Тест связывания комплемента

Схема реакции связывания комплемента

Реакция связывания комплемента — это иммунологический медицинский тест, который может использоваться для обнаружения наличия либо специфического антитела , либо специфического антигена в сыворотке пациента , в зависимости от того, происходит ли связывание комплемента . Он широко использовался для диагностики инфекций, особенно микробов, которые нелегко обнаружить методами культивирования, и при ревматических заболеваниях. Однако в клинических диагностических лабораториях он был в значительной степени вытеснен другими серологическими методами, такими как ИФА , и методами обнаружения патогенов на основе ДНК, в частности ПЦР .

Процесс

Система комплемента — это система сывороточных белков, которые реагируют с комплексами антиген-антитело. Если эта реакция происходит на поверхности клетки, она приведет к образованию трансмембранных пор и, следовательно, к разрушению клетки. Основные этапы реакции связывания комплемента следующие: ^[1]

1. Сыворотку отделяют от пациента.
2. У пациентов в сыворотке крови от природы разный уровень комплементарных белков. Чтобы свести на нет любые эффекты, которые это может оказать на тест, комплементарные белки в сыворотке пациента должны быть разрушены и заменены известным количеством стандартизированных комплементарных белков.
   1. Сыворотку нагревают таким образом, что все белки комплемента, но ни одно из антител, в ней разрушаются. (Это возможно, поскольку белки комплемента гораздо более восприимчивы к разрушению под воздействием тепла, чем антитела.)
   2. К сыворотке добавляют известное количество стандартных комплементарных белков. (Эти белки часто получают из сыворотки морской свинки.)
3. К сыворотке добавляется интересующий антиген.
4. К сыворотке добавляются эритроциты барана (sRBC) ^[2] , которые были предварительно связаны с антителами к sRBC. Тест считается отрицательным, если раствор в этот момент становится розовым, и положительным в противном случае.

Если сыворотка пациента содержит антитела против интересующего антигена, они свяжутся с антигеном на этапе 3, образуя комплексы антиген-антитело. Белки комплемента будут реагировать с этими комплексами и истощаться. Таким образом, когда комплексы sRBC-антитело добавляются на этапе 4, в сыворотке не останется комплемента. Однако, если антител против интересующего антигена нет, комплемент не будет истощаться и он будет реагировать с комплексами sRBC-антитело, добавленными на этапе 4, лизируя sRBC и выливая их содержимое в раствор, тем самым окрашивая раствор в розовый цвет. ^[1]

Тестирование на антиген

Хотя обнаружение антител является наиболее распространенным форматом теста, его также можно использовать для проверки на наличие антигена. В этом случае сыворотка пациента дополняется специфическим антителом, чтобы вызвать образование комплексов; добавление комплемента и индикатора sRBC выполняется, как и прежде. ^{[ необходима цитата ]}

Полуколичественное тестирование

Тест можно сделать количественным, установив ряд разведений сыворотки пациента и определив наивысший фактор разбавления, который все еще даст положительный тест CF. Этот фактор разбавления соответствует титру . [ ^{необходима цитата ]}

Ссылки

1. "Анимационный тест 4 - Тест на фиксацию комплемента". highered.mheducation.com .
2. C. Vaman Rao (2005). Иммунология: учебник. Alpha Science Int'l Ltd. стр. 112–. ISBN 978-1-84265-255-8. Получено 3 декабря 2010 г.

Внешние ссылки

• Тесты на комплемент+фиксацию в рубриках медицинских предметов Национальной медицинской библиотеки США (MeSH)