Факторы инициации эукариот ( eIF ) — это белки или белковые комплексы , участвующие в фазе инициации эукариотической трансляции . Эти белки помогают стабилизировать образование рибосомных преинициативных комплексов вокруг стартового кодона и являются важным входом для посттранскрипционной регуляции генов . Несколько факторов инициации образуют комплекс с малой рибосомной субъединицей 40S и Met -tRNA i Met , называемый преинициативным комплексом 43S (43S PIC). Дополнительные факторы комплекса eIF4F (eIF4A, E и G) привлекают 43S PIC к пятиштриховой кэп- структуре мРНК , из которой частица 43S сканирует 5'-->3' вдоль мРНК, чтобы достичь стартового кодона AUG. Распознавание стартового кодона Met-tRNA i Met способствует высвобождению фосфата и eIF1 для формирования комплекса преинициации 48S (48S PIC), за которым следует набор большой рибосомной субъединицы 60S для формирования рибосомы 80S . [1] Существует гораздо больше факторов инициации эукариот, чем факторов инициации прокариот , что отражает большую биологическую сложность эукариотической трансляции. Существует по крайней мере двенадцать факторов инициации эукариот, состоящих из гораздо большего количества полипептидов, и они описаны ниже. [2]
eIF1 и eIF1A оба связываются с комплексом субъединицы рибосомы 40S-мРНК. Вместе они индуцируют «открытую» конформацию канала связывания мРНК, что имеет решающее значение для сканирования, доставки тРНК и распознавания стартового кодона. [3] В частности, диссоциация eIF1 от субъединицы 40S считается ключевым шагом в распознавании стартового кодона. [4] eIF1 и eIF1A являются небольшими белками (13 и 16 кДа, соответственно у людей) и оба являются компонентами 43S PIC . eIF1 связывается вблизи рибосомального P-сайта , в то время как eIF1A связывается вблизи A-сайта , аналогично структурно и функционально связанным бактериальным аналогам IF3 и IF1 , соответственно. [5]
eIF2 является основным белковым комплексом, ответственным за доставку инициаторной тРНК к P-сайту преинициативного комплекса в виде тройного комплекса, содержащего Met- тРНК i Met и GTP (eIF2-TC). eIF2 обладает специфичностью к метионин-заряженной инициаторной тРНК, что отличается от других метионин-заряженных тРНК, используемых для удлинения полипептидной цепи. Тройной комплекс eIF2 остается связанным с P-сайтом, в то время как мРНК прикрепляется к 40s рибосоме, и комплекс начинает сканировать мРНК. Как только стартовый кодон AUG распознается и располагается в P-сайте, eIF5 стимулирует гидролиз eIF2-GTP, эффективно переключая его в GDP - связанную форму посредством контролируемого высвобождения фосфата. [2] Гидролиз eIF2-GTP обеспечивает конформационное изменение для изменения сканирующего комплекса в комплекс инициации 48S с инициирующим основанием тРНК-Met антикодона, спаренным с AUG. После формирования комплекса инициации присоединяется субъединица 60s, и eIF2 вместе с большинством факторов инициации диссоциирует из комплекса, позволяя субъединице 60S связываться. eIF1A и eIF5B-GTP остаются связанными друг с другом в сайте A и должны быть гидролизованы для высвобождения и правильного инициирования удлинения. [6] : 191–192
eIF2 имеет три субъединицы, eIF2- α , β и γ . Первая α-субъединица является мишенью регуляторного фосфорилирования и имеет особое значение для клеток, которым может потребоваться глобальное выключение синтеза белка в ответ на сигнальные события клетки . При фосфорилировании она секвестрирует eIF2B (не путать с eIF2β), GEF . Без этого GEF GDP не может быть обменен на GTP, и трансляция подавляется. Одним из примеров этого является вызванная eIF2α репрессия трансляции, которая происходит в ретикулоцитах при недостатке железа. В случае вирусной инфекции протеинкиназа R (PKR) фосфорилирует eIF2α, когда dsRNA обнаруживается во многих многоклеточных организмах, что приводит к гибели клетки.
Белки eIF2A и eIF2D технически называются «eIF2», но ни один из них не является частью гетеротримера eIF2, и они, по-видимому, играют уникальные функции в трансляции. Вместо этого они, по-видимому, участвуют в специализированных путях, таких как «eIF2-независимая» инициация трансляции или повторная инициация соответственно.
eIF3 независимо связывает рибосомальную субъединицу 40S , множественные факторы инициации, а также клеточную и вирусную мРНК. [7]
У млекопитающих eIF3 является крупнейшим фактором инициации, состоящим из 13 субъединиц (am). Он имеет молекулярную массу ~800 кДа и контролирует сборку рибосомальной субъединицы 40S на мРНК, которая имеет 5'-кэп или IRES . eIF3 может использовать комплекс eIF4F или, альтернативно, во время внутренней инициации, IRES , чтобы расположить цепь мРНК вблизи места выхода рибосомальной субъединицы 40S, тем самым способствуя сборке функционального комплекса предварительной инициации.
Во многих видах рака у человека субъединицы eIF3 сверхэкспрессируются (субъединицы a, b, c, h, i и m) и недостаточно экспрессируются (субъединицы e и f). [8] Один из потенциальных механизмов, объясняющих эту дисрегуляцию, исходит из открытия, что eIF3 связывает определенный набор транскриптов мРНК регулятора пролиферации клеток и регулирует их трансляцию. [9] eIF3 также опосредует клеточную сигнализацию через S6K1 и mTOR / Raptor, осуществляя трансляционную регуляцию. [10]
Комплекс eIF4F состоит из трех субъединиц: eIF4A , eIF4E и eIF4G . Каждая субъединица имеет несколько человеческих изоформ, и существуют дополнительные белки eIF4: eIF4B и eIF4H .
eIF4G — это белок-строительный белок массой 175,5 кДа, который взаимодействует с eIF3 и белком связывания поли(А) (PABP), а также с другими членами комплекса eIF4F. eIF4E распознает и связывается с 5'-кэп-структурой мРНК, в то время как eIF4G связывает PABP, который связывает поли (А)-хвост , потенциально закольцовывая и активируя связанную мРНК. eIF4A — РНК- хеликаза DEAD-box — важна для разрешения вторичных структур мРНК.
eIF4B содержит два домена связывания РНК – один неспецифически взаимодействует с мРНК, тогда как второй специфически связывает часть 18S малой рибосомальной субъединицы. Он действует как якорь, а также как критический кофактор для eIF4A. Он также является субстратом S6K и при фосфорилировании способствует образованию комплекса преинициации. У позвоночных eIF4H является дополнительным фактором инициации с функцией, аналогичной eIF4B.
eIF5 — это активирующий GTPase белок , который помогает большой рибосомной субъединице ассоциироваться с малой субъединицей. Он необходим для гидролиза GTP eIF2.
eIF5A — это эукариотический гомолог EF-P . Он помогает в удлинении, а также играет роль в терминации. EIF5A содержит необычную аминокислоту гипузин . [11]
eIF5B является GTPase и участвует в сборке полной рибосомы. Это функциональный эукариотический аналог бактериального IF2 . [12]
eIF6 осуществляет такое же ингибирование сборки рибосом, как и eIF3, но связывается с большой субъединицей .