Пиримидиновые димеры представляют собой молекулярные повреждения , происходящие от оснований тимина или цитозина в ДНК , возникающие в результате фотохимических реакций . [1] [2] Эти повреждения, обычно связанные с прямым повреждением ДНК , [3] индуцируются ультрафиолетовым светом (УФ), в частности УФС , и приводят к образованию ковалентных связей между соседними азотистыми основаниями вдоль нуклеотидной цепи вблизи их углерод-углеродных двойных связей, [4] фотосвязанные димеры флуоресцентны . [5] Такая димеризация , которая также может происходить в двухцепочечной РНК (dsRNA) с участием урацила или цитозина , приводит к созданию циклобутановых пиримидиновых димеров (CPD) и 6-4 фотопродуктов . Эти премутагенные повреждения изменяют структуру спирали ДНК , что приводит к аномальному неканоническому спариванию оснований и, следовательно, соседние тимины или цитозины в ДНК будут образовывать циклобутановое кольцо при соединении вместе и вызывать искажение ДНК. Это искажение препятствует репликации ДНК и механизмам транскрипции за пределами участка димеризации. [6]
Хотя в клетке кожи, подвергшейся воздействию солнечного света , может происходить до 100 таких реакций в секунду, что приводит к повреждению ДНК , они, как правило, быстро исправляются посредством репарации ДНК , например, посредством реактивации фотолиазы или репарации нуклеотидов путем эксцизионной репарации , причем последняя распространена у людей. Напротив, некоторые бактерии используют фотолиазу, работающую на солнечном свете, для восстановления повреждений ДНК, вызванных пиримидиновым димером. Неисправленные повреждения могут привести к ошибочному включению нуклеотидов полимеразным аппаратом. Подавляющее повреждение ДНК может спровоцировать мутации в геноме организма , что может привести к образованию раковых клеток. [7] Неисправленные повреждения также могут нарушать функцию полимеразы, вызывать ошибки транскрипции или репликации или останавливать репликацию. В частности, пиримидиновые димеры способствуют солнечным ожогам и выработке меланина и являются основным фактором развития меланомы у людей.
Пиримидиновые димеры включают несколько типов, каждый из которых имеет различную структуру и влияние на целостность ДНК.
Циклобутановый пиримидиновый димер (CPD) — это димер, который имеет четырехчленное кольцо, образованное путем слияния двух двойных связей углерода из соседних пиримидинов. CPD нарушают образование пары оснований во время репликации ДНК , что может привести к мутациям . [8] [9] [10]
Фотопродукт 6–4 (6–4 пиримидин– пиримидон или 6–4 пиримидин–пиримидинон) представляет собой альтернативную димерную конфигурацию, состоящую из одинарной ковалентной связи, соединяющей углерод в позиции 6 (C6) одного пиримидинового кольца и углерод в позиции 4 (C4) кольца соседнего основания. [11] Этот тип преобразования происходит в три раза реже, чем CPD, и имеет более высокий мутагенный риск. [12]
Третий тип молекулярного поражения – пиримидинон Дьюара , возникающий в результате обратимой изомеризации фотопродукта 6–4 при дальнейшем воздействии света. [13]
Мутагенез, процесс формирования мутаций, в значительной степени зависит от полимераз транслезии , которые часто вносят мутации в сайты пиримидиновых димеров. Это явление отмечено как у прокариот , через ответ SOS на мутагенез, так и у эукариот . Несмотря на то, что тимин-тиминовые CPD являются наиболее распространенными повреждениями, вызванными УФ, полимеразы транслезии демонстрируют тенденцию к включению аденинов , что приводит к точной репликации тиминовых димеров чаще, чем нет. Наоборот, цитозины, которые являются частью CPD, подвержены дезаминированию , что приводит к переходу цитозина в тимин, тем самым способствуя процессу мутации. [14]
Пиримидиновые димеры вносят локальные конформационные изменения в структуру ДНК , что позволяет распознавать повреждения ферментами репарации. [15] У большинства организмов (за исключением плацентарных млекопитающих, таких как люди) их можно восстановить с помощью фотореактивации. [16] Фотореактивация — это процесс восстановления, в котором ферменты фотолиазы обращают ЦПД с помощью фотохимических реакций. Кроме того, некоторые фотолиазы также могут восстанавливать 6-4 фотопродукта повреждения ДНК, вызванного УФ-излучением. Ферменты фотолиазы используют флавинадениндинуклеотид (ФАД) в качестве кофактора в процессе восстановления. [17]
Доза УФ-излучения, которая снижает популяцию клеток дрожжей дикого типа до 37% выживаемости, эквивалентна (предполагая распределение Пуассона попаданий) дозе УФ-излучения, которая вызывает в среднем одно летальное попадание в каждую из клеток популяции. [18] Количество пиримидиновых димеров, индуцированных на гаплоидный геном при этой дозе, было измерено как 27 000. [18] Мутантный штамм дрожжей, дефектный в трех путях, посредством которых, как известно, восстанавливаются пиримидиновые димеры в дрожжах, также был протестирован на чувствительность к УФ-излучению. В этом случае было обнаружено, что только один или, максимум, два невосстановленных пиримидиновых димера на гаплоидный геном являются летальными для клетки. [18] Таким образом, эти результаты указывают на то, что восстановление тиминовых димеров в дрожжах дикого типа является высокоэффективным.
Нуклеотидная эксцизионная репарация , иногда называемая «темновой реактивацией», является более общим механизмом для восстановления повреждений и является наиболее распространенной формой восстановления ДНК для пиримидиновых димеров у людей. Этот процесс работает с использованием клеточного механизма для обнаружения димеризованных нуклеотидов и вырезания повреждения. После удаления CPD в цепи ДНК остается пробел, который необходимо заполнить. Механизм ДНК использует неповрежденную комплементарную цепь для синтеза нуклеотидов и последующего заполнения пробела на ранее поврежденной цепи. [6]
Пигментная ксеродерма (XP) — редкое генетическое заболевание у людей, при котором гены, кодирующие белки NER, мутируют и приводят к снижению способности бороться с пиримидиновыми димерами, которые образуются в результате повреждения ультрафиолетом. Люди с XP также подвержены гораздо более высокому риску рака, чем другие, с более чем 5000-кратным увеличением риска развития рака кожи. [7] Некоторые общие черты и симптомы XP включают изменение цвета кожи и образование множественных опухолей, вызванных воздействием ультрафиолета.
У некоторых организмов есть и другие способы выполнения ремонта:
Другим типом механизма репарации, который сохраняется у людей и других не млекопитающих, является синтез через повреждение. Обычно повреждение, связанное с пиримидиновым димером, блокирует синтез клеточного аппарата после поврежденного участка. Однако при синтезе через повреждение CPD обходит полимеразы через повреждение, и репликация и/или транскрипционный аппарат может продолжаться после повреждения. Одна специфическая ДНК-полимераза через повреждение, ДНК-полимераза η, дефицитна у людей с XPD. [20]
Прямое повреждение ДНК уменьшается с помощью солнцезащитного крема, что также снижает риск развития солнечного ожога. Когда солнцезащитный крем находится на поверхности кожи, он фильтрует УФ-лучи, что ослабляет их интенсивность. Даже когда молекулы солнцезащитного крема проникают в кожу, они защищают от прямого повреждения ДНК, поскольку УФ-свет поглощается солнцезащитным кремом, а не ДНК. [21] Солнцезащитный крем в первую очередь работает, поглощая УФ-свет солнца с помощью органических соединений, таких как оксибензон или авобензон. Эти соединения способны поглощать УФ-энергию солнца и переходить в состояния с более высокой энергией. В конце концов, эти молекулы возвращаются в состояния с более низкой энергией, и при этом первоначальная энергия УФ-света может быть преобразована в тепло. Этот процесс поглощения работает для снижения риска повреждения ДНК и образования пиримидиновых димеров. UVA-свет составляет 95% УФ-света, достигающего Земли, тогда как UVB-свет составляет всего около 5%. UVB-свет — это форма УФ-света, которая отвечает за загар и ожоги. Солнцезащитные кремы защищают как от UVA, так и от UVB-лучей. В целом, солнечные ожоги являются примером повреждения ДНК, вызванного УФ-лучами, и это повреждение может происходить в форме свободных радикалов, а также димеризации соседних нуклеотидов. [22]