Нитроцеллюлозное предметное стекло

Нитроцеллюлозное предметное стекло (или предметное стекло из нитроцеллюлозной пленки ) представляет собой предметное стекло микроскопа , покрытое нитроцеллюлозой , которая используется для связывания биологического материала, часто белка , для колориметрических и флуоресцентных анализов. Для этой цели нитроцеллюлозное предметное стекло обычно считается более предпочтительным, чем стекло, поскольку оно связывает гораздо больше белка и защищает третичную структуру белка (и другого биологического материала, например клеток). Обычно нитроцеллюлозные предметные стекла имеют тонкую непрозрачную пленку нитроцеллюлозы на стандартном предметном стекле размером 25 × 75 мм . Пленка чрезвычайно чувствительна к контакту и посторонним материалам; контакт вызывает деформацию и осаждение материалов, особенно жидкостей. ^{[ нужна цитата ]}

Нитроцеллюлозное предметное стекло отличается от нитроцеллюлозной мембраны, которая обычно фильтрует белок из раствора (например, тесты на беременность в кабинете врача ), но служит той же цели: обнаружить присутствие и/или уровень концентрации определенного биологического материала.

Микрочипы

Нитроцеллюлозные слайды используются в основном в протеомике для создания белковых микрочипов с помощью автоматизированных систем, которые распечатывают слайды и записывают результаты. С помощью предметного стекла также возможны микрочипы клеточных аналитов, массивы клеточного лизата , микрочипы антител , печать тканей, ^{[1] [2] иммуноматрицы и т. д.}

Нитроцеллюлоза флуоресценция

Из-за высокой шероховатости поверхности обычные белые нитроцеллюлозные пленки рассеивают и отражают большое количество возбуждающего и испускаемого света во время обнаружения флуоресценции в сканере микрочипов. Кроме того, нитроцеллюлоза проявляет естественную автофлуоресценцию на обычно используемых длинах волн обнаружения. ^[3] Оба эти фактора приводят к высокому фоновому флуоресцентному сигналу от этих мембранных слайдов. Чтобы решить эту проблему, был разработан новый процесс создания черных мембран, которые поглощают рассеянный свет, значительно уменьшая фоновую автофлуоресценцию и, таким образом, обеспечивая очень низкую и однородную автофлуоресценцию для достижения значительно улучшенного динамического диапазона. ^[4] Эти слайды коммерчески доступны через Schott AG . ^{[5] [ самостоятельный источник? ]} Тем не менее, обычные белые нитроцеллюлозные пленки продолжают оставаться доминирующей поверхностью для многих применений белковых микрочипов, поскольку приведенные выше утверждения не соответствуют требованиям конечного пользователя. Несмотря на это, производители нитроцеллюлозных предметных стекол, такие как Grace Bio-Labs, продолжают разрабатывать новые нитроцеллюлозные поверхности для дальнейшей оптимизации их использования в белковых микрочипах.

Метод количественного определения белка на предметных стеклах, покрытых нитроцеллюлозой, использует флуоресцентное обнаружение в ближнем ИК-диапазоне с помощью квантовых точек . Традиционный сигнал к шуму пористой нитроцеллюлозы ограничивается автофлуоресценцией нитроцеллюлозы на соответствующих длинах волн возбуждения и излучения для стандартных органических флуоресцентных детекторов. Зонды обнаружения в ближнем ИК-диапазоне возбуждаются и считывают волны излучения, находящиеся за пределами диапазона флуоресценции нитроцеллюлозы. ^{[6] [ самостоятельный источник? ]}

Рекомендации

1. МакГрат СМ, Грудзин Дж.Л., Декер Д.А., Роббинс Т.О. (сентябрь 1991 г.). «Цитометрически когерентный перенос рецепторных белков на микропористые мембраны». БиоТехники . 11 (3): 352–4, 356, 358–61. ПМИД  1718329.
2. МакГрат СМ, Грудзиен Дж.Л., Левин А.Дж. (1995). «Анализ клеток высокой четкости in situ с использованием микропористых пленок». Клеточное зрение . 11 (3): 499–509. ISSN  1073-1180.
3. Зауэр, Урсула (2011). «Воздействие подложек на иммобилизацию зонда». Белковые микрочипы . Методы молекулярной биологии. Том. 785. стр. 363–378. дои : 10.1007/978-1-61779-286-1_24. ISBN 978-1-61779-285-4. ISSN  1064-3745.
4. Холлас, М; Джаллерат, Э; Пфланц, К; Праулич, И; Уолтер, Дж; Шталь, Ф; Шепер, Т (2006). «Новая черная 3D-подложка для белковых микрочипов с улучшенным динамическим диапазоном». Опреснение . 199 (1–3): 230. doi :10.1016/j.desal.2006.03.055.
5. «SCHOTT сотрудничает с Sartorius Stedim Biotech для разработки новой линейки предметных стекол, покрытых нитроцеллюлозой, для белковых микрочипов» (PDF) . Информационный бюллетень Nexterion . 3 : 4–5. Сентябрь 2007.
6. Мари-Лора Шнайдер, Адриана Маркес-Лаграулет, Ричард Паскези, Майкл Шульц - (2014), «Инфракрасное обнаружение уменьшает автофлуоресценцию нитроцеллюлозы и улучшает соотношение сигнал-шум в анализах RPPA по сравнению с обнаружением видимой длины волны», Innopsys Inc., Чикаго, Иллинойс,