Биохимический каскад , также известный как сигнальный каскад или сигнальный путь , представляет собой ряд химических реакций , которые происходят внутри биологической клетки при инициировании стимулом. Этот стимул, известный как первичный мессенджер, действует на рецептор, который передается внутрь клетки через вторичных мессенджеров , которые усиливают сигнал и передают его эффекторным молекулам, заставляя клетку реагировать на первоначальный стимул. [1] Большинство биохимических каскадов представляют собой ряды событий, в которых одно событие запускает следующее в линейной манере. На каждом этапе сигнального каскада различные контролирующие факторы участвуют в регуляции клеточных действий, чтобы эффективно реагировать на сигналы об их изменяющейся внутренней и внешней среде. [1]
Примером может служить каскад коагуляции вторичного гемостаза , который приводит к образованию фибрина и, таким образом, к началу свертывания крови. Другой пример, сигнальный путь sonic hedgehog , является одним из ключевых регуляторов эмбрионального развития и присутствует у всех билатеральных животных . [2] Сигнальные белки дают клеткам информацию, чтобы эмбрион развивался правильно. Когда путь выходит из строя, это может привести к таким заболеваниям, как базальноклеточная карцинома . [3] Недавние исследования указывают на роль сигнализации hedgehog в регуляции взрослых стволовых клеток, участвующих в поддержании и регенерации взрослых тканей. Путь также был вовлечен в развитие некоторых видов рака. Препараты, которые специально нацелены на сигнализацию hedgehog для борьбы с болезнями, активно разрабатываются рядом фармацевтических компаний.
Клетки требуют полноценный и функциональный клеточный аппарат для жизни. Когда они принадлежат к сложным многоклеточным организмам, им необходимо общаться между собой и работать для симбиоза, чтобы дать жизнь организму. Эти коммуникации между клетками запускают внутриклеточные сигнальные каскады, называемые путями передачи сигнала , которые регулируют определенные клеточные функции. Каждая передача сигнала происходит с первичным внеклеточным мессенджером, который связывается с трансмембранным или ядерным рецептором, инициируя внутриклеточные сигналы. Образованный комплекс производит или высвобождает вторичных мессенджеров, которые интегрируют и адаптируют сигнал, усиливая его, активируя молекулярные мишени, которые, в свою очередь, запускают эффекторы, которые приведут к желаемому клеточному ответу. [4]
Передача сигнала осуществляется путем активации специфических рецепторов и последующего производства/доставки вторичных мессенджеров, таких как Ca 2+ или цАМФ . Эти молекулы действуют как преобразователи сигнала, запуская внутриклеточные каскады и, в свою очередь, усиливая первоначальный сигнал. [4] Были идентифицированы два основных механизма передачи сигнала: через ядерные рецепторы или через трансмембранные рецепторы. В первом случае первый мессенджер пересекает клеточную мембрану, связывая и активируя внутриклеточные рецепторы, локализованные в ядре или цитозоле , которые затем действуют как транскрипционные факторы, напрямую регулирующие экспрессию генов. Это возможно благодаря липофильной природе этих лигандов, в основном гормонов. При передаче сигнала через трансмембранные рецепторы первый мессенджер связывается с внеклеточным доменом трансмембранного рецептора, активируя его. Эти рецепторы могут обладать внутренней каталитической активностью или могут быть связаны с эффекторными ферментами, или также могут быть связаны с ионными каналами. Таким образом, существует четыре основных типа трансмембранных рецепторов: рецепторы, сопряженные с G-белком (GPCR), рецепторы тирозинкиназы (RTK), рецепторы серин/треонинкиназы (RSTK) и лиганд-управляемые ионные каналы (LGIC). [1] [4] Вторичные мессенджеры можно разделить на три класса:
Клеточный ответ в каскадах передачи сигнала включает изменение экспрессии эффекторных генов или активацию/ингибирование целевых белков. Регулирование активности белка в основном включает события фосфорилирования/дефосфорилирования, приводящие к его активации или ингибированию. Это касается подавляющего большинства ответов вследствие связывания первичных мессенджеров с мембранными рецепторами. Этот ответ быстрый, так как он включает регуляцию молекул, которые уже присутствуют в клетке. С другой стороны, индукция или репрессия экспрессии генов требует связывания транскрипционных факторов с регуляторными последовательностями этих генов. Транскрипционные факторы активируются первичными мессенджерами, в большинстве случаев, из-за их функции в качестве ядерных рецепторов для этих мессенджеров. Вторичные мессенджеры , такие как DAG или Ca 2+, также могут индуцировать или репрессировать экспрессию генов через транскрипционные факторы. Этот ответ медленнее первого, так как он включает больше шагов, таких как транскрипция генов, а затем воздействие вновь образованных белков на конкретную цель. Целью может быть белок или другой ген. [1] [4] [5]
В биохимии несколько важных ферментативных каскадов и каскадов передачи сигналов участвуют в метаболических путях или сигнальных сетях, в которых ферменты обычно участвуют для катализа реакций. Например, путь тканевого фактора в каскаде коагуляции вторичного гемостаза является основным путем, ведущим к образованию фибрина и, таким образом, к началу свертывания крови. Пути представляют собой серию реакций, в которых зимоген (неактивный предшественник фермента) сериновой протеазы и ее гликопротеиновые кофакторы активируются, чтобы стать активными компонентами, которые затем катализируют следующую реакцию в каскаде, в конечном итоге приводя к образованию сшитого фибрина . [6]
Другой пример, сигнальный путь sonic hedgehog , является одним из ключевых регуляторов эмбрионального развития и присутствует у всех билатеральных животных . [2] Различные части эмбриона имеют разные концентрации сигнальных белков hedgehog, которые дают клеткам информацию, чтобы эмбрион развивался правильно и правильно в голову или хвост. Когда путь выходит из строя, это может привести к таким заболеваниям, как базальноклеточная карцинома . [3] Недавние исследования указывают на роль сигнализации hedgehog в регуляции взрослых стволовых клеток, участвующих в поддержании и регенерации взрослых тканей. Путь также был вовлечен в развитие некоторых видов рака. Препараты, которые специально нацелены на сигнальную систему hedgehog для борьбы с болезнями, активно разрабатываются рядом фармацевтических компаний. [7] Большинство биохимических каскадов представляют собой серии событий, в которых одно событие запускает следующее в линейной манере.
Биохимические каскады включают:
Наоборот, отрицательные каскады включают события, которые имеют циклический характер или могут вызывать или быть вызваны несколькими событиями. [8] Отрицательные каскады включают:
Адгезия является важным процессом для эпителиальных клеток, чтобы эпителий мог формироваться, а клетки могли находиться в постоянном контакте с внеклеточным матриксом и другими клетками. Существует несколько путей для осуществления этой коммуникации и адгезии с окружающей средой. Но основными сигнальными путями являются пути кадгерина и интегрина. [9] Путь кадгерина присутствует в адгезионных соединениях или в десмосомах и отвечает за эпителиальную адгезию и связь с соседними клетками. Кадгерин является трансмембранным гликопротеиновым рецептором, который устанавливает контакт с другим кадгерином, присутствующим на поверхности соседней клетки, образуя адгезионный комплекс. [10] Этот адгезионный комплекс образован β-катенином и α-катенином , а p120 CAS необходим для его стабилизации и регуляции. Затем этот комплекс связывается с актином , что приводит к полимеризации. В полимеризации актина через путь кадгерина также участвуют белки семейства Rho GTPases . Этот комплекс регулируется фосфорилированием, что приводит к снижению адгезии. Несколько факторов могут вызывать фосфорилирование, например, EGF , HGF или v-Src . Кадгериновый путь также играет важную роль в выживании и пролиферации, поскольку он регулирует концентрацию цитоплазматического β-катенина. Когда β-катенин находится в свободном состоянии в цитоплазме, он обычно деградирует, однако, если активируется сигнализация Wnt , деградация β-катенина ингибируется, и он транслоцируется в ядро, где образует комплекс с факторами транскрипции. Это приводит к активации генов, ответственных за пролиферацию и выживание клеток. Таким образом, комплекс кадгерин-катенин необходим для регуляции судьбы клеток. [11] [12] Интегрины представляют собой гетеродимерные гликопротеиновые рецепторы, которые распознают белки, присутствующие во внеклеточном матриксе, такие как фибронектин и ламинин. Для того чтобы функционировать, интегрины должны образовывать комплексы с белками ILK и Fak . Для адгезии к внеклеточному матриксу ILK активирует белки Rac и Cdc42 , что приводит к полимеризации актина. ERK также приводит к полимеризации актина через активацию cPLA2 . Привлечение FAK интегрином приводит к активации Akt , что подавляет проапоптотические факторы, такие как BAD и Bax. Когда адгезия через интегрины не происходит, проапоптотические факторы не подавляются, что приводит к апоптозу . [13] [14]
Гепатоцит представляет собой сложную и многофункциональную дифференцированную клетку, клеточный ответ которой будет зависеть от зоны в печеночной дольке , поскольку концентрации кислорода и токсичных веществ, присутствующих в печеночных синусоидах, изменяются от перипортальной зоны к центрилобулярной зоне10. Гепатоциты промежуточной зоны имеют соответствующие морфологические и функциональные особенности, поскольку они находятся в среде со средними концентрациями кислорода и других веществ. [15] Эта специализированная клетка способна: [16]
Гепатоцит также регулирует другие функции для конститутивного синтеза белков ( альбумина , АЛТ и АСТ ), которые влияют на синтез или активацию других молекул (синтез мочевины и незаменимых аминокислот), активируют витамин D , используют витамин К , экспрессируют транспортер витамина А и преобразуют тироксин . [15] [30]
Пуринергическая сигнализация играет важную роль во взаимодействиях между нейронами и глиальными клетками , позволяя им обнаруживать потенциалы действия и модулировать нейрональную активность, способствуя внутри- и внеклеточной регуляции гомеостаза. Помимо пуринергического нейротрансмиттера, АТФ действует как трофический фактор при клеточном развитии и росте, участвуя в активации и миграции микроглии, а также в миелинизации аксонов олигодендроцитами. Существует два основных типа пуринергических рецепторов : P1, связывающийся с аденозином , и P2, связывающийся с АТФ или АДФ, представляющие различные сигнальные каскады. [31] [32] Сигнальный путь Nrf2 / ARE играет фундаментальную роль в борьбе с окислительным стрессом, к которому нейроны особенно уязвимы из-за его высокого потребления кислорода и высокого содержания липидов. Этот нейропротекторный путь включает контроль нейрональной активности перисинаптическими астроцитами и высвобождение нейронального глутамата с установлением трехсторонних синапсов. Активация Nrf2/ARE приводит к более высокой экспрессии ферментов, участвующих в синтезе и метаболизме глутатиона, которые играют ключевую роль в антиоксидантном ответе. [33] [34] [35] [36] Сигнальный путь LKB1/NUAK1 регулирует терминальное ветвление аксонов в корковых нейронах посредством локального иммобилизованного захвата митохондрий. Помимо NUAK1 , киназа LKB1 действует под действием других эффекторных ферментов, таких как SAD-A/B и MARK, тем самым регулируя нейрональную поляризацию и рост аксонов соответственно. Эти каскады киназ также вовлекают Tau и другие MAP . [37] [38] [39] Расширенные знания этих и других нейрональных путей могут предоставить новые потенциальные терапевтические цели для нескольких нейродегенеративных хронических заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера , болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона , а также боковой амиотрофический склероз . [31] [32] [33]
Клетки крови ( эритроциты , лейкоциты и тромбоциты ) производятся в процессе кроветворения . Эритроциты имеют своей основной функцией доставку O2 в ткани, и этот перенос происходит путем диффузии и определяется напряжением O2 ( PO2 ) . Эритроцит способен чувствовать потребность тканей в O2 и вызывать изменение калибра сосудов через путь высвобождения АТФ , который требует увеличения цАМФ и регулируется фосфодиэстеразой ( ФДЭ). Этот путь может быть запущен двумя механизмами: физиологическим стимулом (например, снижением напряжения O2) и активацией рецептора простациклина (IPR). Этот путь включает гетеротримерные G-белки , аденилатциклазу (AC), протеинкиназу A (PKA), трансмембранный регулятор проводимости при муковисцидозе (CFTR) и конечный канал, который транспортирует АТФ в сосудистый просвет ( паннексин 1 или потенциал-зависимый анионный канал (VDAC)). Высвобождаемый АТФ действует на пуринергические рецепторы на эндотелиальных клетках, запуская синтез и высвобождение нескольких вазодилататоров , таких как оксид азота (NO) и простациклин (PGI 2 ). [40] [41] Текущая модель каскада адгезии лейкоцитов включает множество этапов, упомянутых в Таблице 1. [42] Опосредованная интегрином адгезия лейкоцитов к эндотелиальным клеткам связана с морфологическими изменениями как в лейкоцитах, так и в эндотелиальных клетках, которые вместе поддерживают миграцию лейкоцитов через стенки венулы. Малые ГТФазы Rho и Ras участвуют в основных сигнальных путях лейкоцитов, лежащих в основе интегрин -зависимой адгезии, стимулируемой хемокинами , и играют важную роль в регуляции формы клеток, адгезии и подвижности. [43]
После повреждения сосудов тромбоциты активируются локально экспонированным коллагеном (рецептор гликопротеина (GP) VI), локально продуцируемым тромбином (рецепторы PAR1 и PAR4), тромбоксаном A2 (TxA2) (рецептор TP) и АДФ (рецепторы P2Y1 и P2Y12), которые либо высвобождаются из поврежденных клеток, либо секретируются из плотных гранул тромбоцитов . Фактор фон Виллебранда (VWF) служит важной вспомогательной молекулой. В общих чертах, активация тромбоцитов , инициированная агонистом, приводит к сигнальному каскаду, который приводит к увеличению концентрации цитозольного кальция. Следовательно, активируется интегрин α IIb β 3 , и связывание с фибриногеном позволяет тромбоцитам агрегировать друг с другом. Увеличение цитозольного кальция также приводит к изменению формы и синтезу TxA2, что приводит к усилению сигнала.
Основной целью биохимических каскадов в лимфоцитах является секреция молекул, которые могут подавлять измененные клетки или устранять патогенные агенты посредством пролиферации, дифференциации и активации этих клеток. Таким образом, антигенные рецепторы играют центральную роль в передаче сигнала в лимфоцитах, поскольку при взаимодействии антигенов с ними происходит каскад сигнальных событий. Эти рецепторы, которые распознают растворимый антиген (В-клетки) или связанный с молекулой на антигенпрезентирующих клетках (Т-клетки), не имеют длинных цитоплазматических хвостов, поэтому они прикреплены к сигнальным белкам, которые содержат длинные цитоплазматические хвосты с мотивом, который может фосфорилироваться ( ITAM – иммунорецепторный тирозиновый активационный мотив) и приводить к различным сигнальным путям. Антигенный рецептор и сигнальный белок образуют стабильный комплекс, называемый BCR или TCR , в В- или Т-клетках соответственно. Семейство Src необходимо для передачи сигнала в этих клетках, поскольку оно отвечает за фосфорилирование ITAM. Таким образом, Lyn и Lck в лимфоцитах B и T, соответственно, фосфорилируют иммунорецепторные мотивы активации на основе тирозина после распознавания антигена и конформационного изменения рецептора, что приводит к связыванию киназ Syk / Zap-70 с ITAM и его активации. Киназа Syk специфична для лимфоцитов B, а Zap-70 присутствует в T-клетках. После активации этих ферментов некоторые адаптерные белки фосфорилируются, например, BLNK (B-клетки) и LAT (T-клетки). Эти белки после фосфорилирования активируются и позволяют связывать другие ферменты, которые продолжают биохимический каскад. [4] [44] [45] [46] Одним из примеров белка, который связывается с адаптерными белками и активируется, является PLC, который очень важен в сигнальных путях лимфоцитов. PLC отвечает за активацию PKC через DAG и Ca 2+ , что приводит к фосфорилированию молекулы CARMA1 и образованию комплекса CBM. Этот комплекс активирует Iκκ киназу, которая фосфорилирует I-κB, а затем обеспечивает транслокацию NF-κB в ядро и транскрипцию генов, кодирующих цитокины , например. Другие транскрипционные факторы, такие как комплекс NFAT и AP1, также важны для транскрипции цитокинов . [45] [47] [48][49] Дифференциация В-клеток в плазматические клетки также является примером сигнального механизма в лимфоцитах, индуцированного рецептором цитокина . В этом случае некоторые интерлейкины связываются со специфическим рецептором, что приводит к активации пути MAPK/ERK . Следовательно, белок BLIMP1 транслируется и ингибирует PAX5 , позволяя транскрипцию генов иммуноглобулинов и активацию XBP1 (важного для формирования секреторного аппарата и усиления синтеза белка). [50] [51] [52] Кроме того, корецепторы ( CD28 / CD19 ) играют важную роль, поскольку они могут улучшать связывание антигена/рецептора и инициировать параллельные каскадные события, такие как активация киназы PI3. Затем PIP3 отвечает за активацию нескольких белков, таких как vav (приводит к активации пути JNK , что, следовательно, приводит к активации c-Jun ) и btk (также может активировать PLC). [45] [53]
Сигнальный путь Wnt можно разделить на канонический и неканонический. Канонический сигнальный путь включает связывание Wnt с Frizzled и корецептором LRP5, что приводит к фосфорилированию GSK3 и ингибированию деградации β-катенина, что приводит к его накоплению и транслокации в ядро, где он действует как фактор транскрипции. Неканонический сигнальный путь Wnt можно разделить на путь планарной клеточной полярности (PCP) и путь Wnt/кальций. Он характеризуется связыванием Wnt с Frizzled и активацией G-белков, а также повышением внутриклеточных уровней кальция через механизмы, включающие PKC 50. [54] Сигнальный путь Wnt играет важную роль в остеобластогенезе и формировании костей, вызывая дифференциацию мезенхимальных плюрипотентных клеток в остеобласты и ингибируя путь RANKL/RANK и остеокластогенез. [55]
RANKL является членом суперсемейства лигандов TNF. Связываясь с рецептором RANK, он активирует различные молекулы, такие как NF-kappa B, MAPK, NFAT и PI3K52. Сигнальный путь RANKL/RANK регулирует остеокластогенез, а также выживание и активацию остеокластов. [56] [57]
Аденозин очень важен для метаболизма костей, поскольку он играет роль в формировании и активации как остеокластов, так и остеобластов. Аденозин действует, связываясь с пуринергическими рецепторами и влияя на активность аденилатциклазы и образование цАМФ и PKA 54. [58] Аденозин может оказывать противоположное действие на метаболизм костей, поскольку, в то время как некоторые пуринергические рецепторы стимулируют активность аденилатциклазы, другие оказывают противоположное действие. [58] [59] При определенных обстоятельствах аденозин стимулирует разрушение костей, а в других ситуациях он способствует формированию костей, в зависимости от активируемого пуринергического рецептора.
Самообновление и способность к дифференциации являются исключительными свойствами стволовых клеток. Эти клетки можно классифицировать по их способности к дифференциации, которая постепенно уменьшается с развитием, на тотипотенты, плюрипотенты, мультипотенты и унипотенты. [60]
Процесс самообновления строго регулируется клеточным циклом и контролем генетической транскрипции. Существуют некоторые сигнальные пути, такие как LIF / JAK / STAT3 (фактор ингибирования лейкемии / Янус-киназа / Сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции 3) и BMP / SMADs / Id (морфогенетические белки костей / Матери против декапентаплегии / Ингибитор дифференциации), опосредованные факторами транскрипции, эпигенетическими регуляторами и другими компонентами, и они отвечают за экспрессию генов самообновления и ингибирование экспрессии генов дифференциации соответственно. [61]
На уровне клеточного цикла наблюдается увеличение сложности механизмов в соматических стволовых клетках. Однако с возрастом наблюдается снижение потенциала самообновления. Эти механизмы регулируются сигнальными путями p16 Ink4a -CDK4/6- Rb и p19 Arf - p53 - P21 Cip1 . Эмбриональные стволовые клетки имеют конститутивную активность циклина E-CDK2, который гиперфосфорилирует и инактивирует Rb. Это приводит к короткой фазе G1 клеточного цикла с быстрым переходом G1-S и малой зависимостью от митогенных сигналов или циклинов D для входа в фазу S. В фетальных стволовых клетках митогены способствуют относительно быстрому переходу G1-S посредством кооперативного действия циклина D-CDK4/6 и циклина E-CDK2 для инактивации белков семейства Rb. Экспрессия p16 Ink4a и p19 Arf подавляется Hmga2-зависимой регуляцией хроматина. Многие молодые взрослые стволовые клетки большую часть времени находятся в состоянии покоя. При отсутствии митогенных сигналов циклин-CDK и переход G1-S подавляются ингибиторами клеточного цикла, включая белки семейства Ink4 и Cip/Kip. В результате Rb гипофосфорилируется и ингибирует E2F, способствуя покою в G0-фазе клеточного цикла. Стимуляция митогеном мобилизует эти клетки в цикл, активируя экспрессию циклина D. В старых взрослых стволовых клетках увеличивается экспрессия микроРНК let-7 , снижая уровни Hmga2 и увеличивая уровни p16 Ink4a и p19 Arf . Это снижает чувствительность стволовых клеток к митогенным сигналам, ингибируя комплексы циклин-CDK. В результате либо стволовые клетки не могут войти в клеточный цикл, либо деление клеток замедляется во многих тканях. [62]
Внешняя регуляция осуществляется сигналами из ниши, где находятся стволовые клетки, что может способствовать состоянию покоя и активации клеточного цикла в соматических стволовых клетках. [63] Асимметричное деление характерно для соматических стволовых клеток, поддерживая резервуар стволовых клеток в ткани и производя специализированные клетки из них. [64]
Стволовые клетки демонстрируют повышенный терапевтический потенциал, в основном при гематоонкологических патологиях, таких как лейкемия и лимфомы. Небольшие группы стволовых клеток были обнаружены в опухолях, называемых раковыми стволовыми клетками. Есть доказательства того, что эти клетки способствуют росту опухоли и метастазированию. [65]
Ооцит — это женская клетка, участвующая в воспроизводстве. [66] Между ооцитом и окружающими фолликулярными клетками существует тесная связь , которая имеет решающее значение для развития обоих. [67] GDF9 и BMP15, вырабатываемые ооцитом, связываются с рецепторами BMPR2 на фолликулярных клетках , активируя SMAD 2/3 , обеспечивая развитие фолликулов. [68] Одновременно с этим рост ооцита инициируется связыванием KITL с его рецептором KIT в ооците, что приводит к активации пути PI3K/Akt , что позволяет ооциту выживать и развиваться. [69] Во время эмбриогенеза ооциты инициируют мейоз и останавливаются в профазе I. Эта остановка поддерживается повышенными уровнями цАМФ в ооците. [70] Недавно было высказано предположение, что цГМФ взаимодействует с цАМФ для поддержания остановки клеточного цикла . [70] [71] Во время мейотического созревания пик ЛГ , предшествующий овуляции , активирует путь MAPK, что приводит к нарушению щелевого контакта и нарушению связи между ооцитом и фолликулярными клетками. PDE3A активируется и разрушает цАМФ, что приводит к прогрессированию клеточного цикла и созреванию ооцита. [72] [73] Всплеск ЛГ также приводит к выработке прогестерона и простагландинов , которые вызывают экспрессию ADAMTS1 и других протеаз, а также их ингибиторов. Это приведет к деградации фолликулярной стенки, но ограничит повреждение и обеспечит разрыв в нужном месте, высвобождая ооцит в фаллопиевы трубы . [74] [75] Активация ооцита зависит от оплодотворения спермой. [76] Она инициируется притяжением спермы, вызванным простагландинами, вырабатываемыми ооцитом, что создаст градиент, который будет влиять на направление и скорость спермы. [77] После слияния с ооцитом PLC ζ сперматозоидов высвобождается в ооцит, что приводит к повышению уровня Ca2+, который активирует CaMKII , который разрушает MPF , что приводит к возобновлению мейоза. [ 78] [79] Повышенный уровень Ca2 + вызовет экзоцитоз Кортикальные гранулы , которые разрушают рецепторы ZP , используемые сперматозоидами для проникновения в ооцит, блокируя полиспермию . [80] Нарушение регуляции этих путей приведет к нескольким заболеваниям, таким как синдром нарушения созревания ооцитов, который приводит к бесплодию . [81] Расширение наших молекулярных знаний о механизмах развития ооцитов может улучшить результаты процедур вспомогательной репродукции , способствуя зачатию.
Сперматозоид — это мужская гамета. После эякуляции эта клетка не созрела, поэтому она не может оплодотворить ооцит. Чтобы иметь возможность оплодотворить женскую гамету, эта клетка претерпевает капацитацию и акросомную реакцию в женских половых путях. Сигнальные пути, лучше всего описанные для сперматозоида, включают эти процессы. Сигнальный путь цАМФ/ПКА приводит к капацитации сперматозоидов; однако аденилатциклаза в сперматозоидах отличается от соматических клеток. Аденилатциклаза в сперматозоидах не распознает G-белки , поэтому она стимулируется бикарбонатом и ионами Ca2 + . Затем она преобразует аденозинтрифосфат в циклический АМФ, который активирует протеинкиназу А. ПКА приводит к фосфорилированию тирозина белка. [82] [83] [84] Фосфолипаза С (ПЛС) участвует в акросомной реакции. ZP3 — это гликопротеин, присутствующий в zona pelucida , который взаимодействует с рецепторами в сперматозоидах. Таким образом, ZP3 может активировать рецепторы, сопряженные с G-белком , и рецепторы тирозинкиназы , что приводит к образованию PLC. PLC расщепляет фосфолипидный фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат (PIP2) на диацилглицерол (DAG) и инозитол-1,4,5-трифосфат . IP3 высвобождается в виде растворимой структуры в цитозоль, а DAG остается связанным с мембраной. IP3 связывается с рецепторами IP3, присутствующими в мембране акросомы. Кроме того, кальций и DAG вместе работают над активацией протеинкиназы C , которая продолжает фосфорилировать другие молекулы, что приводит к изменению клеточной активности. Эти действия вызывают увеличение цитозольной концентрации Ca 2+ , что приводит к дисперсии актина и, следовательно, способствует слиянию плазматической мембраны и внешней мембраны акросомы. [85] [86] Прогестерон — стероидный гормон, вырабатываемый в яйценосном кумулюсе. В соматических клетках он связывается с рецепторами в ядре ; однако в сперматозоидах его рецепторы присутствуют в плазматической мембране. Этот гормон активирует AKT, что приводит к активации других протеинкиназ, участвующих в капацитации и акросомной реакции. [87] [88] Когда ROS (активные формы кислорода)присутствуют в высокой концентрации, они могут влиять на физиологию клеток, но когда они присутствуют в умеренной концентрации, они важны для реакции акросомы и капацитации. ROS могут взаимодействовать с цАМФ/ПКА и прогестероновым путем, стимулируя их. ROS также взаимодействуют с путем ERK , что приводит к активации Ras, MEK и MEK-подобных белков. Эти белки активируют протеинтирозинкиназу (PTK), которая фосфорилирует различные белки, важные для реакции капацитации и акросомы. [89] [90]
Различные сигнальные пути, такие как пути FGF, WNT и TGF-β , регулируют процессы, участвующие в эмбриогенезе .
Лиганды FGF (фактор роста фибробластов) связываются с рецепторами тирозинкиназы , FGFR (рецепторы фактора роста фибробластов), и образуют стабильный комплекс с корецепторами HSPG (гепарансульфат протеогликаны), который будет способствовать аутофосфорилированию внутриклеточного домена FGFR и последующей активации четырех основных путей: MAPK/ERK , PI3K , PLCγ и JAK/STAT . [91] [92] [93]
Путь WNT позволяет β-катенину функционировать в транскрипции генов, как только взаимодействие между лигандом WNT и рецептором, связанным с G-белком, Frizzled ингибирует GSK-3 (гликогенсинтазу киназу-3) и, таким образом, образование комплекса разрушения β-катенина. [93] [99] [100] Хотя существуют некоторые разногласия относительно эффектов этого пути в эмбриогенезе, считается, что сигнализация WNT индуцирует образование первичной полоски , мезодермы и энтодермы . [100] В пути TGF-β (трансформирующий фактор роста β) лиганды BMP (костный морфогенный белок), Activin и Nodal связываются со своими рецепторами и активируют Smad , которые связываются с ДНК и способствуют транскрипции генов. [93] [101] [102] Activin необходим для дифференциации мезодермы и особенно энтодермы , а Nodal и BMP участвуют в формировании эмбриона. BMP также отвечает за формирование внеэмбриональных тканей до и во время гаструляции, а также за раннюю дифференциацию мезодермы, когда активируются пути активина и FGF. [101] [102] [103]
Построение путей выполнялось отдельными группами, изучающими интересующую сеть (например, иммунный сигнальный путь), а также крупными биоинформатическими консорциумами (например, Reactome Project) и коммерческими организациями (например, Ingenuity Systems ). Построение путей — это процесс идентификации и интеграции сущностей, взаимодействий и связанных аннотаций, а также заполнения базы знаний. Построение путей может иметь либо цель, управляемую данными (DDO), либо цель, управляемую знаниями (KDO). Построение путей, управляемое данными, используется для генерации информации о взаимосвязи генов или белков, идентифицированных в определенном эксперименте, таком как исследование микрочипов. [104] Построение путей, управляемое знаниями, влечет за собой разработку подробной базы знаний путей для конкретных областей интереса, таких как тип клеток, заболевание или система. Процесс курирования биологического пути влечет за собой идентификацию и структурирование контента, добычу информации вручную и/или вычислительным путем и сборку базы знаний с использованием соответствующих программных инструментов. [105] Схема, иллюстрирующая основные этапы процессов строительства, основанных на данных и знаниях. [104]
Для построения пути DDO или KDO первым шагом является добыча соответствующей информации из соответствующих источников информации о сущностях и взаимодействиях. Полученная информация собирается с использованием соответствующих форматов, информационных стандартов и инструментов построения пути для получения прототипа пути. Путь далее уточняется, чтобы включить контекстно-зависимые аннотации, такие как вид, тип клетки/ткани или тип заболевания. Затем путь может быть проверен экспертами в области и обновлен кураторами на основе соответствующей обратной связи. [106] Недавние попытки улучшить интеграцию знаний привели к уточненным классификациям клеточных сущностей, таким как GO, и к сборке структурированных репозиториев знаний. [107] Репозитории данных, которые содержат информацию о данных о последовательностях, метаболизме, сигнализации, реакциях и взаимодействиях, являются основным источником информации для построения пути. [108] Несколько полезных баз данных описаны в следующей таблице. [104]
Условные обозначения: Y – Да, N – Нет; BIND – База данных биомолекулярных взаимодействий, DIP – База данных взаимодействующих белков, GNPV – Просмотрщик платформ геномных сетей, HPRD = База данных справочных данных белков человека, MINT – База данных молекулярных взаимодействий, MIPS – Мюнхенский информационный центр по последовательностям белков, UNIHI – Унифицированный интерактом человека, OPHID – Онлайн-база данных прогнозируемых взаимодействий человека, EcoCyc – Энциклопедия генов и метаболизма E. Coli, MetaCyc – База данных метаболических путей, KEGG – Киотская энциклопедия генов и геномов, PANTHER – База данных эволюционных взаимоотношений белков, STKE – Среда знаний о передаче сигналов, PID – База данных взаимодействий путей, BioPP – Издатель биологических путей. Полный список ресурсов можно найти на сайте http://www.pathguide.org.
Растущий объем геномной и молекулярной информации является основой для понимания биологических систем более высокого порядка, таких как клетка и организм, и их взаимодействия с окружающей средой, а также для медицинских, промышленных и других практических приложений. Ресурс KEGG [109] предоставляет справочную базу знаний для связывания геномов с биологическими системами, классифицированными как строительные блоки в геномном пространстве (KEGG GENES), химическом пространстве (KEGG LIGAND), схемы соединений сетей взаимодействия и сетей реакции (KEGG PATHWAY) и онтологии для реконструкции путей (база данных BRITE). [110] База данных KEGG PATHWAY представляет собой коллекцию вручную нарисованных карт путей для метаболизма , обработки генетической информации, обработки экологической информации, такой как передача сигнала, взаимодействие лиганда с рецептором и клеточная коммуникация, различные другие клеточные процессы и заболевания человека, все основано на обширном обзоре опубликованной литературы. [111]
Gene Map Annotator and Pathway Profiler ( GenMAPP ) [112] бесплатная, с открытым исходным кодом, автономная компьютерная программа, предназначенная для организации, анализа и обмена данными в масштабе генома в контексте биологических путей. База данных GenMAPP поддерживает множественные аннотации генов и видов, а также создание пользовательских баз данных видов для потенциально неограниченного числа видов. [113] Ресурсы путей расширяются за счет использования информации о гомологии для перевода содержимого путей между видами и расширения существующих путей с помощью данных, полученных из консервативных взаимодействий белков и коэкспрессии. Новый режим визуализации данных, включая временной ход, полиморфизм одиночных нуклеотидов (SNP) и сплайсинг , был реализован с базой данных GenMAPP для поддержки анализа сложных данных. GenMAPP также предлагает инновационные способы отображения и обмена данными за счет включения экспорта HTML анализов для целых наборов путей в виде организованных веб-страниц. [114] Короче говоря, GenMAPP предоставляет средства для быстрого опроса сложных экспериментальных данных для изменений на уровне путей у разнообразных организмов.
Учитывая генетический состав организма, полный набор возможных реакций составляет его реактом . Reactome , расположенный по адресу http://www.reactome.org, является курируемым, рецензируемым ресурсом данных о биологических процессах/путях человека. Основной единицей базы данных Reactome является реакция; затем реакции группируются в причинно-следственные цепи для формирования путей [115] Модель данных Reactome позволяет нам представлять множество разнообразных процессов в системе человека, включая пути промежуточного метаболизма, регуляторные пути и передачу сигналов, а также высокоуровневые процессы, такие как клеточный цикл . [116] Reactome предоставляет качественную структуру, на которую могут быть наложены количественные данные. Были разработаны инструменты для облегчения ввода и аннотирования пользовательских данных экспертами-биологами, а также для визуализации и исследования готового набора данных в виде интерактивной карты процессов. [117] Хотя основной областью кураторства являются пути Homo sapiens, электронные проекции человеческих путей на другие организмы регулярно создаются с помощью предполагаемых ортологов, что делает Reactome релевантным для сообществ исследователей модельных организмов. База данных находится в открытом доступе на условиях открытого исходного кода, что позволяет свободно использовать и распространять как ее содержимое, так и ее программную инфраструктуру. Изучение целых транскрипционных профилей и каталогизация белок-белковых взаимодействий дали много ценной биологической информации, от генома или протеома до физиологии организма, органа, ткани или даже отдельной клетки. База данных Reactome, содержащая структуру возможных реакций, которая в сочетании с данными об экспрессии и кинетике ферментов обеспечивает инфраструктуру для количественных моделей, следовательно, интегрированное представление биологических процессов, которое связывает такие генные продукты и может быть систематически извлечено с помощью приложений биоинформатики. [118] Данные Reactome доступны в различных стандартных форматах, включая BioPAX , SBML и PSI-MI, а также позволяют обмениваться данными с другими базами данных путей, такими как Cycs, KEGG и amaze , и базами данных молекулярных взаимодействий, такими как BIND и HPRD . Следующий выпуск данных будет охватывать апоптоз, включая сигнальные пути рецептора смерти, и пути Bcl2, а также пути, участвующие в гемостазе . Другие темы, которые в настоящее время находятся в стадии разработки, включают несколько сигнальных путей, митоз , визуальную фототрансдукцию и гемопоэз . [119]Подводя итог, можно сказать, что Reactome предоставляет высококачественные тщательно отобранные сводки фундаментальных биологических процессов в организме человека в форме удобной для биологов визуализации данных о путях и является проектом с открытым исходным кодом.
В постгеномную эпоху высокопроизводительное секвенирование и методы профилирования генов/белков преобразили биологические исследования, обеспечив комплексный мониторинг биологической системы, что дает список дифференциально экспрессируемых генов или белков, что полезно для идентификации генов, которые могут играть роль в данном явлении или фенотипе. [120] С помощью ДНК-микрочипов и генной инженерии на уровне генома можно проверять глобальные профили экспрессии генов, чтобы вносить огромный вклад в геномные данные в общественное достояние. С помощью РНК-интерференции можно извлекать выводы, содержащиеся в экспериментальной литературе и первичных базах данных, в базы знаний, которые состоят из аннотированных представлений биологических путей. В этом случае известно, что отдельные гены и белки участвуют в биологических процессах, компонентах или структурах, а также в том, как и где продукты генов взаимодействуют друг с другом. [121] [122] Ориентированные на пути подходы к анализу данных микрочипов путем группировки длинных списков отдельных генов, белков и/или других биологических молекул в соответствии с путями, в которых они участвуют, в меньшие наборы связанных генов или белков, что снижает сложность, оказались полезными для соединения геномных данных с конкретными биологическими процессами и системами. Выявление активных путей, которые различаются между двумя состояниями, может иметь большую объяснительную силу, чем простой список различных генов или белков. Кроме того, большое количество методов анализа путей используют знания путей в публичных репозиториях, таких как Gene Ontology (GO) или Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes ( KEGG ), а не выводят пути из молекулярных измерений. [123] [124] Кроме того, различные исследовательские направления придали слову «путь» разные значения. Например, «путь» может обозначать метаболический путь, включающий последовательность ферментативно-катализируемых реакций малых молекул, или сигнальный путь, включающий набор реакций фосфорилирования белков и событий регуляции генов. Поэтому термин «анализ пути» имеет очень широкое применение. Например, он может относиться к анализу сетей физического взаимодействия (например, белок-белковых взаимодействий), кинетическому моделированию путей и анализу стационарного пути (например, анализу баланса потоков), а также его использованию при выводе путей из данных экспрессии и последовательности. Было разработано несколько инструментов анализа функционального обогащения [125] [126] [127] [128] и алгоритмов [129] для улучшения интерпретации данных. Существующие методы анализа путей на основе базы знаний в каждом поколении были обобщены в недавней литературе.[130]
Пакет программ MatchMiner использовался для сканирования имен HUGO для клонированных генов, представляющих интерес, сканируются, затем вводятся в GoMiner, который использовал GO для идентификации биологических процессов, функций и компонентов, представленных в профиле гена. Кроме того, база данных для аннотации, визуализации и комплексного обнаружения ( DAVID ) и база данных KEGG могут использоваться для анализа данных экспрессии микрочипов и анализа каждой онтологии биологического процесса (P), клеточного компонента (C) и молекулярной функции (F) GO. Кроме того, инструменты DAVID могут использоваться для анализа ролей генов в метаболических путях и показа биологических взаимосвязей между генами или генными продуктами и могут представлять метаболические пути. Эти две базы данных также предоставляют инструменты биоинформатики онлайн для объединения конкретной биохимической информации об определенном организме и облегчения интерпретации биологических значений экспериментальных данных. Используя комбинированный подход микрочипов и биоинформатических технологий, был продемонстрирован потенциальный метаболический механизм, способствующий колоректальному раку (КРР) [131]. Несколько факторов окружающей среды могут быть вовлечены в ряд точек вдоль генетического пути к КРР. К ним относятся гены, связанные с метаболизмом желчных кислот, метаболизмом гликолиза и путями метаболизма жирных кислот , что подтверждает гипотезу о том, что некоторые метаболические изменения, наблюдаемые при карциноме толстой кишки , могут происходить при развитии КРР. [131]
Клеточные модели играют важную роль в разделении сложного патологического процесса на более простые молекулярные события. Болезнь Паркинсона (БП) является многофакторной и клинически гетерогенной; этиология спорадической (и наиболее распространенной) формы до сих пор неясна, и только несколько молекулярных механизмов были выяснены до сих пор в нейродегенеративном каскаде. В такой многогранной картине особенно важно определить экспериментальные модели, которые упрощают изучение различных сетей вовлеченных белков и генов. Клеточные модели, которые воспроизводят некоторые из особенностей нейронов, которые дегенерируют при БП, внесли свой вклад во многие достижения в нашем понимании патогенного течения заболевания. В частности, основные биохимические пути (т. е. апоптоз и окислительный стресс , митохондриальное нарушение и дисфункциональная митофагия , стресс развернутого белка и неправильное удаление неправильно свернутых белков) были широко исследованы в клеточных линиях, подвергнутых токсическим воздействиям или генетически модифицированных. Центральная роль a-синуклеина породила множество моделей, направленных на выяснение его вклада в нарушение регуляции различных клеточных процессов. Классические клеточные модели, по-видимому, являются правильным выбором для предварительных исследований молекулярного действия новых лекарств или потенциальных токсинов и для понимания роли отдельных генетических факторов. Более того, наличие новых клеточных систем, таких как цибриды или индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, дает возможность использовать преимущества исследования in vitro, хотя и более точно отражая популяцию клеток, на которую оказывается воздействие. [132]
Синаптическая дегенерация и гибель нервных клеток являются определяющими признаками болезни Альцгеймера (БА), наиболее распространенного нейродегенеративного заболевания, связанного с возрастом. При БА нейроны в гиппокампе и базальном отделе переднего мозга (области мозга, которые обслуживают функции обучения и памяти) избирательно уязвимы. Исследования посмертной мозговой ткани людей с БА предоставили доказательства повышенного уровня окислительного стресса, митохондриальной дисфункции и нарушения усвоения глюкозы в уязвимых популяциях нейронов. Исследования животных и клеточных культур моделей БА предполагают, что повышенный уровень окислительного стресса ( в частности, перекисное окисление липидов мембраны ) может нарушить нейронный энергетический метаболизм и ионный гомеостаз , нарушая функцию мембранных ионно-движущих АТФаз , переносчиков глюкозы и глутамата . Такой окислительный и метаболический компромисс может тем самым сделать нейроны уязвимыми к эксайтотоксичности и апоптозу . Недавние исследования предполагают, что БА может проявляться системными изменениями в энергетическом метаболизме (например, повышенная резистентность к инсулину и нарушение регуляции метаболизма глюкозы). Появляющиеся доказательства того, что ограничение питания может предотвратить развитие болезни Альцгеймера, согласуются с основным «метаболическим» компонентом этих расстройств и вселяют оптимизм в отношении того, что эти разрушительные нарушения мозга, связанные со старением, можно в значительной степени предотвратить. [133]
{{cite book}}
: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка ){{cite journal}}
: CS1 maint: DOI неактивен по состоянию на апрель 2024 г. ( ссылка ){{cite journal}}
: CS1 maint: числовые имена: список авторов ( ссылка ){{cite web}}
: CS1 maint: архивная копия как заголовок ( ссылка )