Киназы рецепторов, сопряженных с G-белком ( GPCRK , GRK ) представляют собой семейство протеинкиназ в группе киназ AGC (протеинкиназа A, протеинкиназа G, протеинкиназа C). Как и все киназы AGC, GRK используют АТФ для добавления фосфата к остаткам серина и треонина в определенных местах целевых белков . В частности, GRK фосфорилируют внутриклеточные домены рецепторов, сопряженных с G-белком (GPCR). GRK функционируют в тандеме с белками- аррестинами , регулируя чувствительность GPCR для стимуляции нижестоящих гетеротримерных G-белков и G-белков-независимых сигнальных путей. [2] [3]
GRK обычно находятся в неактивном состоянии, но их киназная активность стимулируется связыванием с активируемым лигандом GPCR (а не регуляторным фосфорилированием, как это обычно бывает в других киназах AGC). Поскольку существует всего семь GRK (только 4 из которых широко экспрессируются по всему телу), но более 800 человеческих GPCR, GRK, по-видимому, имеют ограниченную селективность к месту фосфорилирования и регулируются в первую очередь активным состоянием GPCR. [3]
Связанные с G-белком рецепторные киназы фосфорилируют активированные связанные с G-белком рецепторы, что способствует связыванию белка аррестина с рецептором. Фосфорилированные остатки серина и треонина в GPCR действуют как сайты связывания и активаторы белков аррестина. Связывание аррестина с фосфорилированным активным рецептором предотвращает стимуляцию рецептора гетеротримерных белков-трансдьюсеров G-белка , блокируя их клеточную сигнализацию и приводя к десенсибилизации рецептора . Связывание аррестина также направляет рецепторы на специфические пути клеточной интернализации , удаляя рецепторы с поверхности клетки, а также предотвращая дополнительную активацию. Связывание аррестина с фосфорилированным активным рецептором также обеспечивает сигнализацию рецептора через партнерские белки аррестина. Таким образом, система GRK/аррестин служит сложным сигнальным переключателем для рецепторов, связанных с G-белком. [3]
GRK могут регулироваться сигнальными событиями в клетках, как в прямых механизмах обратной связи, где сигналы рецепторов изменяют активность GRK с течением времени, так и из-за сигналов, исходящих из различных путей из конкретной интересующей системы GPCR/GRK. Например, GRK1 регулируется белком-сенсором кальция рековерином: связанный с кальцием рековерином напрямую связывается с GRK1, чтобы ингибировать его способность фосфорилировать и десенсибилизировать родопсин, зрительный GPCR в сетчатке, в светоактивируемых палочковых клетках сетчатки, поскольку активация света повышает внутриклеточный кальций в этих клетках, тогда как в глазах, адаптированных к темноте, уровень кальция в палочковых клетках низкий, и GRK1 не ингибируется рековерином. [7] Невизуальные GRK вместо этого ингибируются кальций-связывающим белком кальмодулином . [2] GRK2 и GRK3 имеют общий домен гомологии плекстрина (PH) с карбоксильным концом, который связывается с субъединицами бета/гамма G-белка, а активация гетеротримерных G-белков GPCR высвобождает этот свободный комплекс бета/гамма, который связывается с GRK2/3 для привлечения этих киназ к клеточной мембране точно в месте расположения активированного рецептора, усиливая активность GRK для регуляции активированного рецептора. [2] [3] Активность GRK2 можно модулировать путем ее фосфорилирования протеинкиназой A или протеинкиназой C, а также путем посттрансляционной модификации цистеинов путем S-нитрозилирования. [8] [9]
Рентгеновские кристаллические структуры были получены для нескольких GRK (GRK1, GRK2, GRK4, GRK5 и GRK6), отдельно или в связке с лигандами. [10] В целом, GRK разделяют гомологию последовательностей и организацию доменов, в которой центральному каталитическому домену протеинкиназы предшествует домен с гомологией с активным доменом регулятора сигнальных белков G-белка , белков RGS (RGS-гомология – RH – домен), а за ним следует вариабельная регуляторная область карбоксильного конца хвоста. [3] В сложенных белках домен киназы образует типичную двухдольчатую структуру киназы с центральным активным сайтом связывания АТФ. [3] Домен RH состоит из альфа-спиральной области, образованной из аминоконцевой последовательности, плюс короткий участок последовательности, следующий за доменом киназы, который обеспечивает 2 дополнительные спирали и создает обширные контакты с одной стороной домена киназы. [10] Моделирование и мутагенез показывают, что домен RH ощущает активацию GPCR, чтобы открыть активный сайт киназы. [11]
GRK1 участвует в фосфорилировании и дезактивации родопсина в зрении вместе с аррестином-1 , также известным как S-антиген. Дефекты в GRK1 приводят к стационарной ночной слепоте Огучи . GRK7 аналогичным образом регулирует фосфорилирование и дезактивацию колбочкового опсина в цветном зрении вместе с аррестином колбочковым , также известным как аррестин-4 или X-аррестин. [3]
GRK2 был впервые идентифицирован как фермент, фосфорилирующий бета-2 адренергический рецептор , и изначально назывался киназой бета-адренергического рецептора (βARK или ββARK1). GRK2 сверхэкспрессируется при сердечной недостаточности, и ингибирование GRK2 может быть использовано для лечения сердечной недостаточности в будущем. [12]
Полиморфизмы в гене GRK4 связаны как с генетической, так и с приобретенной гипертонией , действуя частично через почечные дофаминовые рецепторы. [4] GRK4 является наиболее высоко экспрессируемым GRK на уровне мРНК в созревающих сперматидах , но мыши, у которых отсутствует GRK4, остаются фертильными, поэтому его роль в этих клетках остается неизвестной. [13]
У людей полиморфизм последовательности GRK5 в остатке 41 (лейцин, а не глутамин), который чаще всего встречается у людей с африканским происхождением, приводит к повышенной десенсибилизации бета2-адренорецепторов дыхательных путей, опосредованной GRK5, лекарственной мишени при астме . [14] У данио-рерио и у людей потеря функции GRK5 была связана с пороками сердца из-за гетеротаксии , серии дефектов развития, возникающих из-за неправильной лево-правой латерализации во время органогенеза . [15]
У мышей регуляция GRK6 рецепторов дофамина D2 в полосатом теле мозга изменяет чувствительность к психостимулирующим препаратам, действующим через дофамин, а GRK6 участвует в развитии болезни Паркинсона и в побочных эффектах дискинезии при противопаркинсонической терапии препаратом L-ДОФА . [16] [17]
GRK также фосфорилируют не-GPCR субстраты. GRK2 и GRK5 могут фосфорилировать некоторые тирозинкиназные рецепторы, включая рецептор тромбоцитарного фактора роста (PDGF) и инсулиноподобного фактора роста (IGF). [18] [19]
GRK также регулируют клеточные реакции независимо от их киназной активности. В частности, известно , что рецепторная киназа 2, связанная с G-белком, взаимодействует с разнообразным репертуаром белков-партнеров, не являющихся GPCR, но другие GRK также имеют партнеров, не являющихся GPCR. [20] Домен RGS-гомологии (RH) GRK2 и GRK3 связывается с гетеротримерными субъединицами G-белка семейства Gq, но, несмотря на то, что эти домены RH не способны действовать как активирующие GTPase белки, как традиционные белки RGS, для отключения сигнализации G-белка, это связывание снижает сигнализацию Gq путем секвестрации активных G-белков от их эффекторных белков, таких как фосфолипаза C-бета. [21]