Мутация зародышевой линии , или зародышевая мутация , представляет собой любое обнаруживаемое изменение в зародышевых клетках (клетки, которые после полного развития становятся сперматозоидами и яйцеклетками ). [1] Мутации в этих клетках являются единственными мутациями, которые могут передаваться потомству, когда либо мутировавший сперматозоид , либо ооцит объединяются, образуя зиготу . [2] После того, как происходит это событие оплодотворения, зародышевые клетки быстро делятся, чтобы произвести все клетки в организме, в результате чего эта мутация присутствует в каждой соматической и зародышевой клетке у потомства; это также известно как конституционная мутация. [2] Мутация зародышевой линии отличается от соматической мутации .
Мутации зародышевой линии могут быть вызваны различными эндогенными (внутренними) и экзогенными (внешними) факторами и могут возникать на протяжении всего развития зиготы. [3] Мутация, которая возникает только в зародышевых клетках, может привести к появлению потомства с генетическим заболеванием, которого нет ни у одного из родителей; это происходит потому, что мутация не присутствует в остальной части тела родителей, а только в зародышевой линии. [3]
Мутации зародышевой линии могут происходить до оплодотворения и на различных стадиях развития зиготы. [3] Время возникновения мутации определит, какое влияние она окажет на потомство. Если мутация возникает либо в сперме, либо в ооците до развития, то мутация будет присутствовать в каждой клетке организма особи. [4] Мутация, которая возникает вскоре после оплодотворения, но до определения зародышевых и соматических клеток, то мутация будет присутствовать в большой части клеток особи без смещения в сторону зародышевых или соматических клеток, это также называется гоносомной мутацией. [4] Мутация, которая возникает позже в развитии зиготы, будет присутствовать в небольшом подмножестве либо соматических, либо зародышевых клеток, но не тех и других. [3] [4]
Мутация зародышевой линии часто возникает из-за эндогенных факторов, таких как ошибки в клеточной репликации и окислительное повреждение. [5] Это повреждение редко восстанавливается несовершенно, но из-за высокой скорости деления зародышевых клеток может происходить часто. [5]
Эндогенные мутации более выражены в сперме, чем в яйцеклетках. [6] Это связано с тем, что сперматоциты проходят через большее количество клеточных делений в течение жизни самца, что приводит к большему количеству циклов репликации, которые могут привести к мутации ДНК. [5] Ошибки в материнской яйцеклетке также происходят, но с меньшей скоростью, чем в отцовской сперме. [5] Типы мутаций, которые происходят, также имеют тенденцию различаться между полами. [7] Яйцеклетки матери после производства остаются в стазисе, пока каждая не будет использована в овуляции. Было показано, что этот длительный период стазиса приводит к большему количеству делеций хромосомных и больших последовательностей, дупликаций, вставок и трансверсий. [7] Сперма отца, с другой стороны, подвергается непрерывной репликации в течение всей его жизни, что приводит к множеству мелких точечных мутаций, которые являются результатом ошибок репликации. Эти мутации обычно включают замены, делеции и вставки одной пары оснований. [6]
Окислительное повреждение — еще один эндогенный фактор, который может вызывать мутации зародышевой линии. Этот тип повреждения вызывается активными формами кислорода , которые накапливаются в клетке как побочный продукт клеточного дыхания . [8] Эти активные формы кислорода не имеют электрона, и поскольку они являются высоко электроотрицательными (имеют сильное электронное притяжение), они отрывают электрон от другой молекулы. [8] Это может инициировать повреждение ДНК, поскольку заставляет гуанин нуклеиновой кислоты смещаться в 8-оксогуанин (8-oxoG). Затем эта молекула 8-oxoG ошибочно принимается за тимин ДНК-полимеразой во время репликации, вызывая трансверсию G>T на одной нити ДНК и трансверсию C>A на другой. [9]
У мышей и людей спонтанная частота мутаций в мужской зародышевой линии значительно ниже, чем в соматических клетках . [10] Кроме того, хотя спонтанная частота мутаций в мужской зародышевой линии увеличивается с возрастом, скорость ее увеличения ниже, чем в соматических тканях. В популяции сперматогониальных стволовых клеток яичек целостность ДНК , по-видимому, поддерживается высокоэффективным контролем повреждений ДНК и защитными процессами восстановления ДНК . [10] Прогрессивное увеличение частоты мутаций с возрастом в мужской зародышевой линии может быть результатом снижения точности восстановления повреждений ДНК или увеличения ошибок репликации ДНК . После завершения сперматогенеза дифференцированные сперматозоиды, которые образовались, больше не обладают способностью к восстановлению ДНК и, таким образом, уязвимы для атаки распространенных окислительных свободных радикалов, которые вызывают окислительное повреждение ДНК. Такие поврежденные сперматозоиды могут подвергаться запрограммированной гибели клеток ( апоптозу ). [10]
Мутация зародышевой линии может также возникнуть из-за экзогенных факторов. Подобно соматическим мутациям, мутации зародышевой линии могут быть вызваны воздействием вредных веществ, которые повреждают ДНК зародышевых клеток. Затем это повреждение может быть либо полностью исправлено, и мутации не возникнут, либо исправлено несовершенно, что приведет к различным мутациям. [11] Экзогенные мутагены включают вредные химические вещества и ионизирующее излучение ; основное различие между мутациями зародышевой линии и соматическими мутациями заключается в том, что зародышевые клетки не подвергаются воздействию УФ-излучения , и поэтому нечасто напрямую мутируют таким образом. [12] [13]
Различные мутации зародышевой линии могут по-разному влиять на человека в зависимости от остальной части его генома. Доминантная мутация требует только одного мутировавшего гена для возникновения фенотипа заболевания , в то время как рецессивная мутация требует мутации обоих аллелей для возникновения фенотипа заболевания. [14] Например, если эмбрион унаследует уже мутировавший аллель от отца, и тот же аллель от матери подвергся эндогенной мутации, то у ребенка будет проявляться заболевание, связанное с этим мутировавшим геном, даже если только один родитель несет мутантный аллель. [14] Это только один пример того, как у ребенка может проявляться рецессивное заболевание, в то время как мутантный ген несет только один родитель. [14] Выявление хромосомных аномалий может быть обнаружено in utero при определенных заболеваниях с помощью образцов крови или ультразвука, а также инвазивных процедур, таких как амниоцентез . Позднее выявление может быть обнаружено с помощью скрининга генома.
Мутации в генах-супрессорах опухолей или протоонкогенах могут предрасполагать человека к развитию опухолей. [15] По оценкам, наследственные генетические мутации участвуют в 5-10% случаев рака. [16] Эти мутации делают человека восприимчивым к развитию опухоли, если другая копия онкогена случайным образом мутирует. Эти мутации могут возникать в зародышевых клетках, что позволяет им быть наследуемыми . [15] Люди, которые наследуют мутации зародышевой линии в TP53, предрасположены к определенным вариантам рака, поскольку белок, продуцируемый этим геном, подавляет опухоли. Пациенты с этой мутацией также подвержены риску синдрома Ли-Фраумени . [16] Другие примеры включают мутации в генах BRCA1 и BRCA2 , которые предрасполагают к раку молочной железы и яичников, или мутации в MLH1, которые предрасполагают к наследственному неполипозному колоректальному раку .
Болезнь Хантингтона — это аутосомно-доминантная мутация в гене HTT. Это расстройство вызывает деградацию мозга, что приводит к неконтролируемым движениям и поведению. [17] Мутация включает расширение повторов в белке Хантингтона, заставляя его увеличиваться в размерах. Пациенты, у которых более 40 повторов, скорее всего, будут затронуты. Начало заболевания определяется количеством повторов, присутствующих в мутации; чем больше повторов, тем раньше появятся симптомы заболевания. [17] [18] Из-за доминантной природы мутации для проявления заболевания необходим только один мутировавший аллель. Это означает, что если один из родителей болен, у ребенка будет 50% шанс унаследовать заболевание. [19] У этого заболевания нет носителей, потому что если у пациента есть одна мутация, он (скорее всего) будет затронут. Заболевание, как правило, имеет позднее начало, поэтому многие родители рожают детей до того, как узнают о наличии у них мутации. Мутацию HTT можно обнаружить с помощью скрининга генома .
Трисомия 21 (также известная как синдром Дауна ) возникает у ребенка, имеющего три копии хромосомы 21. [20] Эта дупликация хромосом происходит во время формирования половых клеток, когда обе копии хромосомы 21 оказываются в одной и той же дочерней клетке либо у матери, либо у отца, и эта мутантная половая клетка участвует в оплодотворении зиготы. [20] Другой, более распространенный способ, которым это может произойти, — во время первого события деления клеток после формирования зиготы. [20] Риск трисомии 21 увеличивается с возрастом матери, при этом риск составляет 1/2000 (0,05%) в возрасте 20 лет и увеличивается до 1/100 (1%) в возрасте 40 лет. [21] Это заболевание можно обнаружить как неинвазивными, так и инвазивными процедурами пренатально. Неинвазивные процедуры включают сканирование ДНК плода через материнскую плазму с помощью образца крови. [22]
Муковисцидоз — это аутосомно-рецессивное заболевание, которое вызывает множество симптомов и осложнений, наиболее распространенным из которых является толстая слизистая оболочка в эпителиальной ткани легких из-за неправильного солевого обмена, но также может поражать поджелудочную железу , кишечник , печень и почки . [23] [24] Многие процессы в организме могут быть затронуты из-за наследственной природы этого заболевания; если заболевание присутствует в ДНК как сперматозоида, так и яйцеклетки, то оно будет присутствовать по существу в каждой клетке и органе в организме; эти мутации могут изначально возникать в клетках зародышевой линии или присутствовать во всех родительских клетках. [23] Наиболее распространенной мутацией, наблюдаемой при этом заболевании, является ΔF508, что означает делецию аминокислоты в позиции 508. [25] Если у обоих родителей мутировал белок CFTR (муковисцидозный трансмембранный регулятор проводимости), то у их детей есть 25% вероятности наследования заболевания. [23] Если у ребенка есть одна мутировавшая копия CFTR, у него не разовьется болезнь, но он станет ее носителем. [23] Мутацию можно обнаружить до рождения с помощью амниоцентеза или после рождения с помощью пренатального генетического скрининга. [26]
Многие менделевские расстройства возникают из-за доминирующих точечных мутаций в генах, включая муковисцидоз , бета-талассемию , серповидноклеточную анемию и болезнь Тея-Сакса . [14] Вызывая двухцепочечный разрыв в последовательностях, окружающих точечную мутацию, вызывающую заболевание, делящаяся клетка может использовать немутировавшую цепь в качестве шаблона для восстановления недавно разорванной цепи ДНК, избавляясь от мутации, вызывающей заболевание. [27] Для редактирования генома использовалось множество различных методов редактирования генома, и особенно редактирование мутаций зародышевой линии в зародышевых клетках и развивающихся зиготах; однако, хотя эти методы лечения были тщательно изучены, их использование для редактирования зародышевой линии человека ограничено. [28]
Эта система редактирования вызывает двухцепочечный разрыв в ДНК, используя направляющую РНК и эффекторный белок Cas9 для разрыва остовов ДНК в определенных целевых последовательностях. [27] Эта система показала более высокую специфичность, чем TALEN или ZFN, благодаря белку Cas9, содержащему гомологичные (комплементарные) последовательности к участкам ДНК, окружающим участок, который нужно расщепить. [27] Эту разорванную цепь можно восстановить двумя основными способами: гомологично направленная репарация (HDR), если присутствует цепь ДНК, которая может быть использована в качестве шаблона (гомологичная или донорная), и если ее нет, то последовательность подвергнется негомологичному соединению концов (NHEJ). [27] NHEJ часто приводит к вставкам или делециям в интересующем гене из-за обработки тупых концов цепи и является способом изучения нокаутов генов в лабораторных условиях. [29] Этот метод можно использовать для исправления точечной мутации, используя сестринскую хромосому в качестве шаблона или предоставляя двухцепочечный шаблон ДНК с механизмом CRISPR /Cas9, который будет использоваться в качестве шаблона для исправления. [27]
Этот метод использовался как на людях, так и на животных моделях ( Drosophila , Mus musculus и Arabidopsis ) , и текущие исследования сосредоточены на том, чтобы сделать эту систему более специфичной, чтобы минимизировать нецелевые участки расщепления. [30]
Система редактирования генома TALEN (эффекторные нуклеазы, подобные активаторам транскрипции) используется для индукции двухцепочечного разрыва ДНК в определенном локусе генома, который затем может быть использован для мутации или восстановления последовательности ДНК. [31] Она функционирует, используя определенную повторяющуюся последовательность аминокислот длиной 33-34 аминокислоты. [31] Специфичность сайта связывания ДНК определяется определенными аминокислотами в положениях 12 и 13 (также называемыми повторными вариабельными остатками (RVD)) этого тандемного повтора, при этом некоторые RVD демонстрируют более высокую специфичность к определенным аминокислотам по сравнению с другими. [32] После инициирования разрыва ДНК концы могут быть соединены либо с помощью NHEJ, который вызывает мутации, либо с помощью HDR, который может исправить мутации. [27]
Подобно TALEN, цинковые пальцеобразные нуклеазы (ZFN) используются для создания двухцепочечного разрыва в ДНК в определенном локусе генома. [31] Комплекс редактирования ZFN состоит из цинкового пальцеобразного белка (ZFP) и домена расщепления рестриктазой. [33] Домен ZNP может быть изменен для изменения последовательности ДНК, которую разрезает рестриктаза , и это событие расщепления инициирует процессы клеточного восстановления, аналогичные процессам редактирования ДНК CRISPR/Cas9. [33]
По сравнению с CRISPR/Cas9 терапевтическое применение этой технологии ограничено из-за обширной инженерии, необходимой для того, чтобы сделать каждый ZFN специфичным для желаемой последовательности. [33]