Поверхность растения как среда обитания микроорганизмов
Надземная поверхность растений, занятая большей частью листьями, населена разнообразными микроорганизмами, образующими филлосферу.
В микробиологии филлосфера — это вся надземная поверхность растения, если рассматривать ее как среду обитания микроорганизмов . [1] [2] Филлосферу можно разделить на каулосферу (стебли), филлоплану (листья), антосферу (цветы) и карпосферу (плоды). Подземные среды обитания микробов (т.е. тонкий объем почвы, окружающий корни или подземные поверхности стеблей) называются ризосферой и лаймосферой . Большинство растений являются домом для разнообразных сообществ микроорганизмов, включая бактерии , грибы , археи и простейших . Некоторые из них полезны для растения, тогда как другие действуют как патогены растений и могут повредить растение-хозяин или даже убить его.
Микробиом филлосферы
Поверхность листа, или филлосфера, содержит микробиом , состоящий из разнообразных сообществ бактерий , архей , грибов , водорослей и вирусов . [3] [4] Микробные колонизаторы подвергаются суточным и сезонным колебаниям тепла, влаги и радиации. Кроме того, эти элементы окружающей среды влияют на физиологию растений (например, фотосинтез, дыхание, поглощение воды и т. д.) и косвенно влияют на состав микробиома. [5] Дождь и ветер также вызывают временные изменения микробиома филлосферы. [6]
Филлосфера включает в себя всю воздушную (надземную) поверхность растения и, как таковую, включает поверхность стебля, цветов и плодов, но особенно поверхность листьев. По сравнению с ризосферой и эндосферой филлосфера бедна питательными веществами, а ее среда более динамична.
Взаимодействия между растениями и связанными с ними микроорганизмами во многих из этих микробиомов могут играть ключевую роль в здоровье, функционировании и эволюции растений-хозяев . [7] Взаимодействие между растением-хозяином и филлосферными бактериями может влиять на различные аспекты физиологии растения-хозяина. [8] [2] [9] Однако по состоянию на 2020 год знания об этих бактериальных ассоциациях в филлосфере остаются относительно скромными, и существует необходимость в расширении фундаментальных знаний о динамике микробиома филлосферы. [10] [11]
Сборка микробиома филлосферы, которую можно строго определить как эпифитные бактериальные сообщества на поверхности листьев, может формироваться микробными сообществами , присутствующими в окружающей среде (т. е. стохастическая колонизация ) и растении-хозяине (т. е. биотический отбор). [3] [12] [11] Однако, хотя поверхность листьев обычно считается дискретной средой обитания микробов, [13] [14] не существует единого мнения относительно доминирующего фактора формирования сообщества в микробиомах филлосферы. Например, в филлосфере одновременно встречающихся видов растений были обнаружены бактериальные сообщества, специфичные для хозяина, что указывает на доминирующую роль отбора хозяина. [14] [15] [16] [11]
И наоборот, сообщается, что микробиомы окружающей среды являются основным определяющим фактором состава сообщества филлосферы. [13] [17] [18] [19] В результате процессы, которые управляют сборкой филлосферных сообществ, недостаточно изучены, но вряд ли будут универсальными для всех видов растений. Однако существующие данные указывают на то, что филлосферные микробиомы, демонстрирующие ассоциации с хозяином, с большей вероятностью будут взаимодействовать с хозяином, чем те, которые в первую очередь рекрутируются из окружающей среды. [8] [20] [21] [22] [11]
Пространственные масштабы имеют значение
Площадь Тринидада составляет около 5000 квадратных километров (2000 квадратных миль). По сравнению с размером человека это примерно такая же относительная площадь, как площадь типичного листа по сравнению с размером бактерии. Представьте себе человека где-нибудь на Тринидаде, у которого нет ног, чтобы передвигаться, ни глаз, чтобы видеть, ни ушей, чтобы слышать, сохранившего только способность обонять и осязать. Это параллель с тем, как отдельная бактерия воспринимает лист. У него нет способности воспринимать что-либо за пределами самого непосредственного окружения. Бактериям для движения нужна вода, и они воспринимают только «сигналы, такие как сахара, аминокислоты или летучие вещества, диффундирующие к их занятому участку». Эта микросреда обитания определяет опыт отдельной бактерии и ее реакцию. [23]
В целом сохраняется высокое видовое богатство филлосферных сообществ. Грибные сообщества весьма изменчивы в филлосфере умеренных регионов и более разнообразны, чем в тропических регионах. [24] На поверхности листьев растений может присутствовать до 107 микробов на квадратный сантиметр, а бактериальная популяция филлосферы в глобальном масштабе оценивается в 10 26 клеток. [25] Размер популяции грибной филлосферы, вероятно, будет меньше. [26]
Микробы филлосферы разных растений кажутся в некоторой степени сходными у таксонов высоких уровней, но у таксонов более низких уровней сохраняются существенные различия. Это указывает на то, что микроорганизмам может потребоваться тонко настроенная метаболическая корректировка, чтобы выжить в среде филлосферы. [24] Pseudomonadota, по-видимому, являются доминирующими колонизаторами, при этом Bacteroidota и Actinomycetota также преобладают в филлосферах. [27] Хотя между ризосферными и почвенными микробными сообществами существует сходство, между филлосферными сообществами и микроорганизмами, плавающими на открытом воздухе ( аэропланктоном ), обнаружено очень мало сходства . [28] [5]
Поиск основного микробиома в микробных сообществах, связанных с хозяином, является полезным первым шагом в попытке понять взаимодействия, которые могут происходить между хозяином и его микробиомом. [29] [30] Преобладающая концепция основного микробиома основана на представлении о том, что выживание таксона за пространственно-временными границами экологической ниши напрямую отражает его функциональную значимость внутри ниши, которую он занимает; следовательно, он обеспечивает основу для идентификации функционально важных микроорганизмов, которые постоянно ассоциируются с видом-хозяином. [29] [31] [32] [11]
Лист здорового растения арабидопсиса (слева) и лист растения-мутанта дисбактериоза (справа) [33]
В научной литературе возникли различные определения «основного микробиома», причем исследователи по-разному идентифицируют «основные таксоны» как те, которые сохраняются в различных микросредах обитания хозяев [34] [35] и даже у разных видов. [16] [20] Учитывая функциональное расхождение микроорганизмов в разных видах-хозяевах [16] и микросредах обитания, [36] определение основных таксонов в строгом смысле слова как тех, которые персистируют на широких географических расстояниях в пределах ткане- и видоспецифичных микробиомов хозяина, представляет собой наиболее биологически и экологически приемлемое применение этой концептуальной основы. [37] [11] Ткане- и видоспецифические основные микробиомы в популяциях хозяев, разделенных большими географическими расстояниями, не получили широкого распространения в филлосфере, используя строгое определение, установленное Руиненом. [2] [11]
Пример: филлосфера манука.
Относительная численность основных таксонов филлосферы мануки
Манука – цветущий скраб. На диаграмме показано распределение численности и занятости с указанием основных таксонов филлосферы в неразреженных (зеленый) и разреженных (фиолетовый) наборах данных. Каждая точка представляет таксон, нанесенный на график его средней логарифмической относительной численности и занятости. Таксоны (розовые) с заполненностью 1 (т. е. обнаруженные во всех 89 образцах филлосферы) считались членами основного микробиома. [11]
Цветущее чайное дерево, широко известное как манука, произрастает в Новой Зеландии. [38] Мед манука , производимый из нектара цветов мануки, известен своими неперекисными антибактериальными свойствами. [39] [40] Эти неперекисные антибактериальные свойства в основном связаны с накоплением трехуглеродного сахара дигидроксиацетона (DHA) в нектаре цветков мануки, который в зрелом меде подвергается химическому превращению в метилглиоксаль (MGO). . [41] [42] [43] Однако концентрация DHA в нектаре цветов мануки, как известно, варьируется, и, следовательно, антимикробная эффективность меда манука варьируется от региона к региону и из года в год. [44] [45] [46] Несмотря на обширные исследовательские усилия, не было выявлено надежной корреляции между выработкой DHA и климатическими, [47] эдафическими , [48] или генетическими факторами хозяина. [49] [11]
{A} Тепловая карта слева иллюстрирует, насколько существенно различался состав операционных таксономических единиц (OTU) в филлосфере манука и связанных с ней почвенных сообществах. Ядерный почвенный микробиом не обнаружен. (B) На диаграмме справа показано, как OTU в филлосфере и связанных с ней почвенных сообществах различались по относительной численности. [11]
Микроорганизмы изучены в ризосфере и эндосфере манука. [50] [51] [52] Более ранние исследования в основном были сосредоточены на грибах, а исследование 2016 года предоставило первое исследование эндофитных бактериальных сообществ из трех географически и экологически различных популяций мануки с использованием методов снятия отпечатков пальцев и выявило тканеспецифичные основные эндомикробиомы. [53] [11] Исследование 2020 года выявило специфичный для среды обитания и относительно многочисленный основной микробиом в филлосфере манука, который сохранялся во всех образцах. Напротив, неосновные микроорганизмы филлосферы демонстрировали значительные различия между отдельными деревьями-хозяевами и популяциями, что в значительной степени было обусловлено экологическими и пространственными факторами. Результаты продемонстрировали существование доминирующего и повсеместного основного микробиома в филлосфере мануки. [11]
^ Аб Лево, Йохан HJ (2019). «Краткое описание с листа: Последние исследования, которые помогут нам лучше понять микробиом филлосферы». Современное мнение в микробиологии . 49 : 41–49. дои :10.1016/j.mib.2019.10.002. PMID 31707206. S2CID 207946690.
^ Руинен, Дж. (1956) «Распространение видов Beijerinckia в« филлосфере »». Природа , 177 (4501): 220–221.
^ аб Дастогер, К.М., Тумпа, Ф.Х., Султана, А., Актер, М.А. и Чакраборти, А. (2020) «Микробиом растений - отчет о факторах, которые формируют состав и разнообразие сообщества». Текущая биология растений : 100161. doi : 10.1016/j.cpb.2020.100161.Материал был скопирован из этого источника, который доступен по международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0.
^ Линдоу, Стивен Э. (1996). «Роль иммиграции и других процессов в определении популяций эпифитных бактерий». Воздушная поверхностная микробиология растений . стр. 155–168. дои : 10.1007/978-0-585-34164-4_10. ISBN978-0-306-45382-3.
^ Фризен, Марен Л.; Портер, Стефани С.; Старк, Скотт С.; фон Веттберг, Эрик Дж.; Сакс, Джоэл Л.; Мартинес-Ромеро, Эсперанса (2011). «Микробно-опосредованные функциональные особенности растений». Ежегодный обзор экологии, эволюции и систематики . 42 : 23–46. doi : 10.1146/annurev-ecolsys-102710-145039.
^ аб Фогель, Кристина ; Боденхаузен, Наташа; Грюиссем, Вильгельм; Ворхольт, Джулия А. (2016). «Транскриптом листьев арабидопсиса демонстрирует различные, но также перекрывающиеся реакции на колонизацию филлосферными комменсалами и патогенную инфекцию, оказывающую влияние на здоровье растений» (PDF) . Новый фитолог . 212 (1): 192–207. дои : 10.1111/nph.14036. hdl : 20.500.11850/117578 . ПМИД 27306148.
^ Кумаравель, Совья; Танкаппан, Сугита; Рагхупати, Шридар; Утанди, Сивакумар (2018). «Проект геномной последовательности стимулирующей рост растений и устойчивой к засухе Bacillus altitudinis FD48, выделенной из филлопланы риса». Геномные объявления . 6 (9). doi :10.1128/геномA.00019-18. ПМЦ 5834328 . ПМИД 29496824.
^ Лафорест-Лапуант, Изабель; Уитакер, Бриана К. (2019). «Расшифровка микробиоты филлосферы: прогресс и проблемы». Американский журнал ботаники . 106 (2): 171–173. дои : 10.1002/ajb2.1229 . ПМИД 30726571.
^ abcdefghijkl Благородный, Аня С.; Нет, Стиви; Клируотер, Майкл Дж.; Ли, Чарльз К. (2020). «Основной микробиом филлосферы существует в отдаленных популяциях видов деревьев, произрастающих в Новой Зеландии». ПЛОС ОДИН . 15 (8): e0237079. Бибкод : 2020PLoSO..1537079N. дои : 10.1371/journal.pone.0237079 . ПМЦ 7425925 . ПМИД 32790769.Материал был скопирован из этого источника, который доступен по международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0.Материал был скопирован из этого источника, который доступен по международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0.
^ Форхольт, Джулия А. (2012). «Микробная жизнь в филлосфере». Обзоры природы Микробиология . 10 (12): 828–840. doi : 10.1038/nrmicro2910. hdl : 20.500.11850/59727 . PMID 23154261. S2CID 10447146.
^ Аб Стоун, Брэм В.Г.; Джексон, Колин Р. (2016). «Биогеографические закономерности между бактериальными филлосферными сообществами южной магнолии (Magnolia grandiflora) в небольшом лесу». Микробная экология . 71 (4): 954–961. дои : 10.1007/s00248-016-0738-4. PMID 26883131. S2CID 17292307.
^ аб Редфорд, Аманда Дж.; Бауэрс, Роберт М.; Найт, Роб; Линхарт, Ян; Фирер, Ной (2010). «Экология филлосферы: географическая и филогенетическая изменчивость распределения бактерий на листьях деревьев». Экологическая микробиология . 12 (11): 2885–2893. дои : 10.1111/j.1462-2920.2010.02258.x. ПМК 3156554 . ПМИД 20545741.
^ Воку, Деспойна; Варели, Катерина; Зарали, Екатерини; Караманоли, Катерина; Константиниду, Хелен-Исида А.; Монокрусос, Николаос; Хэлли, Джон М.; Сайнис, Иоаннис (2012). «Изучение биоразнообразия бактериального сообщества средиземноморской филлосферы и его связи с бактериями, передающимися по воздуху». Микробная экология . 64 (3): 714–724. дои : 10.1007/s00248-012-0053-7. PMID 22544345. S2CID 17291303.
^ abc Лафорест-Лапуант, Изабель; Мессье, Кристиан; Кембель, Стивен В. (2016). «Идентичность вида-хозяина, место и время определяют структуру бактериального сообщества филлосферы деревьев умеренного климата». Микробиом . 4 (1): 27. дои : 10.1186/s40168-016-0174-1 . ПМЦ 4912770 . ПМИД 27316353.
^ Зарраонаиндия, Ираче; Оуэнс, Сара М.; Вайзенхорн, Памела; Уэст, Кристин; Хэмптон-Марселл, Джаррад; Лакс, Саймон; Бокулич, Николай Александрович; Миллс, Дэвид А.; Мартин, Жиль; Тагави, Сафий; Ван дер Лели, Дэниел; Гилберт, Джек А. (2015). «Микробиом почвы влияет на микробиоту, связанную с виноградной лозой». мБио . 6 (2). doi : 10.1128/mBio.02527-14. ПМЦ 4453523 . ПМИД 25805735.
^ Финкель, Омри М.; Берч, Эдриан Ю.; Линдоу, Стивен Э.; Пост, Антон Ф.; Белкин, Шимшон (2011). «Географическое положение определяет популяционную структуру филлосферных микробных сообществ соляного пустынного дерева». Прикладная и экологическая микробиология . 77 (21): 7647–7655. дои : 10.1128/AEM.05565-11. ПМК 3209174 . ПМИД 21926212.
^ Финкель, Омри М.; Берч, Эдриан Ю.; Элад, Таль; Хьюз, Сьюзен М.; Линдоу, Стивен Э.; Пост, Антон Ф.; Белкин, Шимшон (2012). «Зависимость расстояния от распада частично определяет структуру разнообразия филлосферных бактерий на деревьях тамрикс в пустыне Сонора». Прикладная и экологическая микробиология . 78 (17): 6187–6193. дои : 10.1128/AEM.00888-12. ПМЦ 3416633 . ПМИД 22752165.
^ аб Кембель, SW; О'Коннор, ТК; Арнольд, Гонконг; Хаббелл, СП; Райт, С.Дж.; Грин, Дж.Л. (2014). «Связь между бактериальными сообществами филлосферы и функциональными особенностями растений в неотропическом лесу». Труды Национальной академии наук . 111 (38): 13715–13720. Бибкод : 2014PNAS..11113715K. дои : 10.1073/pnas.1216057111 . ПМК 4183302 . PMID 25225376. S2CID 852584.
^ Иннеребнер, Герд; Книф, Клаудия; Ворхольт, Джулия А. (2011). «Защита Arabidopsis thaliana от патогенных для листьев Pseudomonas syringae штаммами Sphingomonas в контролируемой модельной системе». Прикладная и экологическая микробиология . 77 (10): 3202–3210. дои : 10.1128/AEM.00133-11. ПМК 3126462 . ПМИД 21421777.
^ Лажуа, Женевьева; Мальоне, Реми; Кембель, Стивен В. (2020). «Адаптивное соответствие между филлосферными бактериями и их древесными хозяевами в неотропическом лесу». Микробиом . 8 (1): 70. дои : 10.1186/s40168-020-00844-7 . ПМЦ 7243311 . ПМИД 32438916.
^ аб Финкель, Омри М.; Берч, Эдриан Ю.; Линдоу, Стивен Э.; Пост, Антон Ф.; Белкин, Шимшон (2011). «Географическое положение определяет популяционную структуру филлосферных микробных сообществ соляного пустынного дерева». Прикладная и экологическая микробиология . 77 (21): 7647–7655. дои : 10.1128/AEM.05565-11. ПМК 3209174 . ПМИД 21926212.
^ Форхольт, Джулия А. (2012). «Микробная жизнь в филлосфере». Обзоры природы Микробиология . 10 (12): 828–840. doi : 10.1038/nrmicro2910. hdl : 20.500.11850/59727 . PMID 23154261. S2CID 10447146.
^ Линдоу, Стивен Э.; Брандл, Мария Т. (2003). «Микробиология филлосферы». Прикладная и экологическая микробиология . 69 (4): 1875–1883. дои :10.1128/АЕМ.69.4.1875-1883.2003. ПМК 154815 . PMID 12676659. S2CID 2304379.
^ Боденхаузен, Наташа; Хортон, Мэтью В.; Бергельсон, Джой (2013). «Бактериальные сообщества, связанные с листьями и корнями Arabidopsis thaliana». ПЛОС ОДИН . 8 (2): e56329. дои : 10.1371/journal.pone.0056329 . ПМЦ 3574144 . ПМИД 23457551.
^ Воку, Деспойна; Варели, Катерина; Зарали, Екатерини; Караманоли, Катерина; Константиниду, Хелен-Исида А.; Монокрусос, Николаос; Хэлли, Джон М.; Сайнис, Иоаннис (2012). «Изучение биоразнообразия бактериального сообщества средиземноморской филлосферы и его связи с бактериями, передающимися по воздуху». Микробная экология . 64 (3): 714–724. дои : 10.1007/s00248-012-0053-7. PMID 22544345. S2CID 17291303.
^ аб Шейд, Эшли; Хандельсман, Джо (2012). «За пределами диаграммы Венна: охота за основным микробиомом». Экологическая микробиология . 14 (1): 4–12. дои : 10.1111/j.1462-2920.2011.02585.x . ПМИД 22004523.
^ Берг, Габриэле; Рыбакова Дарья; Фишер, Дорин; Чернава, Томислав; Верже, Мари-Кристин Шампомье; Чарльз, Тревор; Чен, Сяоюлун; Коколин, Лука; Эверсол, Келли; Коррал, Хема Эрреро; Казу, Мария; Кинкель, Линда; Ланге, Лене; Лима, Нельсон; Лой, Александр; МакКлин, Джеймс А.; Маген, Эммануэль; Моклин, Тим; МакКлюр, Райан; Миттер, Биргит; Райан, Мэтью; Саранд, Инга; Смидт, Хауке; Шелкле, Беттина; Рум, Хьюго; Киран, Г. Сегал; Селвин, Джозеф; Соуза, Рафаэль Соарес Корреа де; Ван Овербек, Лео; и другие. (2020). «Повторное рассмотрение определения микробиома: старые концепции и новые проблемы». Микробиом . 8 (1): 103. дои : 10.1186/s40168-020-00875-0 . ПМЦ 7329523 . ПМИД 32605663.
^ Адамс, Кристофер Дж.; Мэнли-Харрис, Мерилин ; Молан, Питер К. (2009). «Происхождение метилглиоксаля в новозеландском меде манука (Leptospermum scoparium)». Исследование углеводов . 344 (8): 1050–1053. doi : 10.1016/j.carres.2009.03.020. ПМИД 19368902.
^ Атротт, Джулия; Хаберлау, Штеффи; Хенле, Томас (2012). «Исследования образования метилглиоксаля из дигидроксиацетона в меде Манука (Leptospermum scoparium)». Исследование углеводов . 361 : 7–11. doi :10.1016/j.carres.2012.07.025. ПМИД 22960208.
^ Маврич, Эльвира; Виттманн, Сильвия; Барт, Джерольд; Хенле, Томас (2008). «Идентификация и количественная оценка метилглиоксаля как доминирующего антибактериального компонента меда Манука (Leptospermum scoparium) из Новой Зеландии». Молекулярное питание и пищевые исследования . 52 (4): 483–489. дои : 10.1002/mnfr.200700282 . ПМИД 18210383.
^ Гамильтон, Г., Миллнер, Дж., Робертсон, А. и Стивенс, Дж. (2013) «Оценка происхождения мануки для производства меда с высоким «уникальным фактором манука»». Агрономия Новой Зеландии , 43 : 139–144.
^ Уильямс, Саймон; Кинг, Джессика; Ревелл, Мария; Мэнли-Харрис, Мерилин; Балкс, Меган; Януш, Франциска; Кифер, Майкл; Клируотер, Майкл; Брукс, Питер; Доусон, Мюррей (2014). «Региональные, годовые и индивидуальные изменения содержания дигидроксиацетона в нектаре мануки (Leptospermum scoparium) в Новой Зеландии». Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии . 62 (42): 10332–10340. дои : 10.1021/jf5045958. ПМИД 25277074.
^ Стивенс, JMC (2006) «Факторы, ответственные за различные уровни UMF® в меде манука ( Leptospermum scoparium ), докторская диссертация, Университет Вайкато.
^ Ной, Стиви; Мэнли-Харрис, Мерилин; Клируотер, Майкл Дж. (2019). «Цветочный нектар дикой мануки (Leptospermum scoparium) больше варьируется между растениями, чем между местами». Новозеландский журнал растениеводства и садоводства . 47 (4): 282–296. дои : 10.1080/01140671.2019.1670681. S2CID 204143940.
^ Никлесс, Элизабет М.; Андерсон, Кристофер ВН; Гамильтон, Джорджи; Стивенс, Джонатан М.; Варджент, Джейсон (2017). «Влияние почвы на рост растений, густоту цветков и урожайность нектара у трех сортов мануки (Leptospermum scoparium)». Новозеландский журнал ботаники . 55 (2): 100–117. дои : 10.1080/0028825X.2016.1247732. S2CID 88657399.
^ Клируотер, Майкл Дж.; Ревелл, Мария; Нет, Стиви; Мэнли-Харрис, Мерилин (2018). «Влияние генотипа, стадии цветения и водного стресса на выход цветочного нектара и состав мануки (Leptospermum scoparium)». Анналы ботаники . 121 (3): 501–512. дои : 10.1093/aob/mcx183. ПМЦ 5838834 . ПМИД 29300875.
^ Джонстон, Питер Р. (1998). «Эндофиты листьев мануки (Leptospermum scoparium)». Микологические исследования . 102 (8): 1009–1016. дои : 10.1017/S0953756297005765.
^ Маккензи, EHC; Джонстон, PR; Бьюкенен, ПК (2006). «Контрольный список грибов чайного дерева (виды Kunzea и Leptospermum) в Новой Зеландии». Новозеландский журнал ботаники . 44 (3): 293–335. дои : 10.1080/0028825X.2006.9513025 . S2CID 84538904.
^ Викаксоно, Вишну Ади; Сансом, Кэтрин Э.; Эйриан Джонс, Э.; Перри, Найджел Б.; Монк, Яна; Риджуэй, Хейли Дж. (2018). «Арбускулярные микоризные грибы, связанные с Leptospermum scoparium (Manuka): влияние на рост растений и содержание эфирного масла». Симбиоз . 75 : 39–50. дои : 10.1007/s13199-017-0506-3. S2CID 4819178.
^ Викаксоно, Вишну Ади; Джонс, Э. Эйриан ; Монк, Яна; Риджуэй, Хейли Дж. (2016). «Бактериальная подпись Leptospermum scoparium (Manuka) выявляет основные и вспомогательные сообщества с биоактивными свойствами». ПЛОС ОДИН . 11 (9): e0163717. Бибкод : 2016PLoSO..1163717W. дои : 10.1371/journal.pone.0163717 . ПМК 5038978 . ПМИД 27676607.