Суправитальное окрашивание

Суправитальное окрашивание мазка крови человека от больного гемолитической анемией . Ретикулоциты — клетки с темно-синими точками и изогнутыми линейными структурами (ретикулумом) в цитоплазме.

Суправитальное окрашивание — это метод окрашивания , используемый в микроскопии для исследования живых клеток, которые были удалены из организма. Он отличается от прижизненного окрашивания, которое выполняется путем инъекции или иного введения красителя в организм. Таким образом, суправитальное окрашивание может иметь большую токсичность , так как только нескольким клеткам нужно пережить его в течение короткого времени. Термин « витальное окрашивание » используется некоторыми авторами для обозначения именно прижизненного окрашивания, а другими — взаимозаменяемо с суправитальным окрашиванием, основная концепция заключается в том, что исследуемая клетка все еще жива. Поскольку клетки живы и не зафиксированы вне организма, суправитальные окрашивания носят временный характер. ^{[1] [2]}

Наиболее распространенное суправитальное окрашивание выполняется на ретикулоцитах с использованием нового метиленового синего или блестящего крезилового синего , что позволяет увидеть ретикулофиламентозный рисунок рибосом, характерно осажденных в этих живых незрелых эритроцитах суправитальными красителями. Подсчитав количество таких клеток, можно определить скорость образования эритроцитов, что дает представление об активности костного мозга и анемии . ^[3] Это отличается от витального окрашивания , когда используемый краситель исключается из живых клеток, так что только мертвые клетки окрашиваются положительно. (Витальные красители включают красители, такие как трипановый синий и пропидий иодид , которые либо слишком объемны, либо слишком заряжены, чтобы пересекать клеточную мембрану, либо которые активно и быстро выкачиваются живыми клетками.)

Суправитальное окрашивание можно сочетать с окрашиванием антителами клеточной поверхности ( иммунофлуоресценцией ) для таких приложений, как анализ FACS . ^[4] Иммунофлюоресценцию можно также проводить внутри живых клеток путем обратимой клеточной пермеабилизации с использованием детергента Triton X-100 . Тщательно подобранная до соответствующей концентрации для количества клеток предварительная обработка может обеспечить доступ молекул от 1 до 150 килодальтон к внутренней части клетки. ^[5] Хотя антитела могут использоваться аналогичным образом в этом контексте, термин «суправитальное окрашивание» обычно зарезервирован для более мелких химических веществ, которые обладают подходящими свойствами по своей сути.

Примеры распространенных суправитальных красителей

Суправитальные красители для эритроцитов: ^[6]

• Новый метиленовый синий
• Яркий крезиловый синий
• Кристаллический фиолетовый
• Метиловый фиолетовый
• Нильский синий

• пятно Hoechst

Ссылки

1. «Английский медицинский словарь».
2. N. Chandler Foot (1954). «Жизненное окрашивание». Annals of the New York Academy of Sciences . 59 (2): 259–267. doi :10.1111/j.1749-6632.1954.tb45936.x. PMID  13229212.
3. Джон П. Грир; Максвелл Майер Винтроуб (2008). Клиническая гематология Винтроуба. ISBN 9780781765077.
4. Тина Карлсен; Ричард Ланглуа; Эрин Бисселл. «Окончательный отчет по проверке концепции системы иммуноанализа/витального окрашивания (IVSS)» (PDF) . Национальная лаборатория им. Лоуренса в Ливерморе.
5. Энн Л. ван де Вен, Карен Адлер-Сторц и Ребекка Ричардс-Кортум (2009). «Доставка оптических контрастных агентов с использованием Triton-X100, часть 1: Обратимая пермеабилизация живых клеток для внутриклеточной маркировки». J Biomed Opt . 14 (2): 021012. doi :10.1117/1.3090448. PMC 2748244. PMID  19405725 . {{cite journal}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
6. 2011 Гематология, клиническая микроскопия и глоссарий биологических жидкостей CAP