Гематоксилин или гематоксилин ( / ˌ h iː m ə ˈ t ɒ k s ɪ l ɪ n / ), также называемый натуральным черным 1 или CI 75290 , представляет собой соединение , извлеченное из сердцевины бревна ( Haematoxylum Campechianum ) [1] [2 ] ] с химической формулой C
16ЧАС
14О
6. Этот природный краситель использовался в качестве гистологического красителя , в качестве чернил [3] [4] [5] [6] и в качестве красителя в текстильной и кожевенной промышленности. [7] [8] В качестве красителя гематоксилин называют пало де Кампече, [8] экстрактом бревен, [7] синего дерева [9] и черного дерева. [9] В гистологии за окрашиванием гематоксилином обычно следует контрастное окрашивание эозином . [1] [10] [11] В сочетании эта процедура окрашивания известна как окрашивание H&E и является одной из наиболее часто используемых комбинаций в гистологии . [1] [7] [12] [13] [14] Помимо использования при окраске H&E, гематоксилин также является компонентом окраски Папаниколау ( или окраски Папаниколау), которая широко используется при исследовании цитологических образцов. [1] [14]
Хотя краситель обычно называют гематоксилином, активным красителем является окисленная форма гематеина , которая образует ярко окрашенные комплексы с ионами некоторых металлов (обычно солями Fe(III) и Al(III)). [1] [7] [8] [15] [16] В чистом виде гематоксилин представляет собой бесцветное кристаллическое твердое вещество, [7] [17] хотя коммерческие образцы обычно имеют цвет от светлого до темно-коричневого в зависимости от уровня присутствующих примесей. . [2] [18]
Гематоксилин был синтезирован [19] [20] , хотя никогда в коммерчески жизнеспособных количествах. [14] [21] Исторически древесина экспортировалась, а гематоксилин добывался в Европе. В последнее время добыча осуществляется ближе к месту заготовки бревна. [18] Экстрагирование гематоксилина из бревен в промышленных масштабах осуществлялось во «французском процессе» путем кипячения древесной щепы или в «американском процессе» с паром и давлением. [9] [22] После извлечения краситель можно продавать в виде жидкого концентрата или сушить и продавать в кристаллической форме. [9] В современных методах производства в качестве растворителя используется вода, эфир или спирт , после чего экстракты могут быть дополнительно очищены до необходимого уровня чистоты. [18]
Коммерческий продукт может различаться от партии к партии и у разных производителей [18] как по уровню примесей, так и по соотношению гематоксилина и гематеина. [23] [2] [24] При гистологическом использовании эта изменчивость может влиять на взаимодействие красителей с образцами биологических тканей и поэтому вызывает беспокойство у гистологов и патологов . [23] [2] [18] Гематоксилин, как и другие биологические красители, может быть сертифицирован Комиссией по биологическим пятнам , что означает, что конкретная партия красителей работает в стандартном тесте, хотя это не определяет фактическую чистоту красителя. [23]
Окрашивание гематоксилином обычно сопровождается (или докрашивается) другим гистологическим красителем, эозином . [10] [11] [1] В сочетании эта процедура окрашивания известна как окрашивание H&E и является одной из наиболее часто используемых комбинаций в гистологии . [1] [12] [7] [14] Гематоксилин также является компонентом окраски Папаниколау (или окраски PAP), которая широко используется при исследовании цитологических образцов, особенно в тесте PAP , используемом для выявления рака шейки матки . [14] [1]
В основном используемый в качестве ядерного красителя (для окрашивания ядра клетки), гематоксилин также окрашивает шероховатую эндоплазматическую сеть , рибосомы , коллаген , миелин , эластические волокна и кислые муцины . [10] Гематоксилин сам по себе не является эффективным красителем, но при окислении до гематеина и в сочетании с протравой хроматин в ядрах клеток окрашивается от темно-синего до черного цвета. [1] [7] [25] [10] Цвет и специфичность пятен гематоксилина зависят от химической природы и количества используемой протравы, а также pH окрашивающего раствора, поэтому существуют различные составы гематоксилина. был разработан. [1] [10] [15]
Составы красителей гематоксилина можно широко классифицировать в зависимости от того, как гематоксилин окисляется (или созревает ), а также по выбору используемой протравы. [1] Составы красителей гематоксилина могут быть либо естественным образом окислены под воздействием воздуха и солнечного света, либо, что чаще всего, особенно в коммерческих растворах, [7] химически окислены с использованием йодата натрия . [1] [26] [11] Обычно окислителя добавляют ровно столько, чтобы превратить половину гематоксилина в гематеин, что позволяет остатку окислиться естественным путем во время использования. Это продлевает срок службы окрашивающего раствора, поскольку образуется больше гематеина, в то время как некоторое количество гематеина далее окисляется до оксигематеина. [13] [27] [11] Из солей металлов, используемых в качестве протрав, наиболее распространенным является алюминий , [11] другие протравы включают соли железа , вольфрама , молибдена и свинца . [1]
В зависимости от состава или техники окрашивания красители гематоксилином могут использоваться так называемым прогрессивным способом , при котором время, в течение которого ткань остается в контакте с красящим раствором, используется для контроля интенсивности окрашивания, или регрессивным способом . , при котором ткань чрезмерно окрашивается, а излишки пятна удаляются на втором этапе процедуры. [11] [25] [1] Удаление нежелательного окрашивания или дифференциация обычно включает раствор разбавленного этанола и соляной кислоты . [11] [1] [20]
В 1758 году Георг Кристиан Райхель использовал гемотоксилин без протравы для окрашивания тканей растений. [31] [12] [32] Джон Томас Кекетт в книге 1852 года [33] предлагает использовать «бревно» (гематоксилин) для окраски полупрозрачного материала для исследования под микроскопом . [32] [31] В 1863 году Вильгельм фон Вальдейер-Гарц применил гематоксилин на животных тканях без протравы (с ограниченным успехом), [34] и иногда считается первым, кто сделал это, [8] [12] [ 35] [34] , хотя это не является общепринятым. [35] [8] Франц Бёмер в 1865 году опубликовал формулу гематоксилина с использованием квасцов в качестве протравы, [34] [21] [12] [8] [35] [31] , а в 1891 году Пол Майер опубликовал формулу с использованием химического вещества. окислитель, превращающий гематоксилин в гематеин. [26] [31] [12] Первое использование гематоксилина с эозином в качестве контрастного красителя, который в настоящее время является наиболее часто используемой комбинацией красителей в гистологии, было впервые предложено А. Виссовским в 1876 году. [15] [31] К началу В 1900-х годах гематоксилин получил широкое распространение в качестве гистологического красителя. [12]
В период Первой мировой войны , конца 1920-х годов, Второй мировой войны , начала 1970-х годов (лето 1973 года [22] ) и в 2008 году наблюдался дефицит гематоксилина из-за перебоев в его извлечении из бревен. [18] Этот дефицит побудил к поиску альтернативных ядерных пятен. [22] [18] В качестве замены были рекомендованы несколько синтетических красителей, в частности, целестиновый синий (CI 51050), [18] галлоцианин [7] [11] (CI 51030), галлеин [18] (CI 45445) и эриохром цианин R. [18] [11] также называют хромоксанцианином R и солохромцианином (CI 43820). Все четыре содержат Fe(III) в качестве протравы . Альтернативой является алюминиевый комплекс окисленного бразилина , отличающийся от гематоксилина только одной гидроксильной группой. Замена гематоксилина при окрашивании H&E также не должна мешать гистологам и патологам, [14] которые потратили годы на обучение работе с предметными стеклами, окрашенными H&E, исследовать предметные стекла и ставить медицинские диагнозы . [7] Ни одно из предложенных пятен-заменителей не получило широкого распространения. [14] [7]
Гематоксилин впервые использовался в качестве красителя майя и ацтеками в Центральной Америке , где растут бревенчатые деревья. [8] [9] Краситель был впервые завезен в Европу испанцами и вскоре получил широкое распространение. [9] [8] Гематоксилин использовался для получения черного, синего и пурпурного цвета на различных тканях и оставался важным промышленным красителем до появления подходящих заменителей в виде синтетических красителей . [9] Что касается синего красителя (с квасцами в качестве протравы), первоначальные результаты были не такими светостойкими, как те, которые были получены с использованием индиго . [7] [9] В ответ на эту предполагаемую неполноценность качества синего цвета, полученного с помощью гематоксилина, его использование для окраски ткани было запрещено в Англии с 1581 по 1662 год. [8] [9] После введения синтетических черных красителей в конце 19 века гематоксилин впервые был заменен красителем для хлопка. [9] В немецком трактате 1902 года о крашении текстиля отмечается: «...бревна при окрашивании хлопка в черный цвет значительно пострадали от конкуренции с анилиновым черным». [36] Гематоксилин оставался важным черным красителем (с использованием меди или хрома в качестве протравы) для шерсти до 1920-х годов, когда стал доступен черный синтетический краситель, совместимый с шерстью. [9] Современное использование гематоксилина включает крашение шелка, кожи и шовных материалов . [7]
Гематоксилин использовался в качестве основного компонента чернил для письма и рисования , хотя время его первого использования в качестве чернил неясно. [37] Гематоксилин также добавлялся в некоторые железо-галловые чернила , которым требуется время, чтобы полностью потемнеть при нанесении на бумагу. [4] [37] В этом случае гематоксилин обеспечил некоторый первоначальный цвет до того, как железный галл достиг полной глубины цвета. [4] [37] Уильяму Льюису в 1763 году приписывают то, что он первым использовал гематоксилин в качестве добавки в железо-галловые чернила. [6] В 1848 году Фридлиб Фердинанд Рунге изготовил гематоксилиновые чернила, которые были некислотными, используя хромат калия в качестве протравы, преимуществом которых было отсутствие коррозии стальных ручек. [6] Известно, что Ван Гог использовал гематоксилиновые чернила с хромовой протравой в ряде своих рисунков и писем. [6] [5] [37]