Корреляционная световая электронная микроскопия ( CLEM ) представляет собой комбинацию оптического микроскопа (обычно флуоресцентного микроскопа ) с электронным микроскопом . В интегрированной системе CLEM образец визуализируется с помощью электронного луча и оптического светового пути одновременно. Традиционно образцы визуализируются с помощью двух отдельных микроскопических модальностей, потенциально на разных объектах и с использованием разных методов подготовки образцов. Таким образом, интегрированная CLEM считается выгодной, поскольку методология быстрее и проще, и она снижает вероятность изменений в образце в процессе сбора данных. Таким образом, наложение двух изображений выполняется автоматически в результате интеграции двух микроскопов. [1]
Эта техника используется для получения информации в различных масштабах длины: электронный микроскоп обеспечивает информацию с высоким разрешением вплоть до наномасштаба, в то время как флуоресцентный микроскоп выделяет интересующие области. CLEM используется для различных дисциплин в области наук о жизни , включая нейронауку , исследования тканей и исследования белков .
При подготовке к визуализации с помощью флуоресцентного микроскопа можно использовать различные методы, такие как флуорофоры или красители, иммуномаркирование и генетически кодируемые флуоресцентные белки. Различные флуоресцентные метки можно использовать для выделения нескольких интересующих областей в образце. [2] Недавно Кумар и др. [3] объединили измерения молекулярного натяжения на основе FRET [4] с криоэлектронной микроскопией, чтобы изучить, как сила, действующая на талин (фокальный адгезионный белок, который напрямую связывает интегрины с актином), связана с организацией актина. Области высокого натяжения талина имеют высоко выровненный и линейный нитевидный актин, тогда как области низкого натяжения имеют менее хорошо выровненную структуру актина. [3]
Электронный микроскоп используется для получения структурной информации в наномасштабе. В отличие от оптического микроскопа, электронный микроскоп способен преодолеть дифракционный предел света. Это происходит потому, что длина волны ускоренных электронов намного короче длины волны видимого света. [5]