stringtranslate.com

метод Гольджи

Неокортексный пирамидный нейрон человека , окрашенный методом Гольджи. Обратите внимание на апикальный дендрит, простирающийся вертикально над сомой, и многочисленные базальные дендриты, расходящиеся латерально от основания тела клетки. Фото Боба Джейкобса, Колледж Колорадо.
Рисунок Камилло Гольджи гиппокампа, окрашенного методом нитрата серебра.
Рисунок клетки Пуркинье в коре мозжечка , сделанный Сантьяго Рамоном-и-Кахалем, наглядно демонстрирующий возможности метода окрашивания Гольджи для выявления мелких деталей.

Метод Гольджи — это метод окрашивания серебром , который используется для визуализации нервной ткани под световой микроскопией. Метод был открыт Камилло Гольджи , итальянским врачом и ученым , который опубликовал первое изображение, сделанное с помощью этой техники, в 1873 году. [1] Первоначально Гольджи назвал его черной реакцией ( la reazione nera ), но он стал более известен как окраска Гольджи или более поздний метод Гольджи.

Окрашивание по Гольджи использовалось испанским нейроанатомом Сантьяго Рамоном-и-Кахалем (1852–1934) для открытия ряда новых фактов об организации нервной системы, вдохновивших на рождение учения о нейронах . В конечном итоге Рамон-и-Кахаль усовершенствовал эту технику, применив метод, который он назвал «двойной пропиткой». Техника окрашивания Рамона-и-Кахаля, используемая до сих пор, называется пятном Кахаля. [ нужна цитата ]

Механизм

Клетки нервной ткани плотно упакованы, и если окрасить все клетки, можно получить мало информации об их структуре и взаимосвязях. Более того, тонкие нитевидные отростки нервных клеток, включая аксоны и дендриты нейронов, слишком тонкие и прозрачные, чтобы их можно было увидеть с помощью обычных методов окрашивания. Метод Гольджи окрашивает ограниченное количество клеток случайным образом целиком. Механизм, посредством которого это происходит, до сих пор во многом неизвестен. [2] Дендриты, как и сома клеток, четко окрашены в коричневый и черный цвета и могут быть прослежены по всей их длине, что позволило нейроанатомам отслеживать связи между нейронами и сделать видимой сложную сетевую структуру многих частей мозга . и спинной мозг .

Окрашивание по Гольджи достигается путем пропитки фиксированной альдегидом нервной ткани дихроматом калия и нитратом серебра . Окрашенные таким образом клетки заполняются микрокристаллизацией хромата серебра .

Техника

Согласно SynapseWeb, [3] это рецепт техники окрашивания по Гольджи:

  1. Погрузите блок (ок. 10x5 мм) фиксированной формальдегидом (или перфузированной параформальдегидом - глутаральдегидом ) ткани головного мозга в 2% водный раствор дихромата калия на 2 суток.
  2. Вскоре высушите блок фильтровальной бумагой .
  3. Погрузите блок в 2%-ный водный раствор нитрата серебра еще на 2 суток.
  4. Отрежьте секции ок. Толщина 20–100  мкм .
  5. Быстро обезвоживайте в этаноле , очищайте и монтируйте (например, в Депекс или Энталан).

Этот метод с тех пор был усовершенствован, чтобы заменить осадок серебра золотом путем погружения образца в хлорид золота , затем в щавелевую кислоту с последующим удалением серебра тиосульфатом натрия . Это сохраняет большую степень тонкой структуры, а ультраструктурные детали отмечены мелкими частицами золота. [4]

Цитировать

Рамон-и-Кахаль сказал о методе Гольджи:

Я выразил удивление, которое я испытал, увидев своими глазами удивительную разоблачающую силу хром-серебряной реакции и отсутствие какого-либо волнения в научном мире, вызванного ее открытием.
Recuerdos de mi vida, Vol. 2, «История моего научного труда» . Мадрид: Моя, 1917, с. 76.

Рекомендации

  1. ^ Фингер, Стэнли (1994). Истоки нейробиологии: история исследований функций мозга . Издательство Оксфордского университета. п. 45. ИСБН 9780195146943. OCLC  27151391. В 1873 году Гольджи опубликовал первое краткое, но «адекватное» изображение la reazione nera (черной реакции), на котором была показана вся нервная клетка, включая ее тело, аксон и ветвящиеся дендриты.
  2. ^ Николлс, JG (2001). От нейрона к мозгу . Синауэр Ассошиэйтс. стр. 5. ISBN 0878934391.
  3. ^ Спейсек, Дж., Фиала, Дж. (28 июня 2002 г.). «Визуализация дендритных шипиков». СинапсВеб. Архивировано из оригинала 26 июня 2010 г. Проверено 17 июня 2010 г.{{cite web}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  4. ^ "Дом - Спрингер" .[ мертвая ссылка ]

Внешние ссылки