stringtranslate.com

Флюорометр Кубита

Флуориметр Qubit — это лабораторный прибор, разработанный и распространяемый компанией Invitrogen , которая теперь является частью Thermo Fisher . Он используется для количественной оценки ДНК , РНК и белка . [1] [2] [3] [4]

Метод

Метод флуориметра Qubit заключается в использовании флуоресцентных красителей для определения концентрации нуклеиновых кислот или белков в образце. Специализированные флуоресцентные красители связываются специфически с интересующими веществами. В этом методе спектрофотометр используется для измерения естественного поглощения света при 260 нм (для ДНК и РНК) или 280 нм (для белков). [5] [6] [7] [8]

Флуоресцентные красители

Анализы Qubit (ранее известные как Quant-iT) были ранее разработаны и изготовлены компанией Molecular Probes (теперь часть Life Technologies ). Каждый краситель специализируется на одном типе молекулы (ДНК, РНК или белок). Эти красители демонстрируют крайне низкую флуоресценцию до тех пор, пока не будут связаны с целевой молекулой. После связывания с ДНК молекулы красителя принимают более жесткую форму и увеличивают флуоресценцию на несколько порядков, скорее всего, из-за интеркаляции между основаниями. [9] [10]

Флуориметр Qubit, устройство, предназначенное для измерения сигналов флуоресценции образцов, работает, сопоставляя эти сигналы с известными концентрациями зондов. Этот процесс позволяет преобразовывать данные флуоресценции в количественное измерение концентрации. Устройство использует это установленное соотношение для точного определения концентрации образца.

Конкретным примером этой технологии является флуориметр Qubit 2.0, который часто используется в сочетании с «dsDNA BR Assay Kit». Этот набор, как и другие в системе количественной оценки Qubit, включает красители. Эти красители чувствительны к различным биомолекулам и их концентрациям. В этом контексте «ds» обозначает двухцепочечную, а «ss» — одноцепочечную ДНК, что указывает на конкретные типы ДНК, которые могут обнаруживать красители.

Версии

Второе поколение, флуориметр Qubit 2.0, было выпущено в 2010 году, а третье поколение — Qubit 3.0 — в 2014 году. Новейшая версия — Qubit 4 четвертого поколения, представленная в 2017 году.

Ссылки

  1. ^ Акар Э. и др. (2009). «Исследования оптимизации и проверки набора MentypeR Argus X-8 для случаев установления отцовства». Forensic Sci Int Genet Suppl . 2 : 47–48. doi :10.1016/j.fsigss.2009.08.189.
  2. ^ Bakos J, et al. (2009). «Обогащенная среда влияет на гормональный статус и нейротрофический фактор, полученный из гиппокампа, в зависимости от пола». Neuroscience . 164 (2): 788–797. doi :10.1016/j.neuroscience.2009.08.054. PMID  19723563. S2CID  23809910.
  3. ^ Halaihel N, et al. (2009). «Новый анализ на основе ПЦР в реальном времени для диагностики Renibacterium salmoninarum у радужной форели (Oncorhynchus mykiss) и сравнение с другими методами». J Microbiol Methods . 76 (1): 75–80. doi :10.1016/j.mimet.2008.09.014. PMID  18938198.
  4. ^ Хамза IA и др. (2009). «Обнаружение и количественная оценка бокавируса человека в речной воде». J Gen Virol . 90 (Pt 11): 2634–2637. doi : 10.1099/vir.0.013557-0 . PMID  19656966.
  5. ^ Манчестер, К. Л. (1996). «Использование УФ-методов для измерения концентраций белков и нуклеиновых кислот». BioTechniques . 20 (6): 968–970. doi : 10.2144/96206bm05 . PMID  8780864.
  6. ^ Glasel, JA (1995). «Достоверность чистоты нуклеиновых кислот, контролируемая с помощью коэффициентов поглощения 260 нм/280 нм». BioTechniques . 18 (1): 62–63. PMID  7702855.
  7. ^ Huberman, JA (1995). "Важность измерения поглощения нуклеиновых кислот при 240 нм, а также при 260 и 280 нм". BioTechniques . 18 (4): 636. PMID  7598897.
  8. ^ Манчестер, KL (1995). «Значение соотношений A260/A280 для измерения чистоты нуклеиновых кислот». BioTechniques . 19 (2): 208–210. PMID  8527139.
  9. ^ McKnight, RE, Gleason, AB, Keyes, JA, Sahabi, S. (2006). «Исследования способа связывания и сродства ДНК-связывающих агентов с использованием анализа раскручивания ДНК топоизомеразой I». Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters . 17 (4): 1013–1017. doi :10.1016/j.bmcl.2006.11.038. PMID  17157016.{{cite journal}}: CS1 maint: multiple names: authors list (link)
  10. ^ Швейцер, К.; Скайано, Дж. К. (2003). «Избирательное связывание и локальная фотофизика флуоресцентного цианинового красителя PicoGreen в двухцепочечной и одноцепочечной ДНК». Физическая химия Химическая физика . 5 (21): 4911–4917. Bibcode : 2003PCCP....5.4911S. doi : 10.1039/b305921a.

Внешние ссылки