Mycobacterium leprae (также известная как палочка проказы или палочка Хансена ) — один из двух видов бактерий , вызывающих болезнь Хансена (проказу), [1] хроническое, но излечимое инфекционное заболевание, поражающее периферические нервы и поражающее кожу. , глаза, нос и мышцы. [2]
Это кислотоустойчивая грамположительная палочковидная бактерия и облигатный внутриклеточный паразит , что означает, что, в отличие от ее родственной микобактерии туберкулеза , ее нельзя выращивать в бесклеточных лабораторных средах. [3] Вероятно, это связано с делецией генов и распадом, которые геном вида претерпел в результате редуктивной эволюции, что привело к тому, что бактерия стала сильно зависеть от своего хозяина в плане питательных веществ и промежуточных продуктов метаболизма . [4] У него узкий круг хозяев, и, кроме человека, единственными естественными хозяевами являются девятипоясной броненосец и красные белки . [5] Бактерии инфицируют в основном макрофаги и шванновские клетки и обычно встречаются в виде частокола . [6] [7]
Mycobacterium leprae была чувствительна к дапсону , но с 1960-х годов у нее развилась устойчивость к этому антибиотику . В настоящее время Всемирная организация здравоохранения рекомендует комбинированное лечение (MDT) , включая дапсон, рифампицин и клофазимин . Этот вид был открыт в 1873 году норвежским врачом Герхардом Армауэром Хансеном и стал первой бактерией, которая была идентифицирована как причина заболеваний у людей. [8]
Mycobacterium leprae — внутриклеточная плеоморфная неспорообразующая неподвижная кислотоустойчивая патогенная бактерия . _ [3] Это аэробная бацилла (бактерия палочковидной формы) с параллельными сторонами и закругленными концами, окруженная характерным восковым слоем миколевой кислоты , уникальным для микобактерий . Он является грамположительным при окрашивании по Граму , но Mycobacterium leprae традиционно окрашивается карболфуксином по Цилю-Нильсену . Поскольку бациллы менее кислотоустойчивы, чем Mycobacterium Tuberculosis (MTB), в настоящее время используется метод окрашивания Фите-Фарако, который имеет более низкую концентрацию кислоты. [9] [10] По размеру и форме он очень напоминает MTB. Бактерии обнаруживаются в гранулематозных поражениях и особенно многочисленны в узелках. Эти бактерии часто встречаются в больших количествах в очагах лепроматозной лепры и обычно группируются в виде частокола . [6] При оптической микроскопии клеток-хозяев Mycobacterium leprae можно обнаружить поодиночке или в скоплениях, называемых «глоби», бациллы могут быть прямыми или слегка изогнутыми, длиной от 1 до 8 мкм и диаметром 0,3 мкм. . [11] Бактерии лучше всего растут при температуре от 27 до 30 °C, что делает кожу, слизистую оболочку носа и периферические нервы основными мишенями для заражения Mycobacterium leprae . [12]
Mycobacterium leprae имеет узкий круг хозяев, и, кроме человека, единственными хозяевами являются девятипоясные броненосцы и красные белки [5] , а броненосцы считаются источником зоонозной проказы у людей. [13] В лаборатории мыши могут быть заражены, и это полезная модель на животных . [14]
Mycobacterium leprae имеет необычно длительное время удвоения (от 12 до 14 дней по сравнению с 20 минутами для Escherichia coli ), а также ее невозможность культивирования в лаборатории. [15] [16] [17] Поскольку этот организм является облигатным внутриклеточным паразитом , ему не хватает многих генов, необходимых для независимого выживания, что затрудняет культивирование организма. Сложная и уникальная клеточная стенка, из-за которой представителей рода Mycobacterium трудно уничтожить, также является причиной чрезвычайно медленной скорости их репликации. Mycobacterium leprae предпочитает прохладные температуры, слегка кислые микроаэрофильные условия и предпочитает использовать липиды в качестве источника энергии, а не сахара. Условия роста, необходимые для Mycobacterium leprae, известны, но точная аксеническая среда, поддерживающая рост Mycobacterium leprae, до сих пор не найдена. [18] Поскольку культивирование in vitro , как правило, невозможно, вместо этого его выращивают на подушечках лап мышей, [14] и на броненосцах из-за их низкой внутренней температуры тела. [19] [18]
Редуктивная эволюция, которую испытал геном Mycobacterium leprae , ухудшила ее метаболические способности по сравнению с другими микобактериями, особенно в ее катаболических путях. [20]
Неспособность Mycobacterium leprae расти в аксенических средах указывает на то, что она зависит от питательных веществ и промежуточных продуктов своего хозяина. [21] Многие катаболические пути, присутствующие у других видов Mycobacterium , нарушены из-за отсутствия ферментов, которые играют ключевую роль в расщеплении питательных веществ. [21] Mycobacterium leprae потеряла способность использовать обычные источники углерода, такие как ацетат и галактоза, в своих центральных путях энергетического метаболизма. [4] Кроме того, деградация липидов нарушается из-за дефицита ключевых ферментов липазы и других белков, участвующих в липолизе. [22] Функциональные пути катаболизма углерода продолжают существовать у этого вида, такие как гликолитический путь, пентозофосфатный путь и цикл ТСА. [21] Эти недостатки сильно ограничивают рост микроба ограниченным количеством источников углерода, таких как промежуточные продукты, полученные из организма хозяина. [4]
Анаболические пути Mycobacterium leprae практически не пострадали от ее редукционной эволюции. [20] Вид сохраняет способность к синтезу генетического материала, такого как пурины, пиримидины, нуклеотиды и нуклеозиды, а также к синтезу всех аминокислот, кроме метионина и лизина. [21]
Первая последовательность генома штамма Mycobacterium leprae была завершена в 2001 году и выявила 1604 гена, кодирующих белки, и еще 1116 псевдогенов. [23] Последовательность генома штамма, первоначально выделенного в Тамил Наду , Индия , и получившего обозначение TN , была завершена в 2013 году. Эта последовательность генома содержит 3 268 203 пары оснований (п.н.) и среднее содержание G+C 57,8%, что значительно меньше, чем M.tuberculosis , который имеет 4 441 529 п.н. и 65,6% G+C. [24]
Сравнение последовательности генома Mycobacterium leprae и MTB обнаруживает крайний случай редуктивной эволюции . Менее половины генома содержит функциональные гены . По оценкам, около 2000 генов из генома Mycobacterium leprae были потеряны. [23] Удаление и распад генов, по-видимому, уничтожили многие важные метаболические активности, включая выработку сидерофоров , часть окислительных и большую часть микроаэрофильных и анаэробных дыхательных цепей, а также многочисленные катаболические системы и их регуляторные цепи. [25] Эта редукционная эволюция во многом связана с развитием организма в облигатную внутриклеточную бактерию. [26]
Многие гены, присутствовавшие в геноме общего предка Mycobacterium leprae и M.tuberculosis, потеряны в геноме Mycobacterium leprae . [23] [27] Из-за того, что Mycobacterium leprae зависит от организма-хозяина, многие функции восстановления ДНК этого вида были потеряны, что увеличивает вероятность делеционных мутаций . [26] Поскольку продукты, поставляемые этими удаленными генами, обычно присутствуют в клетках-хозяевах, инфицированных Mycobacterium leprae , влияние мутаций на микроб минимально, что позволяет выжить внутри хозяина, несмотря на его уменьшенный геном. [28] Следовательно, Mycobacterium leprae претерпела резкое уменьшение размера генома с потерей многих генов. [4] Более половины генома возбудителя в настоящее время состоит из псевдогенов, поскольку возбудитель претерпевает так называемую редуктивную эволюцию . [4] Среди опубликованных геномов Mycobacterium leprae содержит наибольшее количество псевдогенов (>1000). [29] Многие из этих псевдогенов возникли в результате вставок стоп-кодонов, которые могли быть вызваны дисфункцией сигма-фактора (белка, необходимого для инициации транскрипции у бактерий) или вставки повторяющихся последовательностей, полученных из транспозонов. [30] Некоторые уровни экспрессии псевдогенов Mycobacterium leprae изменяются при инфицировании макрофагов, что позволяет предположить, что некоторые псевдогены Mycobacterium leprae не все являются «разложившимися» генами, но также могут функционировать при инфекции, внутриклеточной репликации и репликации. [29] Эта редукция генома не является полной. [27] Уменьшение размера генома размером 4,42 МБП, такого как геном M.tuberculosis , до генома размером 3,27 МБП приведет к потере около 1200 последовательностей, кодирующих белок .
Существует восемь основных ферментов Mycobacterium leprae , и один из них — аланинрацемаза (alr). Этот фермент важен, поскольку он присутствует в метаболизме D-аланин-D-аланин-лигазы и аспартата . Другие важные ферменты включают предполагаемую dTDP4дейдрорамнозо- 3,5-эпимеразу (rm1C), которая играет важную роль как в метаболизме нуклеотидных сахаров, так и в биосинтезе поликетидных сахарных единиц. Для биосинтеза петидогликанов также необходимы murG, murF, MurE, murY, murC и murD, оставшиеся шесть основных ферментов для микобактерий leprae. [31] [ нужен лучший источник ]
Бактерия распространена среди людей по всему миру, но наибольшая распространенность наблюдается в странах Африки к югу от Сахары, Азии и Южной Америке. [32] Географическое распространение Mycobacterium leprae включает: Анголу, Бразилию, Центральноафриканскую Республику, Демократическую Республику Конго, Федеративные Штаты Микронезии, Индию, Кирибати, Мадагаскар, Непал, Республику Маршалловы Острова и Объединенную Республику Танзания. [33]
С момента внедрения комбинированной лекарственной терапии (МЛТ) в 1980-х годах распространенность случаев лепры снизилась на 95%. [34] Это снижение побудило Всемирную организацию здравоохранения (ВОЗ) объявить проказу ликвидированной как проблему общественного здравоохранения, определяемую как распространенность менее одного больного проказой на 10 000 населения. [35] Помимо передачи Mycobacterium leprae от инфицированных людей, важным резервуаром также могут быть источники окружающей среды. ДНК Mycobacterium leprae была обнаружена в почве домов больных проказой в Бангладеш, нор броненосцев в Суринаме и мест обитания лепроматозных красных белок на Британских островах. [36] Одно исследование выявило многочисленные сообщения о случаях проказы при контакте с броненосцами в Соединенных Штатах. [34] Был предложен зоонозный путь передачи инфекции при контакте с броненосцами: в ходе предыдущего исследования на юго-востоке США было показано, что пациенты-люди инфицированы тем же генотипом Mycobacterium leprae , ассоциированным с броненосцами . [37] Высокие показатели заражения Mycobacterium leprae наблюдались у броненосцев в бразильском штате Пара, а у людей, которые часто потребляли мясо броненосцев, наблюдались значительно более высокие титры специфического антигена M. leprae, фенольного гликолипида I (PGL-I) по сравнению с с теми, кто не ел или ел их реже. [38] [34]
Ближайшим родственником Mycobacterium leprae является Mycobacterium lepromatosis . Эти виды разошлись 13,9 миллиона лет назад (самая высокая задняя плотность 95% 8,2 миллиона лет назад - 21,4 миллиона лет назад ). Было подсчитано, что самый последний общий предок современных штаммов Mycobacterium leprae жил 3607 лет назад (самая высокая задняя плотность 95% 2204–2204–2204 гг.). 5525 лет назад). Предполагаемая скорость замен составила 7,67 x 10 -9 замен на сайт в год, как и у других бактерий. [39]
Исследование геномов, выделенных из средневековых случаев, показало, что частота мутаций составила 6,13 × 10 -9 . Авторы также показали, что бацилла проказы в Америку была завезена туда из Европы. [40] Другое исследование предполагает, что Mycobacterium leprae возникла в Восточной Африке и распространилась оттуда сначала в Европу и на Ближний Восток, а затем распространилась в Западную Африку и Америку за последние 500 лет. [41]
Почти полные последовательности Mycobacterium leprae из средневековых скелетов с остеологическими поражениями, напоминающими проказу, из разных географических регионов Европы были получены с использованием методов захвата ДНК и высокопроизводительного секвенирования . Древние последовательности были сопоставлены с последовательностями современных штаммов из биопсий больных проказой, представляющих различные генотипы и географическое происхождение, что дало новое понимание ее эволюции и хода в истории, филогеографии бациллы проказы и исчезновения проказы в Европе. [40]
Верена Дж. Шунеманн и др. продемонстрировали замечательную геномную сохранность за последние 1000 лет и близкое сходство между современными и древними штаммами, что позволяет предположить, что внезапное снижение заболеваемости проказой в Европе произошло не из-за потери вирулентности, а из-за посторонних факторов, таких как другие инфекционные заболевания, изменения иммунитета хозяина или улучшение социальных условий. [40]
Инкубационный период Mycobacterium leprae составляет от 9 месяцев до 20 лет. [42] Бактерия размножается внутриклеточно внутри гистиоцитов и нервных клеток и имеет две формы. Одной из форм является «туберкулоид», которая индуцирует клеточно-опосредованный ответ, ограничивающий его рост, и имеет мало обнаруживаемых бацилл (пауцибациллярные). [43] Благодаря этой форме Mycobacterium leprae размножается в месте проникновения, обычно в кожу, проникая и колонизируя шванновские клетки . Затем бактерия индуцирует Т-хелперные лимфоциты, эпителиоидные клетки и гигантоклеточную инфильтрацию кожи, в результате чего у инфицированных людей на коже появляются большие уплощенные пятна с приподнятыми и приподнятыми красными краями. Эти пятна имеют сухие, бледные, безволосые центры, что сопровождается потерей чувствительности кожи. Потеря чувствительности может развиться в результате инвазии периферических чувствительных нервов. Пятно в месте проникновения на кожу и потеря болевой чувствительности являются ключевыми клиническими признаками того, что у человека туберкулоидная форма лепры . [44]
Вторая форма лепры — «лепроматозная» форма, при которой микробы размножаются внутри макрофагов в месте проникновения и содержат множество обнаруживаемых бацилл (мультибациллярных). [43] Они также растут в эпителиальных тканях лица и мочек ушей. Индуцируемые супрессорные Т-клетки многочисленны, но эпителиоидные и гигантские клетки редки или отсутствуют. При нарушении клеточного иммунитета в макрофагах появляется большое количество Mycobacterium leprae , а у инфицированных пациентов в месте проникновения появляются папулы, отмеченные складками кожи. Постепенное разрушение кожных нервов приводит к тому, что называют «классической львиной мордой ». Обширное проникновение этой бактерии может привести к серьезному повреждению организма; например, потеря костей, пальцев рук и ног. [44]
Симптомами инфекции Mycobacterium leprae , также известной как проказа, являются язвы на коже бледного цвета, шишки или шишки, которые не проходят через несколько недель или месяцев, повреждение нервов, которое может привести к осложнениям, связанным со способностью ощущать чувства. руки и ноги, а также мышечная слабость. Симптомы обычно проявляются в организме через 3–5 лет с момента воздействия. Однако у некоторых людей симптомы начинают проявляться только через 20 лет после заражения болезнью. Из-за длительного инкубационного периода очень сложно правильно диагностировать, когда человек вступил в контакт с заболеванием. [46]
У броненосцев Mycobacterium leprae вызывает диссеминированную инфекцию со сходными структурными и патологическими изменениями в тканях и нервах. [47]
По данным Отделения ветеринарной патологии Эдинбургского университета , у белок «заболевание безошибочно распознать: наблюдаются выраженные отеки и выпадение шерсти вокруг морды, губ, век, ушей, гениталий, а иногда и ступней и нижних конечностей. Это голая кожа. имеет «блестящий» вид. Белка обычно находится в плохом состоянии и может иметь тяжелое бремя паразитов, таких как блохи, клещи и клещи». [48]
Миколиновые кислоты в клеточных стенках бактерий обеспечивают устойчивость ко многим антибиотикам и являются основным фактором вирулентности. [49] Комплексная лекарственная терапия (MDT) была рекомендована Комитетом экспертов ВОЗ в 1984 году и стала стандартным методом лечения лепры. МДТ поставляется ВОЗ бесплатно с 1995 года в эндемичные страны. МДТ используется для лечения лепры, поскольку лечение лепры одним препаратом (монотерапия) может привести к развитию лекарственной устойчивости. Комбинация препаратов, используемая при МДТ, будет зависеть от классификации заболевания. ВОЗ рекомендует пациентам с мультибациллярной проказой использовать комбинацию рифампицина, клофазимина и дапсона в течение 12 месяцев. ВОЗ рекомендует пациентам с паулибациллярной проказой применять комбинацию рифампицина и дапсона в течение 6 месяцев. [50] Антибиотики необходимо принимать регулярно до завершения лечения, поскольку Mycobacterium leprae может стать устойчивой к лекарствам. [51] Эффективность лечения можно определить с помощью кислотоустойчивого окрашивания мазка кожи на Mycobacterium leprae для оценки количества бацилл, все еще присутствующих у пациента. [52]
Число зарегистрированных случаев лепры ежегодно составляет около 250 000 случаев, что указывает на то, что цепочка передачи еще не разорвана, несмотря на использование МДТ, которое привело к снижению распространенности лепры на 90%. Это делает совершенно очевидным, что контроль над этим заболеванием еще не достиг того уровня, который должен вызывать необходимость продолжения исследований в области лечения и контроля. [4]
Мерой профилактики Mycobacterium leprae является избежание тесного контакта с заразными людьми, не получающими лечения. [53] Слепота, увечье рук и ног и паралич — все это последствия повреждения нервов, связанные с невылеченной M. leprae. Лечение не устраняет нанесенное повреждение нерва, поэтому необходимо раннее лечение. [51] Вакцина Bacillus Calmette-Guéren обеспечивает различную степень защиты от лепры в дополнение к ее основной цели - туберкулезу . [54]
Дапсон конкурентно ингибирует фермент дигидроптероатсинтазу (DHPS), что приводит к снижению выработки тетрагидрофолата, который является важным компонентом биосинтеза нуклеиновых кислот у M. leprae. Рифампин прерывает связывание β-субъединицы ДНК-зависимой РНК-полимеразы, что приводит к разрыву выработки мРНК и приводит к гибели клеток. Механизмы действия клофазимина в отношении Mycobacterium leprae не до конца понятны , но связывание препарата, по-видимому, происходит в последовательностях оснований с гуанином, что может объяснить, почему клофазимин отдает предпочтение геномам микобактерий, богатых G + C, по сравнению с ДНК человека. Доказано, что связывание клофазимина с ДНК микобактерий оказывает слабое бактерицидное действие на Mycobacterium leprae у мышей, поэтому он не подходит для монотерапии проказы. Из трех основных препаратов рифампицин более бактерициден, чем дапсон или клофазимин. [55]
Важно найти новые мишени для антибиотиков из-за растущей резистентности. Mycobacterium leprae содержит шесть основных ферментов murC, murD, murE, murF, murG и murY, которые необходимы для биосинтеза пептидогликана у M. leprae. Эти ферменты и биосинтез пептидогликана являются потенциальными мишенями для антибиотиков. Воздействуя на эти ферменты, которые катализируют присоединение коротких полипептидных цепей, можно предотвратить синтез бактериальной клеточной стенки. [56] [ нужен лучший источник ]
Устойчивость к антибиотикам наблюдается примерно в 10% новых случаев лепры и примерно в 15% случаев рецидивов. [57] Считается, что устойчивость Mycobacterium leprae к лекарственным средствам обусловлена генетическими изменениями в мишенях антибиотиков и снижением проницаемости клеточной стенки. [58] По сравнению с количеством эффлюксных насосов у M. Tuberculosis , Mycobacterium leprae содержит примерно вдвое меньше. Откачивающие насосы, способствующие лекарственной устойчивости и вирулентности M. Tuberculosis, сохранялись на протяжении всей редукционной эволюции генома, которую претерпела Mycobacterium leprae . [58]
Mycobacterium leprae была открыта в 1873 году норвежским врачом Герхардом Армауэром Хансеном (1841–1912) и стала первой бактерией, которая была идентифицирована как причина заболеваний у людей. [8] Альберт Людвиг Сигесмунд Нейссер подтвердил, что это бактерия , который спорил с Хансеном по поводу приоритета открытия. [59] Попытки Хансена заразить животных бактериями не увенчались успехом, и он был уволен со своего поста в больнице лепры в Бергене и ему запретили заниматься медицинской практикой, когда в 1879 году он без согласия ввел инъекцию ткани человека, больного лепроматозной проказой. в глаз 33-летней Кари Нильсдаттер, у которой была более легкая форма туберкулоидной инфекции. [60] Этот случай мало повлиял на профессиональную репутацию Хансена, и он продолжил свои исследования. [61]