Генетический химеризм или химера ( / k aɪ ˈ m ɪər ə / ky- MEER -ə или / k ɪ ˈ m ɪər ə / kim- EER -ə ) — это единый организм, состоящий из клеток с более чем одним отличным генотипом . У животных и человеческих химер это означает, что человек произошел от двух или более зигот , что может включать наличие клеток крови разных групп крови и незначительные различия в форме ( фенотипе ). Животные-химеры возникают в результате слияния двух (или более) эмбрионов . Однако у растительных химер разные типы тканей могут происходить из одной и той же зиготы , и это различие часто связано с мутацией во время обычного клеточного деления . Обычно генетический химеризм не выявляется при беглом осмотре; однако это было обнаружено в ходе доказывания отцовства. [1] Напротив, особь, у которой каждая клетка содержит генетический материал от двух организмов разных пород, разновидностей, видов или родов, называется гибридом . [2]
Другой способ возникновения химеризма у животных — это трансплантация органов , в результате которой получаются отдельные ткани, развившиеся из другого генома . Например, трансплантация костного мозга часто определяет будущую группу крови реципиента . [ нужна цитата ] .
Некоторый уровень химеризма естественным образом встречается в дикой природе у многих видов животных, однако в некоторых случаях может быть необходимой (обязательной) частью их жизненного цикла.
Химеризм естественным образом возникает у взрослых цератиоидных удильщиков и фактически является естественной и важной частью их жизненного цикла. Как только самец достигает совершеннолетия, он начинает поиски самки. Используя сильные обонятельные (или обонятельные) рецепторы, самец ищет, пока не найдет самку удильщика. Самец длиной менее дюйма вгрызается в ее кожу и выделяет фермент, который переваривает кожу как его рта, так и ее тела, сплавляя пару до уровня кровеносных сосудов. Хотя эта привязанность стала необходимой для выживания самца, в конечном итоге она поглотит его, поскольку оба удильщика сливаются в одну гермафродитную особь. Иногда в этом процессе к одной самке как симбиот прикрепляется более одного самца. В этом случае все они попадут в тело более крупной женщины-рыболова. После слияния с самкой самцы достигают половой зрелости, у них развиваются большие яички , а другие органы атрофируются . Этот процесс позволяет сперме постоянно находиться в наличии, когда самка производит яйцеклетку, так что химерная рыба может иметь большее количество потомства. [3]
Химеризм обнаружен у некоторых видов морских губок. [4] У одного человека были обнаружены четыре различных генотипа, и существует вероятность еще большей генетической гетерогенности. Каждый генотип функционирует независимо с точки зрения воспроизводства, но различные внутриорганные генотипы ведут себя как одна большая особь с точки зрения экологических реакций, таких как рост. [4]
Было показано, что желтые сумасшедшие муравьи являются облигатными химерами, и это первый известный случай такого рода. У этого вида королевы возникли из оплодотворенных яиц с генотипом RR (Репродуктивный x Репродуктивный), стерильные рабочие самки демонстрируют расположение RW (Репродуктивный x Рабочий), а самцы вместо того, чтобы быть гаплоидными, как это обычно бывает у муравьев. также имеют генотип RW, но у них яйцеклетка R и сперматозоид W не сливаются, поэтому они развиваются как химера, в которой одни клетки несут геном R, а другие — геном W. [5] [6]
Искусственный химеризм относится к примерам химеризма, которые намеренно создаются людьми либо в исследовательских, либо в коммерческих целях.
Тетрагаметный химеризм — это форма врожденного химеризма. Это состояние возникает в результате оплодотворения двух отдельных яйцеклеток двумя сперматозоидами с последующей их агрегацией на стадиях бластоцисты или зиготы. Это приводит к развитию организма со смешанными клеточными линиями. Иными словами, химера образуется в результате слияния двух неидентичных близнецов (подобное слияние предположительно происходит и с однояйцевыми близнецами, но поскольку их генотипы существенно не различаются, получившийся индивидуум не будет считаться химерой). Таким образом, они могут быть мужчинами, женщинами или иметь смешанные интерсекс-характеристики. [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] [ чрезмерное цитирование ]
Тетрагаметное состояние имеет важные последствия для трансплантации органов или стволовых клеток . Химеры обычно обладают иммунологической толерантностью к обеим клеточным линиям. [ нужна цитата ]
Микрохимеризм — это наличие небольшого количества клеток, генетически отличных от клеток человека-хозяина. Большинство людей рождаются с несколькими клетками, генетически идентичными клеткам их матерей, и с возрастом у здоровых людей доля этих клеток снижается. У людей, у которых сохраняется большее количество клеток, генетически идентичных клеткам их матери, наблюдается более высокий уровень некоторых аутоиммунных заболеваний, предположительно потому, что иммунная система ответственна за разрушение этих клеток, а общий иммунный дефект не позволяет ей это сделать, а также вызывает аутоиммунные проблемы. .
Более высокий уровень аутоиммунных заболеваний из-за присутствия клеток материнского происхождения является причиной того, что в исследовании 2010 года 40-летнего мужчины со склеродермиоподобным заболеванием (аутоиммунное ревматическое заболевание) женские клетки были обнаружены в его кровотоке с помощью Считалось, что FISH (флуоресцентная гибридизация in situ) происходит по материнской линии. Однако было обнаружено, что его форма микрохимеризма возникла из-за исчезнувшего близнеца, и неизвестно, может ли микрохимеризм исчезнувшего близнеца также предрасполагать людей к аутоиммунным заболеваниям. [14] У матерей часто также есть несколько клеток, генетически идентичных клеткам их детей, а у некоторых людей также есть некоторые клетки, генетически идентичные клеткам их братьев и сестер (только у братьев и сестер по материнской линии, поскольку эти клетки передаются им, потому что их мать сохранила их). . [ нужна цитата ]
Химеризм зародышевой линии возникает, когда зародышевые клетки (например, сперматозоиды и яйцеклетки ) организма генетически не идентичны его собственным. Недавно было обнаружено, что игрунки могут нести репродуктивные клетки своих (разнояйцевых) братьев и сестер-близнецов благодаря слиянию плаценты во время развития. (Мартышки почти всегда рожают разнояйцевых близнецов.) [15] [16] [17]
По мере развития организма у него могут появиться органы с разными наборами хромосом . Например, химера может иметь печень , состоящую из клеток с одним набором хромосом, и почку, состоящую из клеток со вторым набором хромосом. Такое случалось и с людьми, и одно время считалось, что это крайне редкое явление, хотя более поздние данные свидетельствуют о том, что это не так. [18] [19]
Особенно это касается мартышки . Недавние исследования показывают, что большинство мартышек являются химерами, имеющими общую ДНК со своими близнецами . [15] 95% разнояйцевых близнецов мартышек обмениваются кровью посредством слияния хорионов , что делает их гемопоэтическими химерами. [20] [21]
У волнистых попугаев из-за множества существующих вариаций окраски оперения тетрагаметные химеры могут быть очень заметными, поскольку в результате птица будет иметь очевидное разделение между двумя цветовыми типами, часто разделенными по обе стороны по центру. Эти особи известны как полубокие волнистые попугайчики . [22]
Животное-химера — это единый организм , состоящий из двух или более различных популяций генетически различных клеток , произошедших из разных зигот , участвующих в половом размножении . Если разные клетки возникли из одной и той же зиготы, организм называется мозаикой . Врожденные химеры образуются как минимум из четырех родительских клеток (двух оплодотворенных яйцеклеток или ранних эмбрионов, слившихся вместе). Каждая популяция клеток сохраняет свой характер, и образующийся организм представляет собой смесь тканей. Задокументированы случаи появления человеческих химер . [18]
Некоторые считают мозаицизм формой химеризма, [23] в то время как другие считают их отдельными. [24] [25] [26]
Мозаицизм предполагает мутацию генетического материала в клетке, приводящую к появлению подмножества клеток, отличающихся от остальных.
Естественный химеризм — это слияние более чем одной оплодотворенной зиготы на ранних стадиях внутриутробного развития . Встречается гораздо реже, чем мозаицизм. [26]
При искусственном химеризме у человека есть одна линия клеток , унаследованная генетически во время формирования человеческого эмбриона, и другая, которая была введена посредством процедуры, включая трансплантацию органов или переливание крови . [27] Конкретные типы трансплантаций, которые могут вызвать это состояние, включают трансплантацию костного мозга и трансплантацию органов, поскольку организм реципиента, по сути, работает над постоянным включением в него новых стволовых клеток крови.
Боклаге утверждает, что многие «мозаичные» клеточные линии человека «при правильном тестировании окажутся химерными». [28]
Напротив, человек, у которого каждая клетка содержит генетический материал от двух организмов разных пород, разновидностей, видов или родов, называется гибридом человека и животного . [29]
В то время как немецкий дерматолог Альфред Блашко описал линии Блашко в 1901 году, генетической науке потребовалось вплоть до 1930-х годов, чтобы подобрать словарь для этого явления. Термин «генетическая химера» используется, по крайней мере, со статьи Бельговского 1944 года. [30] Слово «химера» происходит от греческого мифологического существа Химеры .
Это состояние либо врожденное, либо синтетическое, приобретенное, например, в результате введения аллогенных клеток крови во время трансплантации или переливания . [ нужна цитата ]
У неидентичных близнецов врожденный химеризм возникает за счет анастомозов кровеносных сосудов . Вероятность того, что потомство окажется химерой, увеличивается, если оно создано путем экстракорпорального оплодотворения . [12] Химеры часто могут размножаться, но плодовитость и тип потомства зависят от того, какая клеточная линия дала начало яичникам или семенникам; Различная степень интерсексуальных различий может возникнуть, если один набор клеток генетически женский, а другой генетически мужской. [ нужна цитата ]
22 января 2019 года Национальное общество консультантов по генетике опубликовало статью: « Объяснение химеризма: как один человек может неосознанно иметь два набора ДНК» , в которой говорится: «...Тетрагаметный химеризм, при котором беременность двойней развивается в одного ребенка, является в настоящее время считается одной из более редких форм. Однако мы знаем, что от 20 до 30% одноплодных беременностей изначально были двойней или многоплодной беременностью. Благодаря этой статистике вполне возможно, что тетрагаметный химеризм встречается чаще, чем предполагают текущие данные. ". [31]
Большинство человеческих химер проживут жизнь, даже не осознавая, что они химеры. Разница в фенотипах может быть незначительной ( например , большой палец автостопщика и прямой большой палец, глаза немного разного цвета, разный рост волос на противоположных сторонах тела и т. д.) или совершенно необнаружимой. Химеры также могут иметь в определенном спектре ультрафиолетового света характерные отметины на спине, напоминающие стрелки, направленные вниз от плеч вниз к пояснице; это одно из проявлений неравномерности пигмента, называемое линиями Блашко . [32]
Другой случай произошел с Карен Киган, которую также подозревали (первоначально) в том, что она не является биологической матерью ее детей, после того как тесты ДНК ее взрослых сыновей на необходимую ей трансплантацию почки, казалось, показали, что она не была их матерью. [18] [33]
Широко используются различия между секториальными, мериклинальными и периклинальными химерами растений . [34] [35]
Их получают путем прививки генетически разных родителей, разных сортов или разных видов (которые могут принадлежать к разным родам). После прививки ткани могут быть частично слиты вместе, образуя единый растущий организм, сохраняющий оба типа тканей в одном побеге. [36] Подобно тому, как составляющие виды, вероятно, различаются по широкому спектру характеристик, поведение их периклинальных химер, вероятно, будет весьма изменчивым. [37] Первой такой известной химерой была, вероятно, Bizzarria , которая представляет собой смесь флорентийского цитрона и кислого апельсина . Хорошо известными примерами прививки-химеры являются Laburnocytisus 'Adamii' , вызванная слиянием Laburnum и метлы , а также «семейные» деревья, где на одно и то же дерево прививают несколько сортов яблони или груши. Многие фруктовые деревья выращивают путем прививки тела саженца на подвой . [38]
Это химеры, слои которых различаются по составу хромосом . Иногда химеры возникают в результате потери или приобретения отдельных хромосом или фрагментов хромосом из-за неправильного деления . [39] Чаще всего цитохимеры имеют простой набор нормального хромосомного набора в измененном слое. Существуют различные эффекты на размер клеток и характеристики роста.
Эти химеры возникают в результате спонтанной или индуцированной мутации ядерного гена на доминантный или рецессивный аллель. Как правило, одновременно поражается один признак на листе, цветке, плоде или других частях. [ нужна цитата ]
Эти химеры возникают в результате спонтанной или индуцированной мутации пластидного гена с последующим разделением двух типов пластид во время вегетативного роста. Альтернативно, после самоопыления или термодинамики нуклеиновых кислот пластиды могут отделиться из смешанной яйцеклетки или смешанной зиготы соответственно. Этот тип химеры распознается на момент возникновения по характерному рисунку листьев. После завершения сортировки периклинальные химеры отличаются от похожих по внешнему виду ядерных химер, дифференцированных по генам, своим неменделевским наследованием . К такому типу относится большинство пестролистных химер. [ нужна цитата ]
Все химеры пластидных генов и некоторые химеры, дифференцирующие ядерные гены, влияют на цвет плазмид внутри листьев, и они группируются вместе как химеры хлорофилла или, предпочтительно, как пестрые химеры листьев. Для большинства разновидностей мутация заключается в потере хлоропластов в мутировавшей ткани, в результате чего часть ткани растения не имеет зеленого пигмента и фотосинтетической способности . Эта мутировавшая ткань не может выжить сама по себе, но ее жизнь сохраняется благодаря партнерству с нормальной фотосинтетической тканью. Иногда встречаются химеры, слои которых различаются как ядерными, так и пластидными генами. [ нужна цитата ]
Существует несколько причин, объясняющих возникновение растительных химер на стадии восстановления растений:
(1) Процесс органогенеза побега начинается с многоклеточного происхождения. [40]
(2) Эндогенная толерантность приводит к неэффективности слабых селективных агентов.
(3) Механизм самозащиты (перекрестная защита). Трансформированные клетки служат охранниками, защищающими нетрансформированные. [41]
(4) Наблюдаемой характеристикой трансгенных клеток может быть временная экспрессия маркерного гена. Или это может быть связано с наличием клеток агробактерий. [ нужна цитата ]
Нетрансформированные клетки должны легко обнаруживаться и удаляться, чтобы избежать возникновения химер. Это связано с тем, что важно поддерживать стабильную способность трансгенных растений в разных поколениях. Репортерные гены, такие как GUS и зеленый флуоресцентный белок [42] (GFP), используются в сочетании с селективными маркерами растений (гербицидами, антителами и т. д.). Однако экспрессия GUS зависит от стадии развития растения, и на GFP может влиять автофлуоресценция зеленой ткани. . Количественная ПЦР может быть альтернативным методом обнаружения химер. [43]
В 2012 году первый пример встречающегося в природе гибридного вируса РНК-ДНК был неожиданно обнаружен во время метагеномного исследования экстремальной кислой среды озера Бойлинг-Спрингс, которое находится в вулканическом национальном парке Лассен , Калифорния. [44] [45] Вирус получил название BSL-RDHV (гибридный вирус РНК-ДНК озера Бойлинг-Спрингс). [46] Его геном связан с ДНК- цирковирусом , который обычно заражает птиц и свиней, и РНК- томбусвирусом , который заражает растения. Исследование удивило ученых, поскольку ДНК- и РНК-вирусы различаются, а способ образования химеры не был понятен. [44] [47]
Были обнаружены и другие вирусные химеры, и эта группа известна как вирусы CHIV («химерные вирусы»). [48]
Первыми известными химерами приматов являются близнецы макаки-резусы Року и Хекс, каждый из которых имеет шесть геномов. Они были созданы путем смешивания клеток тотипотентных четырехклеточных морул; хотя клетки никогда не сливались, они работали вместе, образуя органы. Было обнаружено, что один из этих приматов, Року, был сексуальной химерой; поскольку четыре процента клеток крови Року содержали две Х-хромосомы. [20]
Важная веха в экспериментах с химерами произошла в 1984 году, когда химерная овца -коза была получена путем объединения эмбрионов козы и овцы и дожила до взрослой жизни. [49]
Чтобы изучить биологию развития птичьего эмбриона, в 1987 году исследователи создали искусственные химеры перепела и цыпленка. С помощью трансплантации и абляции на стадии куриного эмбриона нервная трубка и клетки нервного гребня цыпленка были удалены и заменены теми же самыми клетками. части от перепела. [50] После вылупления перепелиные перья были заметно заметны вокруг области крыльев, тогда как остальная часть тела цыпленка состояла из собственных куриных клеток.
В августе 2003 года исследователи из Второго Шанхайского медицинского университета в Китае сообщили, что им удалось успешно слить клетки кожи человека и яйцеклетки кролика , чтобы создать первые химерные человеческие эмбрионы. Эмбрионам давали возможность развиваться в течение нескольких дней в лабораторных условиях, а затем уничтожали, чтобы собрать полученные стволовые клетки . [51] В 2007 году ученые из Медицинской школы Университета Невады создали овцу, кровь которой содержала 15% клеток человека и 85% клеток овцы. [ нужна цитата ]
В 2023 году в исследовании сообщалось о первой химерной обезьяне с использованием линий эмбриональных стволовых клеток. Это было единственное живорождение из 12 беременностей, произошедших в результате имплантации 40 эмбрионов макаки -крабоеда , в среднем 67% и максимум 92% клеток. в 26 протестированных тканях были потомками донорских стволовых клеток против 0,1–4,5% в предыдущих экспериментах на химерных обезьянах. [52] [53] [54]
Химерные мыши являются важными животными в биологических исследованиях, поскольку они позволяют исследовать множество биологических вопросов у животного, имеющего два различных генетических пула. К ним относятся понимание таких проблем, как тканеспецифичные требования гена, клеточное происхождение и клеточный потенциал.
Общие методы создания химерных мышей можно резюмировать либо путем инъекции, либо путем агрегации эмбриональных клеток различного происхождения. Первая химерная мышь была создана Беатрис Минц в 1960-х годах путем агрегации эмбрионов на восьмиклеточной стадии. [55] С другой стороны, инъекция была впервые изобретена Ричардом Гарднером и Ральфом Бринстером, которые вводили клетки в бластоцисты для создания химерных мышей с зародышевыми линиями, полностью полученными из инъецированных эмбриональных стволовых клеток (ES-клеток). [56] Химеры могут быть получены из эмбрионов мыши, которые еще не имплантированы в матку, а также из имплантированных эмбрионов. ES-клетки из внутренней клеточной массы имплантированной бластоцисты могут вносить вклад во все клеточные линии мыши, включая зародышевую линию. ES-клетки являются полезным инструментом в химерах, поскольку гены в них могут мутировать посредством гомологичной рекомбинации , что позволяет нацеливаться на гены . С тех пор как это открытие произошло в 1988 году, ES-клетки стали ключевым инструментом в создании специфических химерных мышей. [57]
Способность создавать мышиные химеры возникла благодаря пониманию раннего развития мышей. Между этапами оплодотворения яйцеклетки и имплантацией бластоцисты в матку разные части эмбриона мыши сохраняют способность давать начало различным клеточным линиям. Как только эмбрион достигает стадии бластоцисты, он состоит из нескольких частей, в основном трофэктодермы , внутренней клеточной массы и примитивной энтодермы . Каждая из этих частей бластоцисты дает начало различным частям зародыша; внутренняя клеточная масса дает начало собственно эмбриону, тогда как трофэктодерма и примитивная энтодерма дают начало дополнительным эмбриональным структурам, которые поддерживают рост эмбриона. [58] Эмбрионы на стадии от двух до восьми клеток способны создавать химеры, поскольку на этих стадиях развития клетки эмбрионов еще не готовы дать начало какой-либо конкретной клеточной линии и могут дать начало внутренней клеточная масса или трофэктодерма. В случае, когда для создания химеры используются два диплоидных эмбриона на восьмиклеточной стадии, химеризм позже может быть обнаружен в эпибласте , примитивной энтодерме и трофэктодерме бластоцисты мыши . [59] [60]
Можно препарировать эмбрион на других стадиях, чтобы соответственно избирательно дать начало одной линии клеток эмбриона, а не другой. Например, подмножества бластомеров могут быть использованы для создания химер с определенной клеточной линией от одного эмбриона. Например, внутреннюю клеточную массу диплоидной бластоцисты можно использовать для создания химеры с другой бластоцистой восьмиклеточного диплоидного эмбриона; клетки, взятые из внутренней клеточной массы, дадут начало примитивной энтодерме и эпибласту у химеры мыши. [61] На основе этих знаний был разработан вклад ES-клеток в химеры. ES-клетки можно использовать в сочетании с эмбрионами на восьми- и двухклеточных стадиях для создания химер и исключительно для формирования собственно эмбриона. Эмбрионы, которые будут использоваться в химерах, могут быть дополнительно генетически изменены, чтобы внести вклад только в одну часть химеры. Примером может служить химера, построенная из ES-клеток и тетраплоидных эмбрионов, искусственно созданных путем электрослияния двух двухклеточных диплоидных эмбрионов. У химеры тетраплоидный зародыш дает начало исключительно трофэктодерме и примитивной энтодерме. [62] [63]
Существует множество комбинаций, которые могут дать начало успешной химереной мыши, и – в зависимости от цели эксперимента – можно выбрать подходящую комбинацию клеток и эмбрионов; они обычно, но не ограничиваются ими, включают диплоидный эмбрион и ES-клетки, диплоидный эмбрион и диплоидный эмбрион, ES-клетку и тетраплоидный эмбрион, диплоидный эмбрион и тетраплоидный эмбрион, ES-клетки и ES-клетки. Комбинация эмбриональных стволовых клеток и диплоидного эмбриона является распространенным методом создания химерных мышей, поскольку нацеливание на гены можно осуществлять в эмбриональных стволовых клетках. Эти виды химер могут быть созданы либо путем агрегации стволовых клеток и диплоидного эмбриона, либо путем инъекции стволовых клеток в диплоидный эмбрион. Если эмбриональные стволовые клетки должны использоваться для нацеливания на ген с целью создания химеры, обычно применяется следующая процедура: конструкция для гомологичной рекомбинации целевого гена вводится в культивируемые эмбриональные стволовые клетки мыши от мыши-донора посредством электропорации; клетки, положительные по рекомбинации, будут обладать устойчивостью к антибиотикам, обеспечиваемой инсерционной кассетой, используемой при нацеливании на ген; и иметь возможность быть положительно выбранным. [64] [65] ES-клетки с правильным целевым геном затем инъецируют в диплоидную бластоцисту мыши-хозяина. Затем эти инъецированные бластоцисты имплантируют псевдобеременной самке суррогатной мыши, которая вынашивает эмбрионы и рождает мышь, зародышевая линия которой получена из ES клеток мыши-донора. [66] Эту же процедуру можно осуществить путем агрегации ES-клеток и диплоидных эмбрионов, диплоидные эмбрионы культивируют в чашках для агрегации в лунках, куда могут поместиться отдельные эмбрионы, в эти лунки добавляют ES-клетки, агрегаты культивируют до тех пор, пока не образуется один эмбрион. и достиг стадии бластоцисты, а затем может быть передан суррогатной мыши. [67]
В США и Западной Европе действуют строгие этические кодексы и правила, которые прямо запрещают определенные виды экспериментов с использованием человеческих клеток, хотя в нормативной базе существует огромная разница. [68] В результате создания человеческих химер возникает вопрос: где общество теперь проводит линию человечества? Этот вопрос ставит серьезные юридические и моральные проблемы, а также вызывает противоречия. Шимпанзе, например, не имеют никакого юридического статуса, и их подавляют , если они представляют угрозу для человека. Если шимпанзе генетически изменить, чтобы он был более похож на человека, это может стереть этическую грань между животным и человеком. Юридические дебаты станут следующим шагом в процессе определения того, следует ли предоставить определенным химерам законные права. [69] Наряду с вопросами, касающимися прав химер, люди выражают обеспокоенность по поводу того, уменьшит ли создание человеческих химер «достоинство» человеческого бытия. [70]
Другой формой химеры является мозаика, представляющая собой сложную особь, полученную из одной оплодотворенной яйцеклетки.
Химера — это организм, клетки которого происходят из двух или более зигот, в отличие от мозаики, в которой разные клеточные линии происходят из одной зиготы.
В современном эмбриологическом (который также является классическим) смысле «химера» — это организм, клетки которого произошли от двух или более различных линий зигот, и именно этот смысл здесь призван передать термин «генетическая химера».
«Генетическая мозаика» менее подходит, поскольку мозаика формируется из клеток одной зиготной линии.
Мозаицизм возникает в результате внутренних генетических вариаций, вызванных, среди прочего, соматическими мутациями, тогда как химеризм возникает в результате аллогенного слияния или прививки.
По существу, химеризм встречается гораздо реже и включает в себя гораздо более серьезные генетические изменения, чем мозаицизм.