stringtranslate.com

Анализ связывания лиганда

Анализ связывания лиганда ( LBA ) — это анализ или аналитическая процедура, которая основана на связывании молекул лиганда с рецепторами , антителами или другими макромолекулами . [1] Метод обнаружения используется для определения наличия и количества образованных комплексов лиганд-рецептор, и это обычно определяется электрохимически или с помощью метода флуоресцентного обнаружения . [2] Этот тип аналитического теста может использоваться для проверки наличия целевых молекул в образце, которые, как известно, связываются с рецептором. [3]

Существует множество типов анализов связывания лигандов, как радиоактивных , так и нерадиоактивных. [4] [5] [6] Некоторые новые типы называются анализами «смешай и измерь», поскольку для их завершения требуется меньше этапов, например, исключается удаление несвязанных реагентов. [5]

Анализы связывания лигандов используются в основном в фармакологии для различных нужд. В частности, несмотря на эндогенные рецепторы человеческого организма , гормоны и другие нейротрансмиттеры , фармакологи используют анализы для создания лекарств , которые являются селективными или имитируют эндогенно обнаруженные клеточные компоненты. С другой стороны, такие методы также доступны для создания антагонистов рецепторов с целью предотвращения дальнейших каскадов. [7] Такие достижения предоставляют исследователям возможность не только количественно определять гормоны и гормональные рецепторы, но и вносить важную фармакологическую информацию в разработку лекарств и планы лечения. [8]

История

Исторически методы анализа связывания лиганда широко использовались для количественной оценки концентрации гормона или гормонального рецептора в плазме или в ткани. Методология анализа связывания лиганда количественно определяла концентрацию гормона в исследуемом материале путем сравнения эффектов исследуемого образца с результатами различных количеств известного белка ( лиганда ).

Основы, на которых был построен анализ связывания лиганда, являются результатом работы Карла Ландштейнера в 1945 году и его работы по иммунизации животных путем получения антител к определенным белкам. [9] Работа Ландштейнера продемонстрировала, что технология иммуноанализа позволяет исследователям проводить анализ на молекулярном уровне. Первый успешный анализ связывания лиганда был описан в 1960 году Розалин Сассман Ялоу и Соломоном Берсоном . [9] Они исследовали взаимодействие связывания инсулина и инсулин-специфического антитела, а также разработали первый радиоиммуноанализ (РИА) для инсулина. Эти открытия предоставили ценную информацию как относительно чувствительности, так и специфичности белковых гормонов, обнаруженных в жидкостях на основе крови. [9] Ялоу и Берсон получили Нобелевскую премию по медицине в результате своих достижений. Благодаря развитию технологии РИА исследователи смогли выйти за рамки использования радиоактивности и вместо этого использовать жидко- и твердофазные, конкурентные и иммунорадиометрические анализы. [9] Как прямой результат этих монументальных открытий, исследователи продолжили развитие анализов связывания лигандов во многих аспектах в области биологии, химии и т. п. Например, лаборатория Лоис в Калифорнийском технологическом институте использует искусственные лиганды и рецепторы на нейронах для отслеживания потока информации в мозге. [10] Они специально используют индуцированный лигандом внутримембранный протеолиз, чтобы распутать проводку мозга у дрозофилы и других моделей. [11] Когда искусственный лиганд на одном нейроне связывается с рецептором на другом, экспрессия GFP активируется в акцепторном нейроне, демонстрируя полезность анализов связывания лигандов в нейронауке и биологии. [12]

Приложения

Анализы связывания лигандов позволяют измерить взаимодействия, происходящие между двумя молекулами, например, связывание белков, а также степень сродства (слабое, сильное или отсутствие связи), с которой реагенты связываются друг с другом. [13] Основные аспекты анализов связывания включают, помимо прочего, уровень концентрации реагентов или продуктов (см. раздел «Радиоактивные вещества»), поддержание константы равновесия реагентов на протяжении всего анализа, а также надежность и достоверность связанных реакций. [13] Хотя анализы связывания просты, они не дают информации о том, влияет ли тестируемое соединение на функцию мишени. [14]

Радиолигандные анализы

Радиолиганды используются для измерения связывания лиганда с рецепторами и в идеале должны иметь высокое сродство, низкое неспецифическое связывание, высокую специфическую активность для обнаружения низкой плотности рецепторов и специфичность рецептора. [7]

Уровни радиоактивности радиолиганда (на моль) называются удельной активностью (SA), которая измеряется в Ки/ммоль. [15] Фактическая концентрация радиолиганда определяется конкретной исходной смесью, для которой был получен радиолиганд (от производителей). [15] Следующее уравнение определяет фактическую концентрацию:

[15]

Насыщенность связывания

Анализ насыщения используется в различных типах тканей, таких как фракции частично очищенной плазмы из гомогенатов тканей , клетки, трансфицированные клонированными рецепторами, и клетки, которые либо находятся в культуре, либо изолированы до анализа. [7] Анализ связывания насыщения может определить сродство и плотность рецептора. Он требует, чтобы выбранная концентрация была определена эмпирически для нового лиганда.

Существуют две общие стратегии, которые применяются для этого типа эксперимента: [7] Увеличение количества добавляемого радиолиганда при сохранении как постоянной удельной активности , так и постоянной концентрации радиолиганда, или уменьшение удельной активности радиолиганда за счет добавления немеченого лиганда. [7]

Скетчард участок

Пример графика Скэтчарда

График Скэтчарда (график Розенталя) может быть использован для отображения сродства радиолиганда. На этом типе графика соотношение связанного/свободного радиолиганда отображается против связанного радиолиганда. Наклон линии равен отрицательной обратной величине константы сродства (K). Пересечение линии с осью X является оценкой Bmax. [7] График Скэтчарда может быть стандартизирован по соответствующему эталону, так что можно будет провести прямое сравнение плотности рецепторов в различных исследованиях и тканях. [7] Этот пример графика показывает, что радиолиганд связывается с одним сродством. Если бы лиганд связался с несколькими сайтами, имеющими разное сродство радиолиганда, то график Скэтчарда показал бы вогнутую линию. [7]

Нелинейная подгонка кривой

Программы нелинейной подгонки кривых, такие как Equilibrium Binding Data Analysis (EBDA) и LIGAND, используются для расчета оценок параметров связывания из экспериментов по насыщению и конкурентному связыванию. [16] EBDA выполняет начальный анализ, который преобразует измеренную радиоактивность в молярные концентрации и создает из данных наклоны Хилла и преобразования Скэтчарда . Анализ, выполненный EBDA, затем может быть использован LIGAND для оценки указанной модели связывания. [16]

Конкурс обязательный

Конкурентное связывание используется для определения наличия селективности для конкретного лиганда для подтипов рецепторов, что позволяет определить плотность и долю каждого подтипа в ткани. [7] Конкурентные кривые получают путем построения графика специфического связывания, представляющего собой процент от общего связывания, против логарифмической концентрации конкурирующего лиганда. [7] Крутая кривая конкуренции обычно указывает на связывание с одной популяцией рецепторов, тогда как пологая кривая или кривая с четкими точками перегиба указывает на множественные популяции участков связывания. [16]

Анализы нерадиоактивного связывания

Несмотря на различные методы, используемые для нерадиоактивных анализов, они требуют, чтобы лиганды демонстрировали схожие характеристики связывания с их радиоактивным эквивалентом. Таким образом, результаты как нерадиоактивных, так и радиоактивных анализов будут оставаться согласованными. [5] Одно из самых больших различий между радиоактивными и нерадиоактивными лигандными анализами заключается в опасности для здоровья человека. Радиоактивные анализы вредны тем, что они производят радиоактивные отходы; тогда как нерадиоактивные лигандные анализы используют другой метод, чтобы избежать производства токсичных отходов. Эти методы включают, но не ограничиваются, флуоресцентную поляризацию (FP), флуоресцентный резонансный перенос энергии (FRET) и поверхностный плазмонный резонанс (SPR). Для измерения процесса связывания лиганда с рецептором большинство нерадиоактивных методов требуют, чтобы маркировка не мешала молекулярным взаимодействиям. [5]

Поляризация флуоресценции

Поляризация флуоресценции (FP) является синонимом анизотропии флуоресценции . Этот метод измеряет изменение скорости вращения флуоресцентно-меченого лиганда после его связывания с рецептором. [5] Поляризованный свет используется для возбуждения лиганда, и измеряется количество испускаемого света. [5] Деполяризация испускаемого света зависит от того, связан лиганд (например, с рецептором). Если лиганд не связан, он будет иметь большую деполяризацию (лиганд может свободно вращаться быстро, вращая свет). Если лиганд связан, объединенный больший размер приводит к более медленному вращению и, следовательно, уменьшению деполяризации. [5] Преимущество этого метода в том, что он требует только одного шага маркировки. Однако этот метод менее точен при низких наномолярных концентрациях. [5]

Кинетический анализ исключения

Кинетический анализ исключения (KinExA) измеряет свободный (несвязанный) лиганд или свободный рецептор, присутствующий в смеси лиганда, рецептора и комплекса лиганд-рецептор. Измерения позволяют количественно оценить концентрацию активного лиганда и константы связывания (равновесие, скорости включения и выключения) взаимодействия. [17]

Передача энергии резонанса флуоресценции

Диаграмма Яблонского FRET

Флуоресцентный резонансный перенос энергии (FRET) использует энергию, передаваемую между донором и молекулами акцептора, которые находятся в непосредственной близости. [5] FRET использует флуоресцентно меченый лиганд, как и в случае с FP. [5] Передача энергии в рамках FRET начинается с возбуждения донора. [5] Диполь -дипольное взаимодействие между молекулой донора и акцептора передает энергию от донора к молекуле акцептора. [5] Если лиганд связан с комплексом рецептор-антитело, то акцептор будет излучать свет. [5] При использовании FRET критически важно, чтобы расстояние между акцептором и донором было меньше 10 нм, в дополнение к перекрывающемуся спектру поглощения между акцептором и донором, и чтобы антитело не мешало или не блокировало сайт связывания лиганда. [5]

Поверхностный плазмонный резонанс

Конфигурация поверхностного плазмонного резонанса (ППР)

Поверхностный плазмонный резонанс (ППР) не требует маркировки лиганда. [5] Вместо этого он работает, измеряя изменение угла, под которым поляризованный свет отражается от поверхности ( показатель преломления ). [5] Угол связан с изменением массы или толщины слоя, например, иммобилизация лиганда, изменяющая угол резонанса, что увеличивает отраженный свет. [5] Устройство, для которого получен ППР, включает в себя сенсорный чип, проточную ячейку, источник света, призму и детектор положения с фиксированным углом. [5]

Анализы связывания в жидкой фазе

Иммунопреципитация

Анализ связывания лиганда в жидкой фазе иммунопреципитации (ИП) — это метод, который используется для очистки или обогащения определенного белка или группы белков с использованием антитела из сложной смеси. Экстракт разрушенной ткани или клеток смешивается с антителом против интересующего антигена, что приводит к образованию комплекса антиген-антитело. [18] Когда концентрация антигена низкая, осаждение комплекса антиген-антитело может занять часы или даже дни, и становится трудно выделить небольшое количество образовавшегося осадка. [18]

Иммуноферментный анализ ( ELISA ) или вестерн-блоттинг — это два разных способа получения и анализа очищенного антигена (или нескольких антигенов). Этот метод включает очистку антигена с помощью прикрепленного антитела на твердой (бусинчатой) подложке, такой как агарозная смола. [19] Иммобилизованный белковый комплекс может быть получен либо в один этап, либо последовательно. [19]

IP также может использоваться в сочетании с биосинтетической радиоизотопной маркировкой. Используя эту комбинацию методов, можно определить, синтезируется ли определенный антиген тканью или клеткой. [18]

Анализы твердофазного связывания

Многолуночный планшет

Многолуночные планшеты-набор

Многолуночные планшеты представляют собой несколько чашек Петри, объединенных в один контейнер, с числом отдельных лунок от 6 до более чем 1536. Многолуночные планшетные анализы удобны для обработки необходимых дозировок и репликатов. [20] Существует широкий спектр типов планшетов, которые имеют стандартизированную площадь основания, вспомогательное оборудование и измерительные системы. [20] Электроды могут быть интегрированы в нижнюю часть планшетов для сбора информации в результате анализов связывания. [9] Связывающие реагенты иммобилизуются на поверхности электрода, а затем могут быть проанализированы. [9]

Многолуночные планшеты производятся для того, чтобы позволить исследователям создавать и манипулировать различными типами анализов (например, биоанализами , иммуноанализами и т. д.) в каждом многолуночном планшете. [20] Из-за изменчивости форматирования многолуночных планшетов нередко возникают артефакты. Артефакты возникают из-за различных сред, обнаруженных в разных лунках на планшете, особенно вблизи краев и центра лунок. Такие эффекты известны как эффекты лунок, краевые эффекты и эффекты пластин. Таким образом, подчеркивается необходимость правильного расположения конструкций анализов как внутри, так и между каждой пластиной. [20]

Использование многолуночных планшетов является обычным при измерении активности биологического анализа in vitro или измерении иммунореактивности с помощью иммуноанализов. [20] Артефактов можно избежать, поддерживая однородность планшета, применяя одинаковую дозу определенной среды в каждой лунке, в дополнение к поддержанию атмосферного давления и температурных показателей для снижения влажности. [20]

На бусине

Анализы связывания лигандов на шариках представляют собой методы изоляции основных белков, ДНК/РНК или других биомолекул, находящихся в неопределенных суспензиях, и могут использоваться в различных биохроматографических приложениях. Биоаффинные лиганды ковалентно связаны с кремниевыми шариками с терминальными отрицательно заряженными силанольными группами или полистироловыми шариками и используются для выделения и очистки основных белков или адсорбции биомолекул. После связывания разделение выполняется центрифугированием (плотностное разделение) или притяжением магнитного поля (только для магнитных частиц). Шарики можно промывать для обеспечения чистоты изолированной молекулы перед ее растворением методами ионного обмена. Методы прямого анализа, основанные на ферментативном/флуоресцентном обнаружении (например, HRP, флуоресцентный краситель), могут использоваться для определения на шариках или количественной оценки связанных биомолекул. [21] [22] [23]

Связывание на столбце

Фильтр

Анализы на фильтрах представляют собой твердофазный анализ связывания лигандов, в котором для измерения сродства между двумя молекулами используются фильтры. В анализе связывания на фильтрах фильтры используются для улавливания клеточных мембран путем всасывания через них среды. [8] Этот быстрый метод происходит с высокой скоростью, при которой фильтрация и извлечение могут быть достигнуты для найденной фракции. [24] Промывание фильтров буфером удаляет остаточные несвязанные лиганды и любые другие присутствующие лиганды, которые могут быть вымыты из мест связывания. [8] Комплексы рецептор-лиганд, присутствующие во время промывки фильтра, не будут значительно диссоциировать, поскольку они будут полностью захвачены фильтрами. [8] Характеристики фильтра важны для каждой выполняемой работы. Более толстый фильтр полезен для более полного извлечения небольших фрагментов мембраны, но может потребовать более длительного времени промывки. [8] Рекомендуется предварительно обрабатывать фильтры, чтобы помочь улавливать отрицательно заряженные фрагменты мембраны. [8] Замачивание фильтра в растворе, который придаст фильтру положительный поверхностный заряд, притянет отрицательно заряженные фрагменты мембраны. [8]

Связывание клеток в реальном времени

В этом типе анализа связывание лиганда с клетками отслеживается с течением времени. Полученный сигнал пропорционален количеству лигандов, связанных с целевой структурой, часто рецептором, на поверхности клетки. Информация о взаимодействии лиганд-мишень получается из изменения сигнала с течением времени, и можно рассчитать кинетические параметры, такие как константа скорости ассоциации k a , константа скорости диссоциации k d и сродство K D . [25] При измерении взаимодействия непосредственно на клетках не требуется выделения целевого белка, что в противном случае может быть затруднительно, особенно для некоторых мембранных белков. [26] Чтобы гарантировать, что взаимодействие с предполагаемой целевой структурой измеряется, рекомендуются соответствующие биологические контроли, такие как клетки, не экспрессирующие целевую структуру.

Измерения в реальном времени с использованием подходов без меток или на основе меток использовались для анализа биомолекулярных взаимодействий на фиксированных или живых клетках. [27] [28]

Преимущество измерения взаимодействий лиганд-рецептор в режиме реального времени заключается в том, что для точного определения сродства не требуется достижения равновесия связывания. [29]

Специфичность связывания

Эффекты препарата являются результатом его селективности связывания со свойствами макромолекул организма или сродства, с которым различные лиганды связываются с субстратом. [30] Более конкретно, специфичность и селективность лиганда к его соответствующему рецептору дает исследователям возможность изолировать и производить определенные эффекты препарата посредством манипулирования концентрацией лиганда и плотностью рецепторов. [30] Гормоны и нейротрансмиттеры являются важными эндогенными регуляторными лигандами, которые влияют на физиологические рецепторы в организме. [30] Препараты, которые действуют на эти рецепторы, невероятно селективны для того, чтобы производить требуемые ответы от сигнальных молекул. [30]

Специфическое связывание относится к связыванию лиганда с рецептором, и возможно, что для одного лиганда существует более одного специфического сайта связывания. [31] Неспецифическое связывание относится к связыванию лиганда с чем-то, отличным от его назначенного рецептора, например, с различными другими рецепторами или различными типами транспортеров в клеточной мембране. [31] Например, различные антагонисты могут связываться с рецепторами нескольких типов. В случае мускариновых антагонистов они также могут связываться с рецепторами гистамина. [31] Такие модели связывания технически считаются специфическими, поскольку место назначения лиганда специфично для нескольких рецепторов. Однако исследователи могут не фокусироваться на таком поведении по сравнению с другими факторами связывания. [31] Тем не менее, неспецифическое поведение связывания является очень важной информацией для получения. Эти оценки измеряются путем изучения того, как лиганд связывается с рецептором, одновременно реагируя на замещающий агент (антагонист), который будет препятствовать возникновению специфического связывания. [31]

Специфические типы связывания с лигандными и рецепторными взаимодействиями: [30]

Технологический прогресс

Технологии анализа связывания лигандов продолжают совершенствоваться, что связано с увеличением скорости и сохранением рентабельности процедур при сохранении и повышении точности и чувствительности. [9] Некоторые технологические достижения включают новые связывающие реагенты в качестве альтернативы антителам, [9] альтернативные растворы красителей и системы микропланшетов, а также разработку метода, позволяющего пропустить этап фильтрации, который требуется во многих процессах анализа связывания лигандов. [16]

Значимой сигнальной молекулой в клетках является кальций (Ca 2+ ), который можно обнаружить с помощью ацетоксиметилового красителя Fluo-4 . Он связывается со свободными ионами Ca 2+ , которые, в свою очередь, немного увеличивают флуоресценцию Fluo-4 AM. [16] Недостатком формулы красителя Fluo-4 является то, что для удаления внеклеточного красителя требуется этап промывки, который может давать нежелательные фоновые сигналы. Например, промывка создает дополнительную нагрузку на клетки, а также отнимает время, что препятствует своевременному анализу. [16] Недавно была разработана альтернативная система раствора красителя и микропланшета под названием FLIPR® (флуориметрический считыватель пластин), которая использует реагент для анализа Calcium 3, не требующий этапа промывки. В результате изменение флуоресценции красителя можно просматривать в режиме реального времени без задержки с помощью возбуждающего лазера и устройства с зарядовой связью . [16]

Многие анализы связывания лигандов требуют этапа фильтрации для разделения связанных и несвязанных лигандов перед скринингом. Недавно был разработан метод, называемый анализом сцинтилляционной близости (SPA), который устраняет этот иначе важный этап. Он работает через кристаллические решетчатые бусины, которые покрыты молекулами связывания лигандов и заполнены ионами церия . Они испускают вспышки света при стимуляции изотопом, который можно легко измерить. Лиганды радиоактивно маркируются с использованием либо 3H, либо 125I и высвобождаются в анализ. Поскольку только радиолиганды, которые напрямую связываются с бусинами, инициируют сигнал, свободные лиганды не мешают процессу скрининга. [16]

Ограничения

ПЭТ-сканирование всего тела с использованием 18F -ФДГ

По своей природе анализы должны проводиться в контролируемой среде in vitro, поэтому этот метод не дает информации о связывании рецепторов in vivo. Полученные результаты могут только подтвердить, что определенный лиганд подходит рецептору, но анализы не дают возможности узнать распределение рецепторов, связывающих лиганды, в организме.

Связывание лиганда и распределение рецепторов in vivo можно изучать с помощью позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ), которая работает путем индукции радионуклида в лиганд, который затем высвобождается в тело изучаемого организма. Радиоактивно меченые лиганды пространственно локализуются с помощью ПЭТ-сканера для выявления областей в организме с высокой концентрацией рецепторов. [16]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ Luckey JA, Drossman H, Kostichka T, Smith LM (1993). "Высокоскоростное секвенирование ДНК с помощью капиллярного гель-электрофореза". Рекомбинантная ДНК Часть I. Методы в энзимологии. Т. 218. С. 154–72. doi :10.1016/0076-6879(93)18014-4. ISBN 9780121821197. PMID  8510530.
  2. ^ Ninfa AJ, Ballou DP, Benore M, ред. (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии . Дирборн, Мичиган: Мичиганский университет.
  3. ^ Mullis KB, Faloona FA (1987). "Специфический синтез ДНК in vitro с помощью полимеразно-катализируемой цепной реакции". Рекомбинантная ДНК Часть F. Методы в энзимологии. Т. 155. С. 335–50. doi :10.1016/0076-6879(87)55023-6. ISBN 9780121820565. PMID  3431465.
  4. ^ Sittampalam GS, Kahl SD, Janzen WP (октябрь 1997 г.). «Высокопроизводительный скрининг: достижения в технологиях анализа». Current Opinion in Chemical Biology . 1 (3): 384–91. doi :10.1016/S1367-5931(97)80078-6. PMID  9667878.
  5. ^ abcdefghijklmnopqr de Jong LA, Uges DR, Franke JP, Bischoff R (декабрь 2005 г.). «Анализы связывания рецептора с лигандом: технологии и приложения». Журнал хроматографии. B, Аналитические технологии в биомедицинских и биологических науках . 829 (1–2): 1–25. doi :10.1016/j.jchromb.2005.10.002. PMID  16253574.
  6. ^ Джозеф Р. Лакович. (1991) Темы флуоресцентной спектроскопии: Биохимические приложения.
  7. ^ abcdefghij Дэвенпорт, Энтони П.; Рассел, Фрейзер Д. (1996), Мазер, Стивен Дж. (ред.), «Анализы связывания радиолигандов: теория и практика», Текущие направления в исследованиях и разработках радиофармацевтических препаратов , Дордрехт: Springer Netherlands, стр. 169–179, doi :10.1007/978-94-009-1768-2_11, ISBN 978-94-010-7289-2, получено 2024-10-17
  8. ^ abcdefg Hulme EC, Trevethick MA (ноябрь 2010 г.). «Анализы связывания лигандов при равновесии: валидация и интерпретация». British Journal of Pharmacology . 161 (6): 1219–37. doi :10.1111/j.1476-5381.2009.00604.x. PMC 3000649 . PMID  20132208. 
  9. ^ abcdefgh Хан МН, Финдли ДжВ, ред. (2009). Разработка, валидация и внедрение анализов связывания лигандов в области разработки лекарств . Хобокен, Нью-Джерси: John Wiley & Sons. ISBN 978-0470541494.
  10. ^ "LOIS LAB". LOIS LAB . Получено 2024-01-30 .
  11. ^ Хуан, Тин-Хао; Нисман, Питер; Арасу, Дипшика; Ли, Донхён; Де Ла Круз, Обри Л.; Кальехас, Антука; Хонг, Элизабет Дж.; Лоис, Карлос (12 декабря 2017 г.). «Отслеживание нейрональных цепей у трансгенных животных с помощью транснейронального контроля транскрипции (TRACT)». электронная жизнь . 6 : е32027. doi : 10.7554/eLife.32027 . ISSN  2050-084X. ПМК 5777821 . ПМИД  29231171. 
  12. ^ Хуан, Тин-Хао; Нисман, Питер; Арасу, Дипшика; Ли, Донхён; Де Ла Круз, Обри Л.; Кальехас, Антука; Хонг, Элизабет Дж.; Лоис, Карлос (12 декабря 2017 г.). «Отслеживание нейрональных цепей у трансгенных животных с помощью транснейронального контроля транскрипции (TRACT)». электронная жизнь . 6 : е32027. doi : 10.7554/eLife.32027 . ISSN  2050-084X. ПМК 5777821 . ПМИД  29231171. 
  13. ^ ab Pollard TD (декабрь 2010 г.). «Руководство по простым и информативным анализам связывания». Молекулярная биология клетки . 21 (23): 4061–7. doi :10.1091/mbc.e10-08-0683. PMC 2993736. PMID  21115850 . 
  14. ^ Офферманс С, Вальтер Розенталь, ред. (2008). Энциклопедия молекулярной фармакологии (2-е изд.). Берлин: Springer. стр. 585. ISBN 9783540389163.
  15. ^ abc Kahl SD, Sittampalam GS, Weidner J (май 2012 г.). «Расчеты и приборы, используемые для анализов связывания радиолигандов». Руководство по анализу : 1–21. PMID  22553868.
  16. ^ abcdefghi Davenport AP (2005). Методы связывания рецепторов . Humana Press. стр. 18–19, 101–102, 121–122, 203–204. ISBN 978-1-58829-420-3.
  17. ^ Дарлинг, Райан Дж.; Бролт, Пьер-Александр (2004). «Технология кинетического анализа исключения: характеристика молекулярных взаимодействий». Технология анализа и разработки лекарств . 2 (6): 647–657.
  18. ^ abc Goldsby RA (2003). Иммунология (5-е изд. ред.). Нью-Йорк: WH Freeman. стр. 152. ISBN 978-0716749479.
  19. ^ ab "Техническое руководство и протоколы иммунопреципитации (ИП)" (PDF) . Thermo Fisher Scientific Inc. Архивировано из оригинала (PDF) 24 марта 2014 г. Получено 20 марта 2014 г.
  20. ^ abcdef Robinson CJ, Sadick M, Deming SN, Estdale S, Bergelson S, Little L (январь 2014 г.). «Критерии приемлемости анализа для многолуночных планшетов на основе биологической активности». BioProcess International . 12 (1): 30–41.
  21. ^ "SIMAG Basic: Магнитные нано- и микрочастицы".
  22. ^ «SIMAG Affinity: Магнитные нано- и микрочастицы от Chemicell».
  23. ^ "Главная - Accelero® Bioanalytics GMBH".
  24. ^ Moss T, ред. (2001). «Анализы связывания фильтров». ДНК-белковые взаимодействия: принципы и протоколы (2-е изд.). Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. стр. 1–12. ISBN 9780896036710.
  25. ^ Bondza S, Foy E, Brooks J, Andersson K, Robinson J, Richalet P, Buijs J (2017). "Характеристика связывания антител с рецепторами на живых иммунных клетках в реальном времени". Frontiers in Immunology . 8 : 455. doi : 10.3389/fimmu.2017.00455 . PMC 5401896. PMID  28484455. 
  26. ^ Смит SM (2011). "Стратегии очистки мембранных белков". Хроматография белков . Методы молекулярной биологии. Т. 681. Humana Press. С. 485–96. doi :10.1007/978-1-60761-913-0_29. hdl :2262/72470. ISBN 9781607619123. PMID  20978985.
  27. ^ Ван В, Инь Л, Гонсалес-Малерва Л, Ван С, Ю Х, Итон С и др. (октябрь 2014 г.). «Кинетика связывания рецепторов лекарств in situ в отдельных клетках: количественное исследование устойчивости к противоопухолевым препаратам без использования меток». Scientific Reports . 4 (1): 6609. Bibcode :2014NatSR...4E6609W. doi :10.1038/srep06609. PMC 4196117 . PMID  25312029. 
  28. ^ Бьёркелунд Х., Гедда Л., Барта П., Мальмквист М., Андерссон К. (12.09.2011). «Гефитиниб индуцирует димеры рецепторов эпидермального фактора роста, которые изменяют характеристики взаимодействия с ¹²⁵I-EGF». PLOS ONE . 6 (9): e24739. Bibcode : 2011PLoSO...624739B. doi : 10.1371 /journal.pone.0024739 . PMC 3171474. PMID  21931838. 
  29. ^ Xu B, Varasteh Z, Orlova A, Andersson K, Larhammar D, Björkelund H (ноябрь 2013 г.). «Обнаружение взаимодействий лигандов с рецепторами, связанными с G-белком, в реальном времени на живых клетках». Biochemical and Biophysical Research Communications . 441 (4): 820–4. doi :10.1016/j.bbrc.2013.10.149. PMID  24211197.
  30. ^ abcde Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics . The McGraw Hill Companies Inc. 1996. стр. 29–37. ISBN 978-0-07-026266-9.
  31. ^ abcde Haylett DG (2003). «Прямое измерение связывания лекарств с рецепторами». В Foreman JC, Johansen T (ред.). Учебник фармакологии рецепторов (второе изд.). Boca Raton, Florida: CRC LLC стр. 153–180. ISBN 978-0849310294.