Криоконсервация или криоконсервация — это процесс, при котором биологический материал — клетки , ткани или органы — замораживается для сохранения материала в течение длительного периода времени. [1] При низких температурах (обычно −80 °C (−112 °F) или −196 °C (−321 °F) с использованием жидкого азота ) любой клеточный метаболизм , который может вызвать повреждение рассматриваемого биологического материала, эффективно останавливается. Криоконсервация — это эффективный способ транспортировки биологических образцов на большие расстояния, хранения образцов в течение длительных периодов времени и создания банка образцов для пользователей. Молекулы, называемые криопротекторами (CPA), добавляются для уменьшения осмотического шока и физических нагрузок, которым клетки подвергаются в процессе замораживания. [2] Некоторые криопротекторы, используемые в исследованиях, вдохновлены растениями и животными в природе, которые обладают уникальной устойчивостью к холоду, чтобы выживать в суровые зимы, включая: деревья, [3] [4] древесные лягушки, [5] и тихоходки. [6] Первым человеческим телом, замороженным с надеждой на будущее воскрешение, был труп Джеймса Бедфорда , умерший через несколько часов после своей смерти от рака в 1967 году. [15] Тело Бедфорда — единственное крионированное тело, замороженное до 1974 года, которое до сих пор заморожено.
Тихоходки , микроскопические многоклеточные организмы, могут пережить замерзание , заменив большую часть своей внутренней воды сахаром, называемым трегалозой , предотвращая ее кристаллизацию, которая в противном случае повреждает клеточные мембраны . Смеси растворенных веществ могут достигать аналогичных эффектов. Некоторые растворенные вещества, включая соли, имеют тот недостаток, что они могут быть токсичными при интенсивных концентрациях. В дополнение к водяному медведю, древесные лягушки могут переносить замерзание своей крови и других тканей. Мочевина накапливается в тканях при подготовке к зимовке, а гликоген печени в больших количествах преобразуется в глюкозу в ответ на внутреннее образование льда. И мочевина, и глюкоза действуют как « криопротекторы », ограничивая количество образующегося льда и уменьшая осмотическое сжатие клеток. Лягушки могут пережить множество случаев замораживания/оттаивания зимой, если замерзает не более 65% от общего количества воды в организме. Исследования, изучающие явление «замерзания лягушек», были выполнены в основном канадским исследователем, доктором Кеннетом Б. Стори . [ необходима цитата ]
Морозостойкость , при которой организмы переживают зиму, замерзая и прекращая жизненные функции, известна у нескольких позвоночных: пяти видов лягушек ( Rana sylvatica , Pseudacris triseriata , Hyla crucifer , Hyla versicolor , Hyla chrysoscelis ), одного вида саламандр ( Salamandrella keyserlingii ), одного вида змей ( Thamnophis sirtalis ) и трех видов черепах ( Chrysemys picta , Terrapene carolina , Terrapene ornata ). [7] Щелкающие черепахи Chelydra serpentina и настенные ящерицы Podarcis muralis также переживают номинальное замерзание, но не было установлено, что это адаптивно для зимовки. В случае Rana sylvatica одним из криоконсервантов является обычная глюкоза, концентрация которой увеличивается примерно на 19 ммоль/л при медленном охлаждении лягушек. [7]
Одним из первых теоретиков криоконсервации был Джеймс Лавлок . В 1953 году он предположил, что повреждение эритроцитов во время замораживания было вызвано осмотическим стрессом, [8] и что увеличение концентрации соли в обезвоживающейся клетке может повредить ее. [9] [10] В середине 1950-х годов он экспериментировал с криоконсервацией грызунов, определив, что хомяков можно заморозить, когда 60% воды в мозге кристаллизуется в лед, без каких-либо неблагоприятных последствий; было показано, что другие органы подвержены повреждениям. [11]
Криоконсервация применялась к человеческим материалам, начиная с 1954 года, когда было зафиксировано три беременности в результате оплодотворения ранее замороженной спермой. [12] Сперма птиц была криоконсервирована в 1957 году группой ученых в Великобритании под руководством Кристофера Полджа . [13] В 1963 году Питер Мазур из Национальной лаборатории Оук-Ридж в США продемонстрировал, что летального внутриклеточного замораживания можно избежать, если охлаждение будет достаточно медленным, чтобы позволить достаточному количеству воды покинуть клетку во время постепенного замораживания внеклеточной жидкости. Эта скорость различается для клеток разного размера и водопроницаемости: типичная скорость охлаждения около 1 °C/минута подходит для многих клеток млекопитающих после обработки криопротекторами, такими как глицерин или диметилсульфоксид, но эта скорость не является универсальным оптимумом. [14]
22 апреля 1966 года был заморожен первый человеческий труп — он был забальзамирован в течение двух месяцев — путем помещения его в жидкий азот и хранения при температуре чуть выше точки замерзания. Труп принадлежал пожилой женщине из Лос-Анджелеса, имя которой неизвестно, и вскоре был разморожен и похоронен родственниками. Первым человеческим трупом, замороженным с надеждой на будущее воскрешение, был труп Джеймса Бедфорда , через несколько часов после его смерти от рака в 1967 году. [15] Труп Бедфорда — единственный крионированный труп, замороженный до 1974 года, который до сих пор заморожен. [16]
Явления, которые могут вызвать повреждение клеток во время криоконсервации, в основном происходят на этапе замораживания и включают эффекты раствора, образование внеклеточного льда, дегидратацию и образование внутриклеточного льда. Многие из этих эффектов могут быть уменьшены криопротекторами. После того, как консервированный материал заморожен, он относительно защищен от дальнейшего повреждения. [17]
Основными методами предотвращения повреждений при криоконсервации являются хорошо зарекомендовавшее себя сочетание контролируемой скорости и медленного замораживания , а также новый процесс мгновенной заморозки, известный как витрификация .
Медленное замораживание с контролируемой скоростью , также известное как медленное программируемое замораживание (SPF) [18] , представляет собой метод, при котором клетки охлаждаются примерно до -196 °C в течение нескольких часов.
Медленное программируемое замораживание было разработано в начале 1970-х годов и в конечном итоге привело к рождению первого человеческого замороженного эмбриона в 1984 году. С тех пор машины, которые замораживают биологические образцы с использованием программируемых последовательностей или контролируемых скоростей, использовались для биологии человека, животных и клеток — «замораживание» образца для лучшего его сохранения для возможного оттаивания, прежде чем он будет заморожен или криоконсервирован в жидком азоте. Такие машины используются для замораживания ооцитов, кожи, продуктов крови, эмбрионов, спермы, стволовых клеток и общего сохранения тканей в больницах, ветеринарных клиниках и исследовательских лабораториях по всему миру. Например, количество живорождений от замороженных эмбрионов «медленно замороженных» оценивается примерно в 300 000–400 000 или 20% от предполагаемых 3 миллионов рождений с помощью экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). [19]
Летального внутриклеточного замораживания можно избежать, если охлаждение будет достаточно медленным, чтобы позволить достаточному количеству воды покинуть клетку во время постепенного замораживания внеклеточной жидкости. Чтобы минимизировать рост внеклеточных кристаллов льда и рекристаллизацию, [20] биоматериалы, такие как альгинаты , поливиниловый спирт или хитозан, могут использоваться для предотвращения роста кристаллов льда вместе с традиционными низкомолекулярными криопротекторами. [21] Эта скорость различается для клеток разного размера и водопроницаемости : типичная скорость охлаждения около 1 °C/минуту подходит для многих клеток млекопитающих после обработки криопротекторами, такими как глицерин или диметилсульфоксид (ДМСО), но эта скорость не является универсальным оптимумом. Скорость 1 °C/минуту может быть достигнута с помощью таких устройств, как морозильник с контролируемой скоростью или настольный переносной контейнер для замораживания. [22]
Несколько независимых исследований предоставили доказательства того, что замороженные эмбрионы, хранящиеся с использованием методов медленной заморозки, могут быть в некотором смысле «лучше», чем свежие в ЭКО. Исследования показывают, что использование замороженных эмбрионов и яйцеклеток вместо свежих эмбрионов и яйцеклеток снижает риск мертворождения и преждевременных родов, хотя точные причины все еще изучаются.
Витрификация — это процесс мгновенной заморозки (сверхбыстрого охлаждения), который помогает предотвратить образование кристаллов льда и предотвратить повреждения при криоконсервации.
Исследователи Грег Фэйи и Уильям Ф. Ралл помогли внедрить витрификацию в репродуктивную криоконсервацию в середине 1980-х годов. [23] По состоянию на 2000 год исследователи утверждают, что витрификация обеспечивает преимущества криоконсервации без повреждений из-за образования кристаллов льда. [24] Ситуация усложнилась с развитием тканевой инженерии, поскольку и клетки, и биоматериалы должны оставаться свободными ото льда, чтобы сохранить высокую жизнеспособность и функции клеток, целостность конструкций и структуру биоматериалов. Витрификация конструкций тканевой инженерии была впервые описана Лилией Кулешовой, [25] которая также была первым ученым, достигшим витрификации ооцитов , что привело к живорождению в 1999 году. [26] Для клинической криоконсервации витрификация обычно требует добавления криопротекторов перед охлаждением. Криопротекторы — это макромолекулы, добавляемые в среду замораживания для защиты клеток от пагубного воздействия внутриклеточного образования кристаллов льда или от воздействия раствора в процессе замораживания и оттаивания. Они обеспечивают более высокую степень выживаемости клеток во время замораживания, снижают точку замерзания, защищают клеточную мембрану от повреждений, связанных с замораживанием. Криопротекторы обладают высокой растворимостью, низкой токсичностью при высоких концентрациях, низкой молекулярной массой и способностью взаимодействовать с водой посредством водородных связей.
Вместо кристаллизации сиропообразный раствор становится аморфным льдом — он стеклообразуется . Вместо фазового перехода из жидкого состояния в твердое путем кристаллизации, аморфное состояние похоже на «твердую жидкость», и превращение происходит в небольшом температурном диапазоне, описываемом как температура « стеклования ».
Витрификация воды происходит при быстром охлаждении и может быть достигнута без криопротекторов путем чрезвычайно быстрого снижения температуры (мегакельвины в секунду). Скорость, необходимая для достижения стеклообразного состояния в чистой воде, считалась невозможной до 2005 года. [27]
Обычно для стеклования требуются два условия: увеличение вязкости и снижение температуры замерзания. Многие растворенные вещества делают и то, и другое, но более крупные молекулы, как правило, оказывают большее влияние, особенно на вязкость. Быстрое охлаждение также способствует стеклованию.
Для устоявшихся методов криоконсервации растворенное вещество должно проникать через клеточную мембрану, чтобы достичь повышенной вязкости и снизить температуру замерзания внутри клетки. Сахара нелегко проникают через мембрану. Те растворенные вещества, которые это делают, такие как ДМСО, распространенный криопротектор, часто токсичны в высокой концентрации. Один из сложных компромиссов витрифицирующей криоконсервации касается ограничения ущерба, наносимого самим криопротектором из-за токсичности криопротектора. Смеси криопротекторов и использование ледяных блокаторов позволили компании 21st Century Medicine витрифицировать почку кролика до −135 °C с помощью их запатентованной витрифицирующей смеси. После повторного нагревания почка была успешно пересажена кролику с полной функциональностью и жизнеспособностью, способной поддерживать кролика неограниченно долго как единственную функционирующую почку. [28] В 2000 году FM-2030 стал первым человеком, успешно витрифицированным посмертно. [29]
Кровь можно заменить инертными благородными газами и/или метаболически важными газами, такими как кислород , чтобы органы могли быстрее охлаждаться и требовалось меньше антифриза. Поскольку области ткани разделены газом, небольшие расширения не накапливаются, тем самым защищая от разрушения. [30] Небольшая компания Arigos Biomedical «уже извлекла свиные сердца из 120 градусов ниже нуля», [31] хотя определение «извлечено» неясно. Давление 60 атм может помочь увеличить скорость теплообмена. [32] Газообразная кислородная перфузия/перфузия может улучшить сохранение органов по сравнению со статическим холодовым хранением или гипотермической машинной перфузией, поскольку более низкая вязкость газов может помочь охватить больше областей сохраняемых органов и доставить больше кислорода на грамм ткани. [33]
Как правило, криоконсервация более удобна для тонких образцов и взвешенных клеток, поскольку их можно охладить быстрее, и поэтому они требуют меньших доз токсичных криопротекторов. Поэтому криоконсервация печени и сердца человека для хранения и трансплантации все еще непрактична.
Тем не менее, подходящие комбинации криопротекторов и режимов охлаждения и промывания во время нагревания часто позволяют успешно криоконсервировать биологические материалы, в частности, клеточные суспензии или тонкие образцы тканей. Примеры включают:
Криоконсервация эмбрионов применяется для их хранения, например, когда в результате ЭКО получено больше эмбрионов, чем необходимо в данный момент.
Одна беременность и в результате здоровые роды были зарегистрированы у эмбриона, хранившегося в течение 27 лет, после успешной беременности эмбриона из той же партии тремя годами ранее. [39] Во многих исследованиях оценивались дети, рожденные от замороженных эмбрионов, или «замороженных». Результат был единогласно положительным, без увеличения врожденных дефектов или аномалий развития. [40] Исследование более 11 000 криоконсервированных человеческих эмбрионов не показало существенного влияния времени хранения на выживаемость после размораживания для циклов ЭКО или донорства ооцитов, или для эмбрионов, замороженных на стадии пронуклеуса или дробления. [41] Кроме того, продолжительность хранения не оказала существенного влияния на клиническую беременность, выкидыш, имплантацию или показатель живорождения, будь то циклы ЭКО или донорства ооцитов. [41] Скорее, возраст ооцитов, доля выживаемости и количество перенесенных эмбрионов являются предикторами исхода беременности. [41]
Криоконсервация ткани яичника представляет интерес для женщин, которые хотят сохранить свою репродуктивную функцию сверх естественного предела или чей репродуктивный потенциал находится под угрозой из-за терапии рака, [42] например, при гематологических злокачественных новообразованиях или раке молочной железы. [43] Процедура заключается в том, чтобы взять часть яичника и выполнить медленное замораживание перед хранением в жидком азоте во время проведения терапии. Затем ткань можно разморозить и имплантировать рядом с фаллопиевой трубой, либо ортотопически (в естественном месте), либо гетеротопически (на брюшной стенке), [43] где она начинает производить новые яйцеклетки, что позволяет осуществить нормальное зачатие. [44] Ткань яичника также можно пересадить мышам с ослабленным иммунитетом ( мышам SCID ), чтобы избежать отторжения трансплантата , и ткань можно будет собрать позже, когда разовьются зрелые фолликулы. [45]
Криоконсервация ооцитов человека — это новая технология, при которой яйцеклетки женщины ( ооциты ) извлекаются, замораживаются и хранятся. Позже, когда она будет готова забеременеть, яйцеклетки можно разморозить, оплодотворить и перенести в матку в качестве эмбрионов . С 1999 года, когда Кулешова и ее коллеги сообщили о рождении первого ребенка из эмбриона, полученного из витрифицированных-нагретых яйцеклеток женщины, [25] эта концепция была признана и широко распространена. Этот прорыв в достижении витрификации ооцитов женщины стал важным шагом вперед в наших знаниях и практике процесса ЭКО, поскольку клиническая частота беременности в четыре раза выше после витрификации ооцитов, чем после медленной заморозки. [46] Витрификация ооцитов имеет жизненно важное значение для сохранения фертильности у молодых онкологических пациентов и для лиц, проходящих ЭКО, которые по религиозным или этическим причинам возражают против практики замораживания эмбрионов.
Сперму можно успешно использовать практически бесконечно после криоконсервации. Самый длительный зарегистрированный срок успешного хранения составляет 22 года. [47] Ее можно использовать для донорства спермы , когда реципиент хочет пройти лечение в другое время или в другом месте, или как средство сохранения фертильности у мужчин, проходящих вазэктомию или процедуры, которые могут поставить под угрозу их фертильность, такие как химиотерапия , лучевая терапия или хирургия.
Криоконсервация незрелой ткани яичек — это развивающийся метод, позволяющий обеспечить воспроизводство для мальчиков, которым необходима гонадотоксическая терапия. Данные по животным являются многообещающими, поскольку здоровое потомство было получено после трансплантации замороженных суспензий клеток яичек или кусочков тканей. Однако ни один из вариантов восстановления фертильности из замороженной ткани, то есть трансплантация суспензии клеток, пересадка тканей и созревание in vitro, пока не доказали свою эффективность и безопасность для людей. [48]
Криоконсервация целых растений мха , особенно Physcomitrella patens , была разработана Ральфом Рески и его коллегами [49] и выполняется в Международном центре запасов мха . Этот биобанк собирает, сохраняет и распространяет мутанты мха и экотипы мха . [50]
МСК, перелитые немедленно в течение нескольких часов после размораживания, могут демонстрировать сниженную функцию или демонстрировать сниженную эффективность в лечении заболеваний по сравнению с МСК, которые находятся в логарифмической фазе роста клеток (свежие). В результате криоконсервированные МСК должны быть возвращены обратно в логарифмическую фазу роста клеток в культуре in vitro, прежде чем они будут введены для клинических испытаний или экспериментальной терапии. Повторное культивирование МСК поможет восстановиться после шока, который клетки получают во время замораживания и размораживания. Различные клинические испытания МСК, в которых использовались криоконсервированные продукты сразу после размораживания, потерпели неудачу по сравнению с теми клиническими испытаниями, в которых использовались свежие МСК. [51]
Криоконсервация растений становится жизненно важной из-за ее ценности для биоразнообразия. Семена часто рассматриваются как важная система доставки генетической информации. Криоконсервация рекальцитрантных семян является самой сложной из-за непереносимости низких температур и низкого содержания воды. [52] Однако раствор для витрификации растений может решить эту проблему и помочь криоконсервировать рекальцитрантные семена (Nymphaea caerulea). [53]
Бактерии и грибки можно хранить в холодильнике кратковременно (от месяцев до года, в зависимости от времени), однако деление клеток и метаболизм не полностью останавливаются, и поэтому это не оптимальный вариант для долгосрочного хранения (годы) или для сохранения культур генетически или фенотипически, поскольку деление клеток может привести к мутациям, а субкультивирование может вызвать фенотипические изменения. Предпочтительным вариантом, зависящим от вида, является криоконсервация. Нематоды — единственные многоклеточные эукариоты, которые, как было показано, выживают при криоконсервации. [54] [55]
Грибы, особенно зигомицеты, аскомицеты и высшие базидиомицеты, независимо от споруляции, могут храниться в жидком азоте или глубоко замороженными. Криоконсервация является отличительным методом для грибов, которые не спорулируют (в противном случае другие методы консервации спор могут быть использованы с меньшими затратами и простотой), спорулируют, но имеют нежные споры (крупные или чувствительные к замораживанию), являются патогенными (опасны для сохранения метаболически активных грибов) или должны использоваться для генетических запасов (в идеале иметь идентичный состав с исходным депозитом). Как и для многих других организмов, используются криопротекторы, такие как ДМСО или глицерин (например, нитчатые грибы 10% глицерина или дрожжи 20% глицерина). Различия в выборе криопротекторов зависят от вида (или класса), но, как правило, для грибков наиболее эффективны проникающие криопротекторы, такие как ДМСО, глицерин или полиэтиленгликоль (другие непроникающие включают сахара маннит, сорбит, декстран и т. д.). Повторение замораживания-оттаивания не рекомендуется, так как это может снизить жизнеспособность. Рекомендуются резервные морозильники или места хранения с жидким азотом. Ниже приведены несколько протоколов замораживания (в каждом из них используются полипропиленовые криопробирки с завинчивающейся крышкой): [56]
Многие распространенные культивируемые лабораторные штаммы подвергаются глубокой заморозке для сохранения генетически и фенотипически стабильных долгосрочных запасов. [57] Субкультивирование и длительное охлаждение образцов могут привести к потере плазмиды(й) или мутаций. Обычные конечные проценты глицерина составляют 15, 20 и 25. Из свежей культуральной чашки выбирается одна интересующая колония и делается жидкая культура. Из жидкой культуры среда напрямую смешивается с равным количеством глицерина; колония должна быть проверена на наличие любых дефектов, таких как мутации. Все антибиотики должны быть вымыты из культуры перед длительным хранением. Методы различаются, но смешивание может быть выполнено осторожно путем переворачивания или быстро путем вортекса, а охлаждение может варьироваться либо путем помещения криопробирки непосредственно при температуре от −50 до −95 °C, шоковой заморозки в жидком азоте или постепенного охлаждения с последующим хранением при температуре −80 °C или ниже (жидкий азот или пары жидкого азота). Восстановление бактерий также может быть различным, а именно, если шарики хранятся внутри пробирки, то несколько шариков можно использовать для посева или замороженный материал можно соскоблить петлей, а затем посеять на пластину, однако, поскольку требуется лишь небольшое количество материала, всю пробирку никогда не следует полностью размораживать, и следует избегать повторного замораживания-оттаивания. 100% восстановление невозможно независимо от методологии. [58] [59] [60]
Микроскопические почвенные нематоды Panagrolaimus detritophagus и Plectus parvus — единственные эукариотические организмы, которые, как было доказано, сохраняют жизнеспособность после криоконсервации в течение многих лет (от 30 000 до 40 000 лет). В этом случае консервация была естественной, а не искусственной, из-за вечной мерзлоты . Они ожили при нагревании.
Было показано, что несколько видов животных, включая рыб, земноводных и рептилий, переносят замораживание. По крайней мере, четыре вида лягушек ( Pseudacris crucifer , Hyla versicolor , Pseudacris triseriata , Lithobates sylvaticus ) и несколько видов черепах ( Terrapene carolina , вылупившаяся Chrysemys picta ), ящериц и змей устойчивы к замораживанию и выработали адаптации для выживания при замораживании. Хотя некоторые лягушки впадают в спячку под землей или в воде, температура тела все равно падает до −5–−7 °C, заставляя их замерзать. Древесная лягушка ( Lithobates sylvaticus ) может выдерживать многократное замораживание, во время которого около 65% ее внеклеточной жидкости превращается в лед. [57]
Крионика, основанная на спекулятивной науке, вызывает споры в научных дебатах и может быть лучше понята как возникающий ритуал смерти в ходе социальной эволюции человеческой культуры и технологий. Вера в загробную жизнь или вторую жизнь, где феноменологическое тело претерпевает переход или воскрешение, повторяется в древней традиции, религии и научной фантастике. Однако все более социализированный язык криотехнологии в оздоровительных и велнес-процедурах реконтекстуализирует пробуждение не/мертвых в биосоциальной сфере, представляя смертность как нечто сродни болезни, которую можно контролировать или вылечить. Крионика ставит под сомнение границы суверенного «я» [61] и индивидуального тела, бросая вызов юридическим определениям личности. [62] Однако эти границы не универсальны, и идеи, которые ограничивают «я» в рамках дихотомии картезианского дуализма, определяются через западную философию и право. Чтобы понять отпечаток крионики на политическом организме [63] , полезно применить фукольдианское определение биовласти . Возможность доступа и использования форм криотехнологии (от криохранения пищи, крови или спермы) исторически связана с классом, богатством и властью. Она имеет решающее значение для плодовитости, здоровья и смерти, и в этом смысле крионика является механизмом в структуре власти « холодовой цепи » [61] с потенциалом производить, сохранять и/или ограничивать жизнь.
Криоконсервация требует значительных финансовых и медицинских ресурсов для своего потенциального успеха. Поэтому, предполагая, что те, кто может получить доступ к крионике, должны происходить из значительного богатства или власти. Эта современная форма биовласти интегрирована в общество как новый метод диктата власти над индивидуальным или феноменологическим телом при определении результатов жизни или смерти. Учитывая циклическую природу богатства и власти в обществе уже (систематически подрываемую расой, полом, классом и религией), вполне вероятно, что использование крионики в будущем будет иметь самоподдерживающееся влияние на эти структуры. Следовательно, существует дальнейший потенциал для усиления уже существующего дисбаланса власти, поскольку последствия с юридической, финансовой и социокультурной точки зрения будут способствовать поддержанию крионической практики, исключая большинство членов общества, чтобы принести пользу уже доминирующей группе. В конечном счете, крионика усиливает гегемоническое неравенство, уже существующее в обществе сегодня, в котором немногие получат выгоду, и ставит под сомнение этическую двусмысленность индивидуальной телесной автономии в стремлении к самосохранению или выживанию. [64] [65] [66] [67]
Криоконсервация уже давно является проблемой индивидуального тела против политического тела . Те, кто стремится продлить свою продолжительность жизни, несмотря на смерть, посредством консервации, страдают от хронических, неизлечимых и/или дегенеративных заболеваний, им приходится преодолевать многочисленные юридические препятствия, касающиеся утилизации тела, хранения человеческих тканей, прав несовершеннолетних и, в некоторых случаях, самоубийства с медицинской помощью [68] [69] В 1993 году Томас Дональдсон , страдающий от опухоли мозга, запросил медицинскую помощь при смерти. [70] Из-за опухоли ему было отказано, и его тело было криоконсервировано после того, как опухоль настолько разрушила окружающую мозговую ткань, что Дональдсон скончался. [70] Только 25 лет спустя, в 2018 году, первый человек, Норман Харди , был успешно криоконсервирован после того, как ему разрешили медицинскую помощь при смерти. [70] [71] В 2016 году четырнадцатилетняя девочка добилась законного права на криогенную заморозку своего тела, что стало знаковым случаем в Соединенном Королевстве. [72] В том же году Cryonics UK подтвердила, что их самому молодому члену было всего 7 лет. [73]
{{cite web}}
: CS1 maint: архивная копия как заголовок ( ссылка ){{cite book}}
: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка ){{cite book}}
: CS1 maint: отсутствует местоположение издателя ( ссылка )