Анионообменная хроматография — это процесс, который разделяет вещества на основе их зарядов с использованием ионообменной смолы , содержащей положительно заряженные группы, такие как диэтиламиноэтильные группы (DEAE). [2] В растворе смола покрыта положительно заряженными противоионами ( катионами ). Анионообменные смолы будут связываться с отрицательно заряженными молекулами, вытесняя противоион. Анионообменная хроматография обычно используется для очистки белков , аминокислот , сахаров / углеводов и других кислых веществ [3] с отрицательным зарядом при более высоких уровнях pH . Прочность связи между веществом и смолой основана на силе отрицательного заряда вещества.
В колонку заливается суспензия смолы, например, DEAE-Sephadex. Используемая матрица нерастворима с заряженными группами, которые ковалентно присоединены. Эти заряженные группы называются обменниками, такими как катионообменники и анионообменники. После осаждения колонка предварительно уравновешивается в буфере перед нанесением белковой смеси. DEAE-Sephadex — это положительно заряженная суспензия, которая будет иметь электростатические взаимодействия с отрицательно заряженными атомами, заставляя их элюироваться позже, чем положительно заряженные молекулы в интересующем образце. Это метод разделения, широко используемый для обнаружения определенных белков или ферментов в организме. [2] Несвязанные белки собираются в проточной воде и/или в последующих промывках буфера. Белки, которые связываются с положительно заряженной смолой, удерживаются и могут быть элюированы одним из двух способов. Во-первых, концентрация соли в буфере элюирования постепенно увеличивается. Отрицательные ионы в солевом растворе (например, Cl− ) конкурируют с белком за связывание со смолой. Во-вторых, pH раствора можно постепенно понижать, что приводит к более положительному заряду белка, высвобождая его из смолы. Оба эти метода могут вытеснять отрицательно заряженный белок, который затем элюируется во фракции пробирок с буфером. [4] [5] [6]
Разделение белков будет зависеть от различий в общем заряде. Состав ионизированных групп боковой цепи будет определять общий заряд белка при определенном pH . В изоэлектрической точке (pI) общий заряд белка равен 0, и он не будет связываться с матрицей. Если pH выше pI, белок будет иметь отрицательный заряд и связываться с матрицей в анионообменной колонке. Стабильность белка при значениях выше или ниже pI определит, следует ли использовать анионообменную колонку или катионообменную колонку. Если он стабилен при значениях pH ниже pI, следует использовать катионообменную колонку. Если он стабилен при значениях pH выше pI, можно использовать анионообменную колонку. [7]
{{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )