Аллофикоцианин («другой синий белок водорослей»; от греческого : ἄλλος (аллос) означает «другой», φύκος (фикос) означает «водоросль» и κυανός (кианос) означает «синий») представляет собой белок из семейства светособирающих фикобилипротеинов . , наряду с фикоцианином , фикоэритрином и фикоэритроцианином . Это дополнительный пигмент хлорофилла . Все фикобилипротеины водорастворимы и поэтому не могут существовать внутри мембраны, как каротиноиды , а агрегируются, образуя кластеры, которые прикрепляются к мембране и называются фикобилисомами . Аллофикоцианин поглощает и излучает красный свет (максимум 650 и 660 нм соответственно) и легко обнаруживается в цианобактериях (также называемых сине-зелеными водорослями ) и красных водорослях . Пигменты фикобилина обладают флуоресцентными свойствами, которые используются в наборах для иммуноанализа . В проточной цитометрии его часто называют APC. Для эффективного использования в таких приложениях, как FACS , высокопроизводительный скрининг (HTS) и микроскопия , APC должен быть химически сшит.
Аллофикоцианин можно выделить из различных видов красных или сине-зеленых водорослей, каждый из которых дает несколько разные формы молекулы. Он состоит из двух разных субъединиц (α и β), каждая из которых имеет один хромофор фикоцианобилина (ПХБ). Структура субъединиц APC была определена как (αβ) 3 . Молекулярная масса АПК составляет 105 000 дальтон.
Сшитый APC
Как упоминалось выше, для того, чтобы APC можно было использовать в иммуноанализах, его сначала необходимо химически сшить, чтобы предотвратить диссоциацию на составляющие его субъединицы в обычных физиологических буферах. [1] Обычный метод достижения этой цели заключается в деструктивном процессе, при котором обработанный тример АРС химически разрушается в 8М мочевине, а затем ему дают возможность повторно ассоциироваться в физиологическом буфере. [2] Можно использовать альтернативный метод, который сохраняет структурную целостность тримера APC и позволяет получить более яркий и стабильный конечный продукт. [3]
Многие приложения и инструменты были разработаны специально для аллофикоцианина. Он обычно используется в иммунных анализах , таких как FACS , проточная цитометрия и высокопроизводительный скрининг, в качестве акцептора европия с помощью анализов переноса энергии с помощью резонансного флуоресцентного переноса энергии с временным разрешением (TR-FRET) .