе гематоксилина могут быть либо естественным образом окислены под воздействием воздуха и солнечного света, либо, что более распространено, особенно в коммерчески приготовленных растворах, [7] химически окислены с использованием иодата натрия . [1] [26] [11] Обычно добавляется только достаточное количество окислителя для преобразования половины гематоксилина в гематеин, позволяя оставшейся части естественным образом окисляться во время использования, это продлевает срок службы окрашивающего раствора, поскольку образуется больше гематеина, в то время как часть гематеина далее окисляется до оксигематеина. [13] [27] [11] Из солей металлов, используемых в качестве протрав, наиболее распространенной является алюминий , [11] другие протравы включают соли железа , вольфрама , молибдена и свинца . [1]
В зависимости от рецептуры или техники окрашивания, гематоксилиновые красители могут использоваться так называемым прогрессивным способом, при котором продолжительность контакта ткани с окрашивающим раствором используется для контроля степени окрашивания, или регрессивным способом, при котором ткань перекрашивается, а избыток краски удаляется на вторичном этапе процедуры. [11] [25] [1] Удаление нежелательного окрашивания или дифференциация обычно включает в себя раствор разбавленного этанола и соляной кислоты . [11] [1] [20]
В 1758 году Георг Христиан Райхель использовал гематоксилин без протравы для окрашивания растительных тканей. [31] [12] [32] Джон Томас Квекетт в книге 1852 года [33] предлагает использовать «кампешевое дерево» (гематоксилин) для окрашивания полупрозрачных материалов для исследования под микроскопом . [32] [31] В 1863 году Вильгельм фон Вальдейер-Гарц использовал гематоксилин на животных тканях без протравы (с ограниченным успехом) [34] и иногда его считают первым, кто сделал это [8] [12] [35] [34], хотя это не является общепринятым. [35] [8] Франц Бёмер в 1865 году опубликовал формулу гематоксилина, используя квасцы в качестве протравы, [34] [21] [12] [8] [35] [31] , а в 1891 году Пауль Майер опубликовал формулу, использующую химический окислитель для превращения гематоксилина в гематеин. [26] [31] [12] Первое использование гематоксилина с эозином в качестве контрастного красителя, которое в настоящее время является наиболее используемой комбинацией красителей в гистологии, было впервые предложено А. Виссовским в 1876 году. [15] [31] К началу 1900-х годов гематоксилин стал широко использоваться в качестве гистологического красителя. [12]
Во время Первой мировой войны , в конце 1920-х годов, Второй мировой войны , в начале 1970-х годов (летом 1973 года [22] ) и в 2008 году наблюдался дефицит гематоксилина из-за перерывов в его извлечении из кампешевого дерева. [18] Этот дефицит побудил к поиску альтернативных ядерных красителей. [22] [18] В качестве замены было рекомендовано несколько синтетических красителей, в частности целестиновый синий (CI 51050), [18] галлоцианин [7] [11] (CI 51030), галлеин [18] (CI 45445) и эриохромцианин R [18] [11], также называемый хромоксанцианином R и солохромцианином (CI 43820). Все четыре содержат Fe(III) в качестве протравы . Альтернативой является алюминиевый комплекс окисленного бразилина , который отличается от гематоксилина только одной гидроксильной группой. Замена красителя на гематоксилин при окрашивании H&E также не должна нарушать способность гистологов и патологов, [14] которые потратили годы на обучение с окрашенными H&E предметными стеклами, изучать эти стекла и ставить медицинские диагнозы . [7] Ни одно из предложенных замен красителей не получило широкого распространения. [14] [7]
Гематоксилин впервые был использован в качестве красителя майя и ацтеками в Центральной Америке , где произрастают местные деревья кампешевого дерева. [8] [9] Впервые этот краситель был завезен в Европу испанцами и вскоре получил широкое распространение. [9] [8] Гематоксилин использовался для получения черных, синих и пурпурных оттенков на различных тканях и оставался важным промышленным красителем до появления подходящих заменителей в виде синтетических красителей . [9] В качестве синего красителя (с квасцами в качестве протравы) первоначальные результаты были не такими светостойкими, как те, которые были получены с использованием индиго . [7] [9] В ответ на это предполагаемое неполноценное качество синего цвета, полученного с помощью гематоксилина, его использование для окрашивания тканей было запрещено в Англии с 1581 по 1662 год. [8] [9] После появления синтетических черных красителей в конце 19 века гематоксилин впервые был заменен в качестве красителя для хлопка. [9] В немецком трактате 1902 года об окрашивании тканей отмечается, что «... кампешевое дерево при черном окрашивании хлопка значительно пострадало от конкуренции с анилиновой черной краской». [36] Гематоксилин оставался важным черным красителем (используя купорос или хром в качестве протравы) для шерсти до 1920-х годов, когда стал доступен черный синтетический краситель, совместимый с шерстью. [9] Современное использование гематоксилина включает окрашивание шелка, кожи и швов . [7]
Гематоксилин использовался в качестве основного компонента чернил для письма и рисования , хотя время первого использования в качестве чернил неясно. [37] Гематоксилин также добавлялся в некоторые чернила на основе железного галла , которым требуется время, чтобы полностью потемнеть при нанесении на бумагу. [4] [37] В этом случае гематоксилин обеспечивал некоторый начальный цвет до того, как железный галл достигал своей полной глубины цвета. [4] [37] Уильям Льюис в 1763 году считается первым, кто использовал гематоксилин в качестве добавки в чернила на основе железного галла. [6] В 1848 году Фридлиб Фердинанд Рунге изготовил чернила на основе гематоксилина, которые не были кислотными, используя хромат калия в качестве протравы, что имело то преимущество, что они не вызывали коррозии стальных ручек. [6] Известно, что Ван Гог использовал чернила на основе гематоксилина с хромовой протравой в ряде своих рисунков и писем. [6] [5] [37]