Тест на нейтрализацию снижения зубного налета

Тест нейтрализации бляшек используется для количественной оценки титра нейтрализующих антител к вирусу . ^{[1] [2]}

Образец сыворотки или раствор антитела для тестирования разбавляют и смешивают с вирусной суспензией. Инкубируют, чтобы антитело вступило в реакцию с вирусом. Смесь выливают на сливающийся монослой клеток-хозяев. Поверхность клеточного слоя покрывают слоем агара или карбоксиметилцеллюлозы, чтобы предотвратить беспорядочное распространение вируса. Концентрацию бляшкообразующих единиц можно оценить по количеству бляшек (областей инфицированных клеток), образовавшихся через несколько дней. В зависимости от вируса бляшкообразующие единицы измеряют с помощью микроскопического наблюдения, флуоресцентных антител или специфических красителей, которые реагируют с инфицированными клетками. ^[3]

Концентрация сыворотки, которая снижает количество бляшек на 50% по сравнению с вирусом без сыворотки, дает меру того, сколько антител присутствует или насколько они эффективны. Это измерение обозначается как значение PRNT ₅₀ .

В настоящее время он считается «золотым стандартом» для обнаружения и измерения антител, которые могут нейтрализовать вирусы, вызывающие многие заболевания. ^{[4] [5]} Он имеет более высокую чувствительность , чем другие тесты, такие как гемагглютинация и многие коммерческие иммуноферментные анализы, без ущерба для специфичности . Более того, он более специфичен, чем другие серологические методы диагностики некоторых арбовирусов .

Однако этот тест относительно громоздкий и требует много времени (занимает несколько дней) по сравнению с наборами для ИФА, которые дают быстрые результаты (обычно от нескольких минут до нескольких часов). ^{[ необходима цитата ]}

Недавно выявленная проблема с этим анализом заключается в том, что нейтрализующая способность антител зависит от стадии созревания вириона и типа клеток, используемых в анализе. ^[6] Поэтому, если для анализа используется неправильная клеточная линия, может показаться, что антитела обладают нейтрализующей способностью, хотя на самом деле это не так, или наоборот, они могут казаться неэффективными, хотя на самом деле обладают нейтрализующей способностью. ^{[ необходима цитата ]}

Смотрите также

• ИФА  – Метод обнаружения антигена с использованием антитела и фермента
• Иммунный комплекс  – молекула, образованная связыванием антигенов с антителами.
• Количественная оценка вирусов с использованием анализа бляшек

Ссылки

1. Шмидт, NJ; Деннис, J; Леннетт, EH (июль 1976 г.). «Тест нейтрализации бляшек для человеческого цитомегаловируса на основе усиленного поглощения нейтрального красного вирус-инфицированными клетками». Журнал клинической микробиологии . 4 (1): 61–66. doi :10.1128/jcm.4.1.61-66.1976. ISSN  0095-1137. PMC 274391.  PMID 182716  .
2. Классе, П. Дж. (2014-09-09). «Нейтрализация инфекционности вируса антителами: старые проблемы в новых перспективах». Достижения в биологии . 2014 : 1–24. doi : 10.1155/2014/157895 . PMC 4835181. PMID  27099867. 
3. Schmidt, NJ; J Dennis; EH Lennette (июль 1976 г.). «Тест нейтрализации бляшек для человеческого цитомегаловируса на основе усиленного поглощения нейтрального красного клетками, инфицированными вирусом» (PDF) . Journal of Clinical Microbiology . 4 (1): 61–66. doi :10.1128/jcm.4.1.61-66.1976. ISSN  0095-1137. PMC 274391 . PMID  182716. 
4. Томас, Стивен Дж.; Ананда Нисалак; Кэтрин Б. Андерсон; Дэниел Х. Либрати; Сирипен Калаянарудж; Дэвид В. Вон; Роберт Путнак; Роберт В. Гиббонс; Ричард Джарман; Тимоти П. Энди (ноябрь 2009 г.). «Тест нейтрализации бляшек лихорадки денге (PRNT) при первичных и вторичных инфекциях вируса денге: как изменения в условиях анализа влияют на эффективность». Американский журнал тропической медицины и гигиены . 81 (5): 825–833. doi :10.4269/ajtmh.2009.08-0625. ISSN  0002-9637. PMC 2835862. PMID 19861618  . 
5. Ратнам, С.; В. Гадаг; Р. Уэст; Дж. Беррис; Э. Оутс; Ф. Стид; Н. Буилианн (1995-04-01). «Сравнение коммерческих наборов для иммуноферментного анализа с тестом нейтрализации бляшек для обнаружения антител к вирусу кори». J. Clin. Microbiol . 33 (4): 811–815. doi : 10.1128/JCM.33.4.811-815.1995 . PMC 228046. PMID  7790442 . 
6. Мукерджи, С.; Дауд, КА; Манхарт, К.Дж.; Леджервуд, ДЖ.Э.; Дурбин, А.П.; Уайтхед, С.С.; Пирсон, ТК (2014). «Механизм и значение нейтрализации флавивирусов в зависимости от типа клеток». Журнал вирусологии . 88 (13): 7210–7220. doi :10.1128/JVI.03690-13. ISSN  0022-538X. PMC 4054442. PMID 24741083  .