Прямой и непрямой тест Кумбса , также известный как антиглобулиновый тест ( АГТ ), представляет собой анализ крови , используемый в иммуногематологии . Прямой тест Кумбса выявляет антитела, прилипшие к поверхности эритроцитов. [1] Поскольку эти антитела иногда разрушают эритроциты, они могут вызвать анемию ; этот тест может помочь прояснить состояние. Непрямой тест Кумбса выявляет антитела, свободно плавающие в крови. [1] Эти антитела могут действовать против определенных эритроцитов; тест можно проводить для диагностики реакций на переливание крови . [1]
Прямой тест Кумбса используется для выявления аутоиммунной гемолитической анемии — состояния, при котором иммунная система разрушает эритроциты , что приводит к анемии. Прямой тест Кумбса используется для обнаружения антител или белков комплемента, прикрепленных к поверхности эритроцитов. Для проведения теста берется образец крови, эритроциты промываются (удаляя плазму пациента и несвязанные антитела из эритроцитов), а затем инкубируются с античеловеческим глобулином («реактив Кумбса»). Если эритроциты затем агглютинируют , тест положительный, что является визуальным признаком того, что антитела или белки комплемента связываются с поверхностью эритроцитов и могут вызывать разрушение этих клеток.
Непрямой тест Кумбса используется при пренатальном обследовании беременных и при обследовании перед переливанием крови. Тест обнаруживает антитела против чужеродных эритроцитов. В этом случае сыворотку извлекают из образца крови, взятого у пациента. Сыворотку инкубируют с чужеродными эритроцитами известной антигенности . Наконец, добавляется античеловеческий глобулин. При возникновении агглютинации непрямая проба Кумбса положительна. [2]
Два теста Кумбса основаны на связывании античеловеческих антител с человеческими антителами, обычно IgG или IgM . Эти античеловеческие антитела продуцируются плазматическими клетками животных, отличных от человека, после иммунизации их человеческой плазмой . Кроме того, эти античеловеческие антитела также будут связываться с человеческими антителами, которые могут фиксироваться на антигенах на поверхности эритроцитов (эритроцитов). В соответствующих условиях пробирки это может привести к агглютинации эритроцитов и позволить визуализировать образующиеся сгустки эритроцитов. Если наблюдается слипание, проба Кумбса положительна; в противном случае тест Кумбса отрицательный. [3]
Обычное клиническое применение теста Кумбса включает подготовку крови к переливанию при перекрестном сопоставлении , определение атипичных антител в плазме крови беременных женщин в рамках дородовой помощи , а также обнаружение антител для диагностики иммуноопосредованных гемолитических анемий . [4]
Тесты Кумбса проводятся с использованием эритроцитов или сыворотки (прямой или непрямой соответственно) из образцов венозной цельной крови, взятых у пациентов путем венепункции . Венозная кровь доставляется в лабораторию (или банк крови), где обученный научно-технический персонал проводит тесты Кумбса. Клиническую значимость результата оценивает врач, запросивший тест Кумбса, возможно, с помощью лабораторного гематолога . [ нужна цитата ]
Прямой тест Кумбса, также называемый прямым антиглобулиновым тестом (DAT), используется для определения того, связались ли антитела или факторы системы комплемента с поверхностными антигенами эритроцитов . [5] DAT не требуется для тестирования перед переливанием крови [6], но может проводиться в некоторых лабораториях. [ необходимы разъяснения ] Перед переливанием крови часто проводится непрямой тест Кумбса.
.png/1280px-Algorithm_in_positive_direct_antiglobulin_test_(DAT,_or_direct_Coombs_test).png)
Прямой тест Кумбса применяется в клинике при подозрении на иммуноопосредованную гемолитическую анемию (разрушение эритроцитов, опосредованное антителами). Положительный тест Кумбса указывает на то, что иммунный механизм атакует эритроциты пациента . Этот механизм может быть аутоиммунным , аллоиммунным или иммуноопосредованным механизмом, индуцированным лекарственными средствами. [3]
( Устройство памяти , позволяющее запомнить, что DAT проверяет эритроциты и используется для проверки младенцев на гемолитическую болезнь новорожденного : R h D болезнь ; R = эритроциты, D = DAT.)
Эритроциты пациента промывают (удаляя собственную сыворотку пациента ), а затем центрифугируют с античеловеческим глобулином (также известным как реагент Кумбса). Если иммуноглобулин или факторы комплемента были зафиксированы на поверхности эритроцитов in vitro , античеловеческий глобулин агглютинирует эритроциты, и прямой тест Кумбса будет положительным. (Визуальное изображение положительного прямого теста Кумбса показано в верхней половине схемы). [ нужна цитата ]
Непрямой тест Кумбса, также называемый непрямым антиглобулиновым тестом (IAT), используется для выявления реакций антитело-антиген in vitro . Он используется для обнаружения очень низких концентраций антител, присутствующих в плазме/сыворотке пациента перед переливанием крови. В дородовом уходе ИАТ используется для проверки беременных женщин на антитела, которые могут вызвать гемолитическую болезнь новорожденного . IAT также можно использовать для тестирования совместимости , идентификации антител, фенотипирования эритроцитов и исследований титрования. [ нужна цитата ]
Непрямой тест Кумбса используется для выявления антител при подготовке крови к переливанию . Кровь донора и реципиента должна быть совместима по АВО и Rh D. Донорскую кровь для переливания также проверяют на инфекции в отдельных процессах. [ нужна цитата ]
Образец крови реципиента и образец крови из каждой единицы донорской крови проверяются на наличие антител с помощью непрямого теста Кумбса. Каждый образец инкубируется против широкого спектра эритроцитов, которые вместе демонстрируют полный спектр поверхностных антигенов (т.е. групп крови ).
Непрямой тест Кумбса используется для проверки образца сыворотки реципиента на наличие антител против образца эритроцитов донора . Иногда это называют перекрестным совпадением крови.
Непрямой тест Кумбса используется для скрининга беременных женщин на наличие антител IgG , которые могут пройти через плаценту в кровь плода и вызвать гемолитическую болезнь новорожденного . [ нужна цитата ]
IAT представляет собой двухэтапный тест. (Перекрестное совпадение показано визуально в нижней половине схемы как пример непрямого теста Кумбса). [ нужна цитата ]
Непациентские, промытые эритроциты (эритроциты) с известными антигенами инкубируют с сывороткой пациента, содержащей неизвестное содержание антител. Если сыворотка содержит антитела к антигенам на поверхности эритроцитов, антитела будут связываться с поверхностью эритроцитов. [ нужна цитата ]
Эритроциты три или четыре раза промывают изотоническим солевым раствором, а затем инкубируют с античеловеческим глобулином. Если антитела связались с поверхностными антигенами эритроцитов на первом этапе, эритроциты будут агглютинировать при инкубации с античеловеческим глобулином (также известным как реагент Кумбса) на этом этапе, и непрямой тест Кумбса будет положительным.
Разбавив сыворотку, содержащую антитела, можно определить количество антител в сыворотке. Это делается путем выполнения серийных разведений сыворотки и определения максимального разведения тестируемой сыворотки, которое способно вызвать агглютинацию соответствующих эритроцитов. [ нужна цитата ]
Реактив Кумбса (также известный как антиглобулин Кумбса или античеловеческий глобулин ) используется как в прямом тесте Кумбса, так и в непрямом тесте Кумбса. Реагент Кумбса – античеловеческий глобулин . Его получают путем инъекции животным человеческого глобулина, который вырабатывает поликлональные антитела, специфичные к иммуноглобулинам человека и факторам системы комплемента человека. Можно использовать более специфические реагенты Кумбса или моноклональные антитела . [ нужна цитата ]
Антитела как IgM , так и IgG прочно связываются со своими комплементарными антигенами. Антитела IgG наиболее реактивны при 37°C. Антитела IgM легко обнаруживаются в физиологическом растворе при комнатной температуре , поскольку антитела IgM способны связываться между эритроцитами из-за их большого размера, эффективно создавая то, что называется агглютинацией . Антитела IgG меньше по размеру, и им требуется помощь, чтобы образовать достаточно хорошие мостики для формирования реакции визуальной агглютинации . Реагенты, используемые для усиления обнаружения IgG, называются потенциаторами. Эритроциты имеют суммарный отрицательный заряд, называемый дзета-потенциалом, который вызывает у них естественное отталкивание друг к другу. Потенциаторы снижают зета-потенциал мембран эритроцитов. Общие потенциаторы включают раствор с низкой ионной силой (LISS), альбумин , полиэтиленгликоль (ПЭГ) и протеолитические ферменты .
Тест Кумбса был впервые описан в 1945 году кембриджскими иммунологами Робином Кумбсом (в честь которого он назван), Артуром Мурантом и Робом Рейсом . [8] Исторически это делалось в пробирках . Сегодня это обычно делается с использованием автоматизированной твердофазной или гелевой технологии.