stringtranslate.com

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Современный автономный ВЭЖХ
Схематическое изображение блока ВЭЖХ (1) резервуары для растворителя, (2) дегазатор растворителя, (3) градиентный клапан, (4) смесительный сосуд для подачи подвижной фазы, (5) насос высокого давления, (6) переключающий клапан в «положении ввода», (6') переключающий клапан в «положении загрузки», (7) петля ввода образца, (8) предколонка (защитная колонка), (9) аналитическая колонка, (10) детектор ( например , ИК, УФ), (11) сбор данных, (12) коллектор отходов или фракций.

Высокоэффективная жидкостная хроматография ( ВЭЖХ ), ранее известная как жидкостная хроматография высокого давления , представляет собой метод аналитической химии, используемый для разделения, идентификации и количественного определения определенных компонентов в смесях. Смеси могут быть получены из пищевых продуктов , химикатов , фармацевтических препаратов , [1] биологических , экологических и сельскохозяйственных материалов и т. д., которые были растворены в жидких растворах. [ требуется ссылка ]

Он основан на насосах высокого давления, которые подают смеси различных растворителей, называемые подвижной фазой , которая протекает через систему, собирая по пути смесь образцов, доставляя ее в цилиндр, называемый колонкой, заполненный твердыми частицами, изготовленными из адсорбирующего материала , называемого неподвижной фазой . [2]

Каждый компонент в образце по-разному взаимодействует с адсорбирующим материалом, вызывая разные скорости миграции для каждого компонента. [3] Эти разные скорости приводят к разделению, поскольку виды вытекают из колонки в определенный детектор, такой как УФ-детекторы . Выходной сигнал детектора представляет собой график, называемый хроматограммой. Хроматограммы являются графическими представлениями интенсивности сигнала в зависимости от времени или объема, показывающими пики, которые представляют компоненты образца. Каждый образец появляется в соответствующее время, называемое его временем удерживания, имея площадь, пропорциональную его количеству. [2]

ВЭЖХ широко используется в производственных ( например , в процессе производства фармацевтических и биологических продуктов), [4] [5] юридических ( например , обнаружение препаратов для повышения производительности в моче), [6] исследовательских ( например , разделение компонентов сложного биологического образца или аналогичных синтетических химических веществ друг от друга) и медицинских ( например , определение уровня витамина D в сыворотке крови) целях. [7]

Хроматографию можно описать как процесс массопереноса, включающий адсорбцию и/или разделение . Как уже упоминалось, ВЭЖХ использует насосы для пропускания жидкости под давлением и смеси образца через колонку, заполненную адсорбентом, что приводит к разделению компонентов образца. Активный компонент колонки, адсорбент, обычно представляет собой гранулированный материал, состоящий из твердых частиц ( например , кремния , полимеров и т. д.) размером 1,5–50 мкм, на котором могут быть связаны различные реагенты. [8] [9] Компоненты смеси образца отделяются друг от друга из-за их различной степени взаимодействия с частицами адсорбента. Жидкость под давлением обычно представляет собой смесь растворителей ( например , воды, буферов , ацетонитрила и/или метанола ) и называется «подвижной фазой». Ее состав и температура играют важную роль в процессе разделения, влияя на взаимодействия, происходящие между компонентами образца и адсорбентом. [10] Эти взаимодействия имеют физическую природу, например, гидрофобные (дисперсионные), диполь-дипольные и ионные, чаще всего их комбинацию. [11] [12]

Операция

Жидкостный хроматограф сложен [13] и имеет сложную и деликатную технологию. Для того, чтобы правильно управлять системой, должна быть минимальная основа для понимания того, как устройство выполняет обработку данных, чтобы избежать неверных данных и искаженных результатов. [14] [15] [16]

ВЭЖХ отличается от традиционной («низконапорной») жидкостной хроматографии , поскольку рабочие давления значительно выше (около 50–1400 бар), в то время как обычная жидкостная хроматография обычно полагается на силу тяжести для прохождения подвижной фазы через насадочную колонку. Из-за небольшого количества образца, разделяемого в аналитической ВЭЖХ, типичные размеры колонки составляют 2,1–4,6 мм в диаметре и 30–250 мм в длину. Также колонки ВЭЖХ изготавливаются с более мелкими частицами адсорбента (средний размер частиц 1,5–50 мкм). Это обеспечивает ВЭЖХ превосходную разрешающую способность (способность различать соединения) при разделении смесей, что делает ее популярным хроматографическим методом. [ необходима цитата ]

Схема прибора ВЭЖХ обычно включает резервуары для растворителей, один или несколько насосов, дегазатор растворителя , пробоотборник, колонку и детектор. Растворители готовятся заранее в соответствии с потребностями разделения, они проходят через дегазатор для удаления растворенных газов, смешиваются, чтобы стать подвижной фазой, затем протекают через пробоотборник, который переносит смесь образца в поток подвижной фазы, который затем переносит ее в колонку. Насосы подают желаемый поток и состав подвижной фазы через неподвижную фазу внутри колонки, затем непосредственно в проточную ячейку внутри детектора. Детектор генерирует сигнал, пропорциональный количеству компонента образца, выходящего из колонки, что позволяет проводить количественный анализ компонентов образца. Детектор также отмечает время выхода, время удерживания, которое служит для первоначальной идентификации компонента. Более продвинутые детекторы также предоставляют дополнительную информацию, специфичную для характеристик аналита, такую ​​как спектр UV-VIS или масс-спектр , который может дать представление о его структурных особенностях. Эти детекторы широко используются, например, детекторы УФ/видимого диапазона, фотодиодные матричные детекторы (PDA)/ диодные матричные детекторы и масс-спектрометрические детекторы. [ необходима ссылка ]

Цифровой микропроцессор и пользовательское программное обеспечение управляют прибором ВЭЖХ и обеспечивают анализ данных. Некоторые модели механических насосов в приборе ВЭЖХ могут смешивать несколько растворителей в соотношениях, изменяющихся во времени, создавая градиент состава в подвижной фазе. Большинство приборов ВЭЖХ также имеют термостат колонки, который позволяет регулировать температуру, при которой выполняется разделение. [ необходима цитата ]

Смесь образцов, которую необходимо разделить и проанализировать, вводится в дискретном малом объеме (обычно микролитры) в поток подвижной фазы, просачивающейся через колонку. Компоненты образца движутся через колонку, каждый с разной скоростью, которая является функцией определенных физических взаимодействий с адсорбентом, неподвижной фазой. Скорость каждого компонента зависит от его химической природы, от природы неподвижной фазы (внутри колонки) и от состава подвижной фазы. Время, в течение которого определенный аналит элюируется (выходит из колонки), называется его временем удерживания. Время удерживания, измеренное при определенных условиях, является идентифицирующей характеристикой данного аналита. [ необходима цитата ]

Доступно множество различных типов колонок, заполненных адсорбентами, различающимися по размеру частиц, пористости и химии поверхности. Использование материалов для набивки с меньшим размером частиц требует использования более высокого рабочего давления («обратного давления») и обычно улучшает хроматографическое разрешение (степень разделения пиков между последовательными аналитами, выходящими из колонки). Частицы сорбента могут быть ионными, гидрофобными или полярными по своей природе. [ необходима цитата ]

Наиболее распространенным режимом жидкостной хроматографии является обращенно-фазовая хроматография , при которой используемые подвижные фазы включают любую смешивающуюся комбинацию воды или буферов с различными органическими растворителями (наиболее распространенными являются ацетонитрил и метанол). Некоторые методы ВЭЖХ используют безводные подвижные фазы (см. нормально-фазовую хроматографию ниже). Водный компонент подвижной фазы может содержать кислоты (такие как муравьиная, фосфорная или трифторуксусная кислота ) или соли для содействия разделению компонентов образца. Состав подвижной фазы может поддерживаться постоянным («изократический режим элюирования») или изменяться («градиентный режим элюирования») во время хроматографического анализа. Изократическое элюирование обычно эффективно при разделении простых смесей. Градиентное элюирование требуется для сложных смесей с различными взаимодействиями с неподвижной и подвижной фазами. Вот почему при градиентном элюировании состав подвижной фазы обычно варьируется от низкой до высокой элюирующей силы. Элюирующая сила подвижной фазы отражается во времени удерживания аналита, поскольку высокая элюирующая сила ускоряет элюирование (что приводит к сокращению времени удерживания). Например, типичный градиентный профиль в обращенно-фазовой хроматографии может начинаться с 5% ацетонитрила (в воде или водном буфере) и линейно прогрессировать до 95% ацетонитрила в течение 5–25 минут. Периоды постоянного состава подвижной фазы (плато) также могут быть частью градиентного профиля. Например, состав подвижной фазы может поддерживаться постоянным на уровне 5% ацетонитрила в течение 1–3 минут, а затем линейно изменяться до 95% ацетонитрила. [ необходима цитата ]

Выбранный состав подвижной фазы зависит от интенсивности взаимодействий между различными компонентами образца («аналитами») и неподвижной фазой ( например , гидрофобные взаимодействия в обращенно-фазовой ВЭЖХ). В зависимости от их сродства к неподвижной и подвижной фазам аналиты распределяются между ними в процессе разделения, происходящем в колонке. Этот процесс распределения аналогичен тому, который происходит во время экстракции жидкость-жидкость , но является непрерывным, а не поэтапным. [ необходима цитата ]

В примере с использованием градиента вода/ацетонитрил более гидрофобные компоненты будут элюироваться (выходить из колонки) позже, затем, как только подвижная фаза обогащается ацетонитрилом ( т.е. в подвижной фазе становится более элюирующий раствор), их элюирование ускоряется. [ необходима цитата ]

Выбор компонентов подвижной фазы, добавок (таких как соли или кислоты) и градиентных условий зависит от природы колонки и компонентов образца. Часто проводится серия пробных запусков с образцом, чтобы найти метод ВЭЖХ, который обеспечивает адекватное разделение. [ необходима цитата ]

История и развитие

До ВЭЖХ ученые использовали методы настольной колоночной жидкостной хроматографии. Системы жидкостной хроматографии были в значительной степени неэффективны из-за того, что скорость потока растворителей зависела от силы тяжести. Разделение занимало много часов, а иногда и дней. Газовая хроматография (ГХ) в то время была более мощной, чем жидкостная хроматография (ЖХ), однако было очевидно, что разделение газовой фазы и анализ очень полярных высокомолекулярных биополимеров невозможны. [17] ГХ была неэффективна для многих приложений в области естественных наук и здравоохранения для биомолекул, поскольку они в основном нелетучие и термически нестабильны при высоких температурах ГХ. [18] В результате были выдвинуты гипотезы об альтернативных методах, которые вскоре привели к разработке ВЭЖХ. [ необходима цитата ]

После основополагающей работы Мартина и Синджа в 1941 году, в 1960-х годах Кэлвин Гиддингс , [19] Йозеф Хубер и другие предсказали, что ЖХ может работать в высокоэффективном режиме, уменьшая диаметр частиц упаковки существенно ниже типичного уровня ЖХ (и ГХ) в 150 мкм и используя давление для увеличения скорости подвижной фазы. [17] Эти предсказания подвергались обширным экспериментам и уточнениям в течение 60-х и 70-х годов вплоть до наших дней. [20] Ранние исследования по разработке начали улучшать частицы ЖХ, например, исторический Зипакс, поверхностно пористую частицу. [21]

1970-е годы принесли много разработок в области оборудования и приборов. Исследователи начали использовать насосы и инжекторы для создания элементарной конструкции системы ВЭЖХ. [22] Газовые насосы-усилители были идеальными, поскольку они работали при постоянном давлении и не требовали герметичных уплотнений или обратных клапанов для обеспечения постоянного потока и хорошего количественного определения. [18] Аппаратные вехи были достигнуты в Dupont IPD (Industrial Polymers Division), такие как использование градиентного устройства с низким объемом задержки, а также замена инжектора с перегородкой на петлевой клапан для инъекций. [18]

Хотя разработки приборов были важны, история ВЭЖХ в первую очередь касается истории и эволюции технологии частиц . [18] [23] После внедрения частиц пористого слоя наблюдалась устойчивая тенденция к уменьшению размера частиц для повышения эффективности. [18] Однако при уменьшении размера частиц возникли новые проблемы. Практические недостатки вытекают из чрезмерного перепада давления, необходимого для проталкивания подвижной жидкости через колонку, и сложности подготовки однородной упаковки из чрезвычайно мелких материалов. [24] Каждый раз, когда размер частиц значительно уменьшается, обычно должен происходить еще один раунд разработки приборов для работы с давлением. [20] [18]

Типы

Распределительная хроматография

Полезный диапазон метода разбиения HILIC

Распределительная хроматография была одним из первых видов хроматографии, разработанных химиками, и в наши дни почти не используется. [25] Принцип коэффициента распределения применялся в бумажной хроматографии , тонкослойной хроматографии , газовой фазе и разделении жидкость-жидкость . Нобелевскую премию по химии 1952 года получили Арчер Джон Портер Мартин и Ричард Лоуренс Миллингтон Синдж за разработку ими метода, который использовался для разделения аминокислот . [26] Распределительная хроматография использует удерживаемый растворитель на поверхности или внутри зерен или волокон «инертной» твердой поддерживающей матрицы, как в бумажной хроматографии; или использует преимущество некоторого кулоновского и/или водородного донорного взаимодействия с неподвижной фазой. Молекулы аналита распределяются между жидкой неподвижной фазой и элюентом. Так же, как в гидрофильной хроматографии взаимодействия (HILIC; подметод в ВЭЖХ), этот метод разделяет аналиты на основе различий в их полярности. HILIC чаще всего использует связанную полярную неподвижную фазу и подвижную фазу, состоящую в основном из ацетонитрила с водой в качестве сильного компонента. Разделительная ВЭЖХ исторически использовалась на несвязанных носителях из кремния или оксида алюминия. Каждый из них эффективно разделяет аналиты с помощью относительных полярных различий. Связанные фазы HILIC имеют преимущество разделения кислотных , основных и нейтральных растворенных веществ в одном хроматографическом цикле. [27]

Полярные аналиты диффундируют в неподвижный водный слой, связанный с полярной неподвижной фазой, и таким образом удерживаются. Чем сильнее взаимодействия между полярным аналитом и полярной неподвижной фазой (относительно подвижной фазы), тем больше время элюирования. Сила взаимодействия зависит от функциональных групп, входящих в состав молекулярной структуры аналита, причем более поляризованные группы ( например , гидроксильные) и группы, способные образовывать водородные связи, вызывают большее удерживание. Кулоновские (электростатические) взаимодействия также могут увеличивать удерживание. Использование более полярных растворителей в подвижной фазе уменьшит время удерживания аналитов, тогда как более гидрофобные растворители, как правило, увеличивают время удерживания. [ необходима цитата ]

Нормально-фазовая хроматография

Нормально-фазовая хроматография была одним из первых видов ВЭЖХ, разработанных химиками, но ее использование сократилось за последние десятилетия. Также известный как нормально-фазовая ВЭЖХ (НФ-ВЭЖХ), этот метод разделяет аналиты на основе их сродства к полярной неподвижной поверхности, такой как кремний; следовательно, он основан на способности аналита участвовать в полярных взаимодействиях (таких как водородные связи или диполь-дипольный тип взаимодействий) с поверхностью сорбента. НФ-ВЭЖХ использует неполярную, неводную подвижную фазу ( например , хлороформ ) и эффективно работает для разделения аналитов, легко растворимых в неполярных растворителях. Аналит ассоциируется с полярной неподвижной фазой и удерживается ею. Адсорбционная прочность увеличивается с увеличением полярности аналита. Прочность взаимодействия зависит не только от функциональных групп, присутствующих в структуре молекулы аналита, но и от стерических факторов . Влияние стерических препятствий на силу взаимодействия позволяет этому методу разделять структурные изомеры . [ необходима ссылка ]

Использование более полярных растворителей в подвижной фазе уменьшит время удерживания аналитов, тогда как более гидрофобные растворители, как правило, вызывают более медленное элюирование (увеличение времени удерживания). Очень полярные растворители, такие как следы воды в подвижной фазе, как правило, адсорбируются на твердой поверхности неподвижной фазы, образуя неподвижный связанный (водный) слой, который, как считается, играет активную роль в удерживании. Такое поведение несколько свойственно нормально-фазовой хроматографии, поскольку оно регулируется почти исключительно адсорбционным механизмом ( т. е . аналиты взаимодействуют с твердой поверхностью, а не с сольватированным слоем лиганда, прикрепленного к поверхности сорбента; см. также обращенно-фазовую ВЭЖХ ниже). Адсорбционная хроматография все еще в некоторой степени используется для структурного разделения изомеров как в колоночной, так и в тонкослойной хроматографии на активированных (высушенных) носителях из силикагеля или оксида алюминия. [ необходима цитата ]

Разделительная и NP-HPLC вышли из моды в 1970-х годах с развитием обращенно-фазовой HPLC из-за плохой воспроизводимости времен удерживания из-за присутствия слоя воды или протонного органического растворителя на поверхности хроматографической среды из кремния или оксида алюминия . Этот слой изменяется при любых изменениях в составе подвижной фазы ( например , уровень влажности), вызывая дрейф времен удерживания. [ необходима цитата ]

В последнее время распределительная хроматография снова стала популярной благодаря разработке фаз с гиалуроновой кислотой , которые демонстрируют улучшенную воспроизводимость, а также благодаря лучшему пониманию диапазона применимости этого метода.

Вытеснительная хроматография

Использование вытеснительной хроматографии довольно ограничено и в основном используется для препаративной хроматографии. Основной принцип основан на молекуле с высоким сродством к хроматографической матрице (вытеснитель), которая используется для эффективной конкуренции за места связывания и, таким образом, вытеснения всех молекул с меньшим сродством. [28] Существуют четкие различия между вытеснительной и элюционной хроматографией. В режиме элюирования вещества обычно выходят из колонки в узких гауссовых пиках. Для достижения максимальной очистки желательно широкое разделение пиков, предпочтительно до базовой линии. Скорость, с которой любой компонент смеси перемещается по колонке в режиме элюирования, зависит от многих факторов. Но для того, чтобы два вещества перемещались с разной скоростью и, таким образом, были разделены, должны быть существенные различия в некотором взаимодействии между биомолекулами и хроматографической матрицей. Рабочие параметры регулируются для максимального увеличения эффекта этой разницы. Во многих случаях разделение пиков до базовой линии может быть достигнуто только при градиентном элюировании и низкой загрузке колонки. Таким образом, два недостатка хроматографии в режиме элюирования, особенно в препаративном масштабе, — это сложность эксплуатации из-за градиентной прокачки растворителя и низкая пропускная способность из-за низкой загрузки колонки. Вытеснительная хроматография имеет преимущества перед элюционной хроматографией в том, что компоненты разделяются на последовательные зоны чистых веществ, а не на «пики». Поскольку процесс использует нелинейность изотерм, на данной колонке можно разделить большее количество исходного материала колонки, при этом очищенные компоненты извлекаются при значительно более высокой концентрации. [ необходима цитата ]

Обращенно-фазовая жидкостная хроматография (ОФ-ЖХ)

Хроматограмма сложной смеси (парфюмерной воды), полученная методом обращенно-фазовой ВЭЖХ

Обращенно-фазовая ВЭЖХ (RP-HPLC) [29] является наиболее распространенным режимом хроматографии. Она имеет неполярную неподвижную фазу и водную, умеренно полярную подвижную фазу. В методах обращенной фазы вещества удерживаются в системе тем более гидрофобными, чем они более гидрофобны. Для удерживания органических материалов неподвижные фазы, упакованные внутри колонок, состоят в основном из пористых гранул силикагеля различной формы, в основном сферической, разного диаметра (1,5, 2, 3, 5, 7, 10 мкм), с различным диаметром пор (60, 100, 150, 300, А), на поверхности которых химически связаны различные углеводородные лиганды, такие как C3, C4, C8, C18. Существуют также полимерные гидрофобные частицы, которые служат неподвижными фазами, когда требуются растворы при экстремальных значениях pH, или гибридный силикагель, полимеризованный с органическими веществами. Чем длиннее углеводородный лиганд на неподвижной фазе, тем дольше могут удерживаться компоненты образца. В большинстве современных методов разделения биомедицинских материалов используются колонки типа C-18, иногда называемые по торговым наименованиям, таким как ODS (октадецилсилан) или RP-18 (обращенная фаза 18).

Наиболее распространенные неподвижные фазы RP основаны на кремниевой подложке, поверхность которой модифицирована путем связывания RMe 2 SiCl, где R представляет собой алкильную группу с прямой цепью, такую ​​как C 18 H 37 или C 8 H 17 .

При использовании таких неподвижных фаз время удерживания липофильных молекул больше, тогда как полярные молекулы элюируются легче (выходят на ранних стадиях анализа). Хроматографист может увеличить время удерживания, добавив больше воды в подвижную фазу, тем самым сделав взаимодействие гидрофобного аналита с гидрофобной неподвижной фазой относительно более сильным. Аналогичным образом исследователь может уменьшить время удерживания, добавив больше органического растворителя в подвижную фазу. ОФ-ВЭЖХ так часто используется среди биологов и пользователей биологических наук, поэтому ее часто неправильно называют просто «ВЭЖХ» без дополнительных уточнений. Фармацевтическая промышленность также регулярно использует ОФ-ВЭЖХ для квалификации лекарств перед их выпуском. [ необходима цитата ]

ОФ-ВЭЖХ работает по принципу гидрофобных взаимодействий, который возникает из-за высокой симметрии в дипольной структуре воды и играет важнейшую роль во всех процессах в науках о жизни. ОФ-ВЭЖХ позволяет измерять эти интерактивные силы. Связывание аналита с неподвижной фазой пропорционально площади контактной поверхности вокруг неполярного сегмента молекулы аналита при ассоциации с лигандом на неподвижной фазе. Этот сольвофобный эффект доминирует под действием силы воды для «сокращения полости» вокруг аналита и цепи C18 по сравнению с комплексом обоих. Энергия , выделяемая в этом процессе, пропорциональна поверхностному натяжению элюента (вода: 7,3 × 10−6 Дж / см2 , метанол : 2,2 ×  10−6 Дж / см2 )  и гидрофобной поверхности аналита и лиганда соответственно. Удерживание можно уменьшить, добавив в подвижную фазу менее полярный растворитель (метанол, ацетонитрил ) для снижения поверхностного натяжения воды. Градиентное элюирование использует этот эффект, автоматически снижая полярность и поверхностное натяжение водной подвижной фазы в ходе анализа.

Структурные свойства молекулы аналита могут играть важную роль в ее характеристиках удерживания. Теоретически аналит с большей гидрофобной площадью поверхности (C–H, C–C и, как правило, неполярные атомные связи, такие как SS и другие) может удерживаться дольше, поскольку он не взаимодействует со структурой воды. С другой стороны, аналиты с более высокой полярной площадью поверхности (в результате наличия полярных групп, таких как -OH, -NH 2 , COO − или -NH 3 + в их структуре) удерживаются хуже, поскольку они лучше интегрированы в воду. На взаимодействия с неподвижной фазой также могут влиять стерические эффекты или эффекты исключения, при которых компонент очень большой молекулы может иметь только ограниченный доступ к порам неподвижной фазы, где происходят взаимодействия с поверхностными лигандами (алкильными цепями). Такое поверхностное препятствие обычно приводит к меньшему удерживанию.

Время удерживания увеличивается с увеличением гидрофобной (неполярной) площади поверхности молекул. Например, соединения с разветвленной цепью могут элюироваться быстрее, чем их соответствующие линейные изомеры, поскольку их общая площадь поверхности меньше. Аналогично органические соединения с одинарными связями C–C часто элюируются позже, чем те, у которых есть связь C=C или даже тройная связь, поскольку двойная или тройная связь делает молекулу более компактной, чем одинарная связь C–C.

Другим важным фактором является pH подвижной фазы, поскольку он может изменить гидрофобный характер ионизируемого аналита. По этой причине большинство методов используют буферный агент , такой как фосфат натрия , для контроля pH. Буферы служат нескольким целям: контроль pH, который влияет на состояние ионизации ионизируемых аналитов, влияют на заряд на ионизируемой поверхности кремнезема неподвижной фазы между лигандами связанной фазы и в некоторых случаях даже действуют как агенты ионного спаривания для нейтрализации заряда аналита. Формиат аммония обычно добавляют в масс-спектрометрию для улучшения обнаружения определенных аналитов путем образования аддуктов аналит-аммоний . Летучая органическая кислота, такая как уксусная кислота или, чаще всего, муравьиная кислота , часто добавляется в подвижную фазу, если масс-спектрометрия используется для анализа элюатов колонки.

Трифторуксусная кислота (ТФУ) в качестве добавки к подвижной фазе широко используется для сложных смесей биомедицинских образцов, в основном пептидов и белков, с использованием в основном детекторов на основе УФ. Они редко используются в методах масс-спектрометрии из-за остатков, которые она может оставлять в детекторе и системе подачи растворителя, что мешает анализу и обнаружению. Тем не менее, ТФУ может быть очень эффективна для улучшения удерживания аналитов, таких как карбоновые кислоты , в приложениях, использующих другие детекторы, такие как УФ-ВИД, поскольку это довольно сильная органическая кислота. Эффекты кислот и буферов различаются в зависимости от приложения, но, как правило, улучшают хроматографическое разрешение при работе с ионизируемыми компонентами.

Обращенно-фазовые колонки довольно трудно повредить по сравнению с обычными силикагелевыми колонками благодаря экранирующему эффекту связанных гидрофобных лигандов; однако большинство обращенно-фазовых колонок состоят из алкилированных частиц силикагеля и склонны к гидролизу силикагеля при экстремальных значениях pH в подвижной фазе. Большинство типов RP-колонок не следует использовать с водными основаниями , поскольку они будут гидролизовать лежащую в основе частицу силикагеля и растворять ее. Существуют отдельные марки гибридных или усиленных частиц силикагеля для RP-колонок, которые можно использовать при экстремальных значениях pH. Использование экстремально кислых условий также не рекомендуется, поскольку они также могут гидролизовать, а также вызвать коррозию внутренних стенок металлических частей оборудования ВЭЖХ.

Как правило, в большинстве случаев колонки RP-HPLC следует промывать чистым растворителем после использования для удаления остаточных кислот или буферов и хранить в подходящем составе растворителя. Некоторые биомедицинские приложения требуют неметаллической среды для оптимального разделения. Для таких чувствительных случаев существует тест на содержание металла в колонке, заключающийся в введении образца, который представляет собой смесь 2,2'- и 4,4'- бипиридина . Поскольку 2,2'-bipy может хелатировать металл, форма пика для 2,2'-bipy будет искажена (хвостатая), когда ионы металла присутствуют на поверхности силикагеля . [ необходима цитата ] ..

Эксклюзионная хроматография

Эксклюзионная хроматография ( SEC ) [30] разделяет полимерные молекулы и биомолекулы на основе различий в их молекулярных размерах (фактически по радиусу Стокса частицы ). Процесс разделения основан на способности молекул образца проникать через поры гелевых сфер, упакованных внутри колонки, и зависит от относительного размера молекул аналита и соответствующего размера пор абсорбента. Процесс также основан на отсутствии каких-либо взаимодействий с поверхностью упаковочного материала.

Обычно выделяют два типа SEC:

  1. Гель-проникающая хроматография (ГПХ) — разделение синтетических полимеров (водных или органически растворимых). ГПХ — это мощный метод характеристики полимеров с использованием в основном органических растворителей.
  2. Гель-фильтрационная хроматография (ГФХ) — разделение водорастворимых биополимеров. ГФХ использует в основном водные растворители (обычно для водорастворимых биополимеров, таких как белки и т. д.).

Принцип разделения в SEC основан на полном или частичном проникновении высокомолекулярных веществ образца в пористые частицы неподвижной фазы во время их транспортировки через колонку. Элюент подвижной фазы выбирается таким образом, чтобы он полностью предотвращал взаимодействие с поверхностью неподвижной фазы. В этих условиях, чем меньше размер молекулы, тем больше она способна проникнуть внутрь порового пространства и перемещение через колонку занимает больше времени. С другой стороны, чем больше размер молекулы, тем выше вероятность того, что молекула не полностью проникнет в поры неподвижной фазы и даже обогнет их, таким образом, будет элюирована раньше. Молекулы разделяются в порядке убывания молекулярной массы, причем самые большие молекулы элюируются из колонки первыми, а более мелкие молекулы элюируются позже. Молекулы, размер которых больше размера пор, вообще не проникают в поры и элюируются вместе в виде первого пика на хроматограмме, и это называется общим объемом исключения, который определяет предел исключения для конкретной колонки. Небольшие молекулы полностью проникнут через поры частиц неподвижной фазы и будут элюироваться последними, отмечая конец хроматограммы, и могут выступать в качестве маркера полного проникновения.

В биомедицинских науках его обычно считают хроматографией низкого разрешения, и поэтому его часто резервируют для конечного, «полирующего» этапа очистки. Он также полезен для определения третичной структуры и четвертичной структуры очищенных белков. SEC используется в основном для анализа больших молекул, таких как белки или полимеры. SEC также работает препаративным способом, захватывая более мелкие молекулы в порах частиц. Более крупные молекулы просто проходят мимо пор, поскольку они слишком велики, чтобы войти в поры. Следовательно, более крупные молекулы протекают через колонку быстрее, чем более мелкие: то есть, чем меньше молекула, тем больше время удерживания.

Этот метод широко используется для определения молекулярной массы полисахаридов. SEC является официальным методом (предложенным Европейской фармакопеей) для сравнения молекулярной массы различных коммерчески доступных низкомолекулярных гепаринов . [31]

Ионообменная хроматография

Ионообменная хроматография ( IEC ) или ионная хроматография ( IC ) [32] — это аналитический метод разделения и определения ионных растворенных веществ в водных образцах из окружающей среды и промышленных источников, таких как металлургическая промышленность, промышленные сточные воды, в биологических системах, фармацевтических образцах, продуктах питания и т. д. Удерживание основано на притяжении между ионами растворенного вещества и заряженными участками, связанными с неподвижной фазой. Ионы растворенного вещества, заряженные так же, как и ионы на колонке, отталкиваются и элюируются без удерживания, в то время как ионы растворенного вещества, заряженные противоположно заряженным участкам колонки, удерживаются на ней. Ионы растворенного вещества, которые удерживаются на колонке, могут быть элюированы из нее путем изменения состава подвижной фазы, например, путем увеличения концентрации соли и pH или повышения температуры колонки и т. д.

Типы ионообменников включают полистирольные смолы , целлюлозные и декстрановые ионообменники (гели), а также стекло с контролируемыми порами или пористый силикагель . Полистирольные смолы допускают поперечную сшивку, что увеличивает стабильность цепи. Более высокая поперечная сшивка уменьшает отклонение, что увеличивает время уравновешивания и в конечном итоге улучшает селективность. Целлюлозные и декстрановые ионообменники обладают большими размерами пор и низкой плотностью заряда, что делает их подходящими для разделения белков.

В целом ионообменники способствуют связыванию ионов с большим зарядом и меньшим радиусом.

Увеличение концентрации противоиона (по отношению к функциональным группам в смолах) уменьшает время удерживания, поскольку создает сильную конкуренцию с растворенными ионами. Уменьшение pH уменьшает время удерживания при катионном обмене, в то время как увеличение pH уменьшает время удерживания при анионном обмене. Например, при снижении pH растворителя в катионообменной колонке больше ионов водорода могут конкурировать за позиции на анионной неподвижной фазе, тем самым элюируя слабосвязанные катионы.

Этот вид хроматографии широко используется в следующих областях: очистка воды, концентрирование микрокомпонентов, лигандообменная хроматография, ионообменная хроматография белков, анионообменная хроматография при высоких значениях pH углеводов и олигосахаридов и другие.

Биоаффинная хроматография

Высокопроизводительная аффинная хроматография (HPAC) [33] работает путем пропускания раствора образца через колонку, заполненную неподвижной фазой, которая содержит иммобилизованный биологически активный лиганд. Лиганд фактически является субстратом, который имеет специфическое связывающее сродство к целевой молекуле в растворе образца. Целевая молекула связывается с лигандом, в то время как другие молекулы в растворе образца проходят через колонку, имея небольшое или совсем не удерживаясь. Затем целевая молекула элюируется из колонки с использованием подходящего буфера для элюирования.

Этот хроматографический процесс основан на способности связанных активных веществ образовывать стабильные, специфические и обратимые комплексы благодаря их биологическому распознаванию определенных специфических компонентов образца. Образование этих комплексов предполагает участие общих молекулярных сил, таких как взаимодействие Ван-дер-Ваальса , электростатическое взаимодействие, диполь-дипольное взаимодействие, гидрофобное взаимодействие и водородная связь. Эффективная биоспецифическая связь образуется путем одновременного и согласованного действия нескольких из этих сил в дополнительных сайтах связывания.

Водная нормально-фазовая хроматография

Водная нормально-фазовая хроматография ( ANP ) также называется жидкостной хроматографией с гидрофильным взаимодействием ( HILIC ). [34] Это хроматографический метод, который охватывает область подвижной фазы между обращенно-фазовой хроматографией (RP) и органической нормально-фазовой хроматографией (ONP). HILIC используется для достижения уникальной селективности для гидрофильных соединений, [35] демонстрируя нормальный порядок элюирования фазы, используя «растворители с обращенной фазой», т. е. относительно полярные, в основном неводные растворители в подвижной фазе. [34] Многие биологические молекулы, особенно те, которые находятся в биологических жидкостях, представляют собой небольшие полярные соединения, которые плохо удерживаются обращенно-фазовой ВЭЖХ. Это сделало гидрофильную жидкостную хроматографию (HILIC) привлекательной альтернативой и полезным подходом для анализа полярных молекул. Кроме того, поскольку HILIC обычно используется с традиционными водными смесями с полярными органическими растворителями, такими как ACN и метанол, ее можно легко сочетать с MS. [35]

Изократическое и градиентное элюирование

В исследовательском подразделении ARS Natural Products Utilization Research Unit в Оксфорде, штат Миссисипи, научный сотрудник (справа) извлекает растительные пигменты, которые будут проанализированы фитофизиологом (слева) с помощью системы ВЭЖХ.

Разделение, при котором состав подвижной фазы остается постоянным на протяжении всей процедуры, называется изократическим (что означает постоянный состав ). Этот термин был придуман Чабой Хорватом , одним из пионеров ВЭЖХ. [36] [37]

Состав подвижной фазы не обязательно должен оставаться постоянным. Разделение, при котором состав подвижной фазы изменяется в процессе разделения, описывается как градиентное элюирование . [38] [39] Например, градиент может начинаться при 10% метанола в воде и заканчиваться при 90% метанола в воде через 20 минут. Два компонента подвижной фазы обычно называются «A» и «B»; A — это «слабый» растворитель, который позволяет растворенному веществу элюироваться только медленно, в то время как B — это «сильный» растворитель, который быстро элюирует растворенные вещества из колонки. В обращенно-фазовой хроматографии растворителем A часто является вода или водный буфер, в то время как B — это органический растворитель, смешивающийся с водой, такой как ацетонитрил , метанол, ТГФ или изопропанол .

При изократическом элюировании ширина пика увеличивается со временем удерживания линейно в соответствии с уравнением для N, числа теоретических тарелок. Это может быть серьезным недостатком при анализе образца, содержащего аналиты с широким диапазоном факторов удерживания. При использовании более слабой подвижной фазы время выполнения увеличивается, что приводит к тому, что медленно элюирующиеся пики становятся широкими, что приводит к снижению чувствительности. Более сильная подвижная фаза улучшит проблемы времени выполнения и уширения более поздних пиков, но приведет к уменьшению разделения пиков, особенно для быстро элюирующихся аналитов, у которых может быть недостаточно времени для полного разделения. Эта проблема решается путем изменения состава подвижной фазы градиентного элюирования.

Схема градиентного элюирования. Увеличение силы подвижной фазы последовательно элюирует аналиты, имеющие различную силу взаимодействия с неподвижной фазой.

Начиная с более слабой подвижной фазы и усиливая ее во время выполнения, градиентное элюирование уменьшает удерживание поздно элюирующихся компонентов, так что они элюируются быстрее, давая более узкие (и более высокие) пики для большинства компонентов, а также позволяя адекватно разделять ранее элюирующиеся компоненты. Это также улучшает форму пика для хвостовых пиков, поскольку увеличивающаяся концентрация органического элюента выдвигает хвостовую часть пика вперед. Это также увеличивает высоту пика (пик выглядит «острее»), что важно при анализе следов. Градиентная программа может включать внезапные «ступенчатые» увеличения процентного содержания органического компонента или различные наклоны в разное время — все в соответствии с желанием оптимального разделения за минимальное время.

При изократическом элюировании порядок удерживания не меняется, если размеры колонки (длина и внутренний диаметр) изменяются – то есть пики элюируются в том же порядке. При градиентном элюировании, однако, порядок элюирования может меняться при изменении размеров или скорости потока. если они не масштабируются в соответствии с изменением [40]

Движущая сила обращенно-фазовой хроматографии берет начало в высоком порядке структуры воды. Роль органического компонента подвижной фазы заключается в снижении этого высокого порядка и, таким образом, в снижении замедляющей силы водного компонента.

Параметры

Теоретический

Теория высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) по своей сути совпадает с общей теорией хроматографии. [41] Эта теория была использована в качестве основы для испытаний пригодности системы , как это можно увидеть в Фармакопее США [42], которые представляют собой набор количественных критериев, проверяющих пригодность системы ВЭЖХ для требуемого анализа на любом его этапе.

Это отношение также представлено в виде нормализованного безразмерного фактора, известного как фактор удерживания или параметр удерживания, который является экспериментальным измерением отношения емкости, как показано на рисунке критериев эффективности. t R — это время удерживания определенного компонента, а t 0 — это время, необходимое для того, чтобы неудерживаемое вещество прошло через систему без какого-либо удерживания, поэтому его называют временем пустоты.

Соотношение между коэффициентами удерживания, k', каждых двух соседних пиков на хроматограмме используется для оценки степени разделения между ними и называется коэффициентом селективности , α, как показано на графике критериев эффективности.

Число тарелок N как критерий эффективности системы было разработано для изократических условий, т. е. постоянного состава подвижной фазы на протяжении всего цикла. В градиентных условиях, когда подвижная фаза изменяется со временем во время хроматографического цикла, более целесообразно использовать параметр пиковой емкости P c в качестве меры эффективности системы. [43] Определение пиковой емкости в хроматографии - это количество пиков, которые можно разделить в пределах окна удерживания для определенного предопределенного фактора разрешения, обычно ~1. Его также можно представить как время выполнения, измеренное в количестве средних ширин пиков. Уравнение показано на рисунке критериев производительности. В этом уравнении tg - это время градиента, а w(ave) - это средняя ширина пиков у основания.

Основные уравнения хроматографии
Количественные параметры и уравнения, определяющие степень производительности хроматографической системы

Параметры в значительной степени выводятся из двух наборов хроматографической теории: теории пластин (как части распределительной хроматографии ) и теории скорости хроматографии / уравнения Ван-Деемтера . Конечно, их можно применять на практике посредством анализа хроматограмм ВЭЖХ, хотя теория скорости считается более точной теорией.

Они аналогичны расчету фактора удерживания для разделения с помощью бумажной хроматографии , но описывают, насколько хорошо ВЭЖХ разделяет смесь на два или более компонентов, которые обнаруживаются как пики (полосы) на хроматограмме. Параметрами ВЭЖХ являются: фактор эффективности ( N ), фактор удерживания (каппа-штрих) и фактор разделения (альфа). Вместе эти факторы являются переменными в уравнении разрешения, которое описывает, насколько хорошо пики двух компонентов разделены или перекрывают друг друга. Эти параметры в основном используются только для описания обращенно-фазовых и нормально-фазовых разделений ВЭЖХ, поскольку эти разделения, как правило, более тонкие, чем другие режимы ВЭЖХ ( например , ионный обмен и исключение по размеру).

Объем пустот — это объем пространства в колонке, занятый растворителем. Это пространство внутри колонки, которое находится за пределами внутреннего упаковочного материала колонки. Объем пустот измеряется на хроматограмме по первому обнаруженному пику компонента, который обычно является растворителем, присутствующим в смеси образца; в идеале растворитель образца протекает через колонку, не взаимодействуя с колонкой, но все еще обнаруживается в отличие от растворителя ВЭЖХ. Объем пустот используется в качестве поправочного коэффициента.

Фактор эффективности ( N ) на практике измеряет, насколько острыми являются пики компонентов на хроматограмме, как отношение площади пика компонента («времени удерживания») к ширине пиков в их самой широкой точке (на базовой линии). Высокие, острые и относительно узкие пики указывают на то, что метод разделения эффективно удалил компонент из смеси; высокая эффективность. Эффективность сильно зависит от колонки ВЭЖХ и используемого метода ВЭЖХ. Фактор эффективности является синонимом числа тарелок и «числа теоретических тарелок».

Фактор удерживания ( каппа-штрих ) измеряет, как долго компонент смеси прилипает к колонке, измеряется площадью под кривой его пика на хроматограмме (поскольку хроматограммы ВЭЖХ являются функцией времени). Каждый пик хроматограммы будет иметь свой собственный фактор удерживания ( например , каппа 1 для фактора удерживания первого пика). Этот фактор может быть скорректирован с помощью свободного объема колонки.

Фактор разделения ( альфа ) — это относительное сравнение того, насколько хорошо были разделены два соседних компонента смеси ( т. е . две соседние полосы на хроматограмме). Этот фактор определяется как отношение факторов удерживания пары соседних пиков хроматограммы и может также быть скорректирован с учетом свободного объема колонки. Чем больше значение фактора разделения превышает 1,0, тем лучше разделение, до значения примерно 2,0, за пределами которого метод ВЭЖХ, вероятно, не нужен для разделения. Уравнения разрешения связывают три фактора таким образом, что высокая эффективность и факторы разделения улучшают разрешение пиков компонентов при разделении ВЭЖХ.

Внутренний диаметр

Трубки в системе наножидкостной хроматографии (нано-ЖХ), используемые для очень низких скоростей потока

Внутренний диаметр (ID) колонки ВЭЖХ является важным параметром. [44] Он может влиять на реакцию обнаружения, когда уменьшается из-за уменьшенной боковой диффузии полосы растворенного вещества. Он также может влиять на селективность разделения, когда скорость потока и объемы инъекции не уменьшаются или не увеличиваются пропорционально меньшему или большему используемому диаметру, как в изократическом, так и в градиентном режимах. [45] Он определяет количество аналита, которое может быть загружено в колонку. Колонки большего диаметра обычно используются в препаративных применениях, таких как очистка лекарственного продукта для последующего использования. [46] Колонки с низким ID имеют улучшенную чувствительность и меньшее потребление растворителя в недавней сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии (UHPLC). [47]

Колонки с большим внутренним диаметром (более 10 мм) используются для очистки пригодного к использованию количества материала ввиду их большой емкости.

Аналитические масштабные колонки (4,6 мм) были наиболее распространенным типом колонок, хотя более узкие колонки [47] быстро набирают популярность. Они используются в традиционном количественном анализе образцов и часто используют детектор поглощения UV-Vis .

Колонки с узким отверстием (1–2 мм) используются в случаях, когда требуется большая чувствительность, либо с использованием специальных детекторов УФ-видимого диапазона, флуоресцентного обнаружения, либо с использованием других методов обнаружения, таких как жидкостная хроматография-масс-спектрометрия.

Капиллярные колонки (менее 0,3 мм) используются почти исключительно с альтернативными средствами обнаружения, такими как масс-спектрометрия . Обычно они изготавливаются из капилляров из плавленого кварца , а не из трубок из нержавеющей стали, которые используются в более крупных колонках.

Размер частиц

Большинство традиционных методов ВЭЖХ выполняется с неподвижной фазой, прикрепленной к внешней стороне небольших сферических частиц кремнезема (очень маленькие шарики). Эти частицы бывают разных размеров, наиболее распространенными являются шарики размером 5 мкм. Более мелкие частицы, как правило, обеспечивают большую площадь поверхности и лучшее разделение, но давление, необходимое для оптимальной линейной скорости, увеличивается обратно пропорционально квадрату диаметра частиц. [48] [49] [50]

Согласно уравнениям [51] скорости колонки, эффективности и обратного давления , уменьшение диаметра частиц вдвое и сохранение размера колонки тем же самым удвоит скорость колонки и эффективность; но в четыре раза увеличит обратное давление. А мелкие частицы HPLC также могут уменьшить расширение ширины. [52] Более крупные частицы используются в препаративной HPLC (диаметр колонки от 5 см до >30 см) и для не-HPLC применений, таких как твердофазная экстракция .

Размер пор

Многие неподвижные фазы пористые, что обеспечивает большую площадь поверхности. Маленькие поры обеспечивают большую площадь поверхности, в то время как больший размер пор обеспечивает лучшую кинетику, особенно для более крупных аналитов. Например, белок, который лишь немного меньше поры, может войти в пору, но не может легко покинуть ее, попав внутрь.

Давление насоса

Насосы различаются по мощности давления, но их производительность измеряется по их способности обеспечивать постоянный и воспроизводимый объемный расход . Давление может достигать 60 МПа (6000  фунтов силы/дюйм 2 ), или около 600 атмосфер. Современные системы ВЭЖХ были усовершенствованы для работы при гораздо более высоких давлениях и, следовательно, способны использовать гораздо меньшие размеры частиц в колонках (<2 мкм). Эти системы «сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии» или УВЭЖХ, которые также могут быть известны как системы хроматографии сверхвысокого давления, [53] могут работать при давлении до 120 МПа (17 405 фунтов силы/дюйм 2 ), или около 1200 атмосфер. [54] Термин «УЭЖХ» [55] является торговой маркой Waters Corporation , но иногда используется для обозначения более общей техники УВЭЖХ.

Детекторы

Детекторы ВЭЖХ делятся на две основные категории: универсальные или селективные. Универсальные детекторы обычно измеряют объемное свойство ( например , показатель преломления ) путем измерения разницы физических свойств между подвижной фазой и подвижной фазой с растворенным веществом, в то время как селективные детекторы измеряют свойство растворенного вещества ( например , поглощение в УФ-видимом диапазоне ) путем простого реагирования на физическое или химическое свойство растворенного вещества. [56] ВЭЖХ чаще всего использует детектор поглощения в УФ-видимом диапазоне ; однако может использоваться широкий спектр других хроматографических детекторов . Универсальным детектором, который дополняет детектор поглощения в УФ-видимом диапазоне, является детектор заряженных аэрозолей (CAD). Типом обычно используемого детектора являются детекторы показателя преломления, которые обеспечивают показания путем измерения изменений показателя преломления элюента при его движении через проточную ячейку. В некоторых случаях можно использовать несколько детекторов, например, LCMS обычно объединяет УФ-видимый диапазон с масс-спектрометром.

При использовании с электрохимическим детектором (ECD) HPLC-ECD селективно обнаруживает нейротрансмиттеры , такие как: норадреналин , дофамин , серотонин , глутамат , ГАМК, ацетилхолин и другие в приложениях нейрохимического анализа. [57] HPLC-ECD обнаруживает нейротрансмиттеры в фемтомолярном диапазоне. Другие методы обнаружения нейротрансмиттеров включают жидкостную хроматографию-масс-спектрометрию, ELISA или радиоиммуноанализы.

Автосэмплеры

Большое количество образцов может быть автоматически введено в систему ВЭЖХ с помощью автосамплеров ВЭЖХ. Кроме того, автосамплеры ВЭЖХ имеют объем и технику ввода, которые абсолютно одинаковы для каждого ввода, следовательно, они обеспечивают высокую степень точности объема ввода. Можно включить перемешивание образца в камере для отбора проб, тем самым способствуя однородности. [58]

Приложения

Производство

ВЭЖХ имеет множество применений как в лабораторной, так и в клинической науке. Это распространенная методика, используемая в фармацевтической разработке, поскольку она является надежным способом получения и обеспечения чистоты продукта. [59] Хотя ВЭЖХ может производить чрезвычайно высококачественные (чистые) продукты, это не всегда основной метод, используемый при производстве массовых лекарственных материалов. [60] Согласно Европейской фармакопее, ВЭЖХ используется только в 15,5% синтезов. [61] Однако она играет роль в 44% синтезов в фармакопее США. [62] Это может быть связано с различиями в денежных и временных ограничениях, поскольку ВЭЖХ в больших масштабах может быть дорогостоящей методикой. К сожалению, увеличение специфичности, точности и достоверности, которое происходит с ВЭЖХ, соответствует увеличению стоимости.

Юридический

Этот метод также используется для обнаружения запрещенных наркотиков в различных образцах. [63] Наиболее распространенным методом обнаружения наркотиков был иммуноферментный анализ . [64] Этот метод гораздо более удобен. Однако удобство достигается за счет специфичности и охвата широкого спектра наркотиков, поэтому в качестве альтернативного метода использовался ВЭЖХ. Поскольку ВЭЖХ является методом определения (и, возможно, повышения) чистоты, использование только ВЭЖХ для оценки концентраций наркотиков было несколько недостаточным. Поэтому ВЭЖХ в этом контексте часто выполняется в сочетании с масс-спектрометрией . [65] Использование жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС) вместо газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС) позволяет избежать необходимости дериватизации с помощью ацетилирующих или алкилирующих агентов, что может быть обременительным дополнительным шагом. [66] ЖХ-МС использовался для обнаружения различных агентов, таких как допинговые агенты, метаболиты наркотиков, конъюгаты глюкуронида, амфетамины, опиоиды, кокаин, бензодиазепины, кетамин, ЛСД, каннабис и пестициды. [67] [68] Проведение ВЭЖХ в сочетании с масс-спектрометрией снижает абсолютную необходимость в стандартизации экспериментальных запусков ВЭЖХ.

Исследовать

Аналогичные анализы могут быть выполнены в исследовательских целях, обнаруживая концентрации потенциальных клинических кандидатов, таких как противогрибковые и противоастматические препараты. [69] Этот метод, очевидно, также полезен при наблюдении за несколькими видами в собранных образцах, но требует использования стандартных растворов, когда ищется информация о видовой идентичности. Он используется как метод подтверждения результатов реакций синтеза, поскольку чистота имеет важное значение в этом типе исследований. Однако масс-спектрометрия по-прежнему является более надежным способом идентификации видов.

Медицинские науки и здравоохранение

Медицинское применение ВЭЖХ обычно использует масс-спектрометр (МС) в качестве детектора, поэтому метод называется ЖХ-МС [70] или ЖХ-МС/МС для тандемной МС, где два типа МС работают последовательно. [71] Когда прибор ВЭЖХ подключен к более чем одному детектору, он называется дефисной системой ЖХ. [ требуется ссылка ] Фармацевтические приложения [72] являются основными пользователями ВЭЖХ, ЖХ-МС и ЖХ-МС/МС. [73] Сюда входят разработка лекарств [74] и фармакология, которая является научным изучением воздействия лекарств и химических веществ на живые организмы, [75] персонализированная медицина, [76] общественное здравоохранение [77] [78] и диагностика. [79] В то время как моча является наиболее распространенной средой для анализа концентраций лекарств, сыворотка крови является образцом, собираемым для большинства медицинских анализов с помощью ВЭЖХ. [80] Одной из важнейших функций ЖХ-МС и ЖХ-МС/МС в клинической лаборатории является скрининг новорожденных (СН) на предмет нарушений обмена веществ [81] и последующая диагностика. [82] [83] Образцы крови младенцев поставляются в форме сухих пятен крови (СКП), [84] которые легко приготовить и транспортировать, что обеспечивает безопасную и доступную диагностику как на местном, так и на глобальном уровне.

Другие методы обнаружения молекул, которые полезны для клинических исследований, были протестированы против ВЭЖХ, а именно иммуноанализы. В одном из примеров этого конкурентные анализы связывания белков (CPBA) и ВЭЖХ сравнивались по чувствительности при обнаружении витамина D. Полезные для диагностики дефицита витамина D у детей, было обнаружено, что чувствительность и специфичность этого CPBA достигли только 40% и 60% соответственно от мощности ВЭЖХ. [85] Хотя это дорогой инструмент, точность ВЭЖХ практически не имеет себе равных.

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ Казакевич, Юрий; ЛоБрутто, Росарио, ред. (2007). ВЭЖХ для ученых-фармацевтов . Хобокен, Нью-Джерси: Wiley-Interscience. ISBN 978-0-471-68162-5.
  2. ^ ab "Хроматография". web.njit.edu . Получено 2024-08-05 .
  3. ^ Чайтали Даттатрай Харде1, д-р Амол Навнат Кхедкар, Вайшнави Санджай Саке. «Обзор высокоэффективной жидкостной хроматографии» (PDF) .{{cite web}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка ) CS1 maint: числовые имена: список авторов ( ссылка )
  4. ^ Левин, Шуламит (январь 2004 г.). «Обращенно-фазовые стационарные фазы в фармацевтических науках». Журнал жидкостной хроматографии и смежных технологий . 27 (7–9): 1353–1376. doi :10.1081/JLC-120030606. ISSN  1082-6076. S2CID  97490509.
  5. ^ Gerber, F.; Krummen, M.; Potgeter, H.; Roth, A.; Siffrin, C.; Spoendlin, C. (2004). «Практические аспекты быстрой обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием колонок с насадкой из частиц размером 3 мкм и монолитных колонок в фармацевтической разработке и производстве, работающих в соответствии с текущей надлежащей производственной практикой». Журнал хроматографии A. 1036 ( 2): 127–133. doi :10.1016/j.chroma.2004.02.056. PMID  15146913.
  6. ^ Бэйн, Ширли; Карлин, Мишель (2017). Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в судебной экспертизе (1-е изд.). CRC Press. ISBN 9780429251962.
  7. ^ Сегер, Кристоф; Зальцманн, Линда (2020-08-01). «Спустя еще одно десятилетие: ЖХ–МС/МС стала рутиной в клинической диагностике». Клиническая биохимия . Развитие и применение масс-спектрометрии в лабораторной медицине. 82 : 2–11. doi : 10.1016/j.clinbiochem.2020.03.004 . ISSN  0009-9120. PMID  32188572. S2CID  213186669.
  8. ^ Unger, KK, ред. (1979-01-01), Глава 5 Силикагелевые колонки – процедуры набивки и эксплуатационные характеристики, Библиотека хроматографии, т. 16, Elsevier, стр. 169–186, doi :10.1016/S0301-4770(08)60809-X, ISBN 978-0-444-41683-4, получено 2024-08-05
  9. ^ Сюй, Янь; Цао, Цин; Швец, Франтишек; Фреше, Жан М. Дж. (2010-04-15). «Пористая полимерная монолитная колонка с наночастицами золота, связанными с поверхностью, для захвата и разделения пептидов, содержащих цистеин». Аналитическая химия . 82 (8): 3352–3358. doi :10.1021/ac1002646. ISSN  0003-2700. PMC 2875083. PMID 20302345  . 
  10. ^ Panella, Cristina; Ferretti, Rosella; Casulli, Adriano; Cirilli, Roberto (2019-10-01). «Влияние температуры и состава элюента на разделение энантиомеров карведилола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на иммобилизованных амилозе-основанных хиральных неподвижных фазах». Journal of Pharmaceutical Analysis . 9 (5): 324–331. doi :10.1016/j.jpha.2019.04.002. ISSN  2095-1779. PMC 6951491. PMID  31929941. 
  11. ^ "Молекулярное взаимодействие неподвижной фазы ВЭЖХ". www.imtakt.com . Получено 2024-08-08 .
  12. ^ Кадлецова, Зузана; Каликова, Квета; Фолпрехтова, Дениса; Тесаржова, Ева; Гилар, Мартин (16 августа 2020 г.). «Метод оценки ионных взаимодействий в жидкостной хроматографии». Журнал хроматографии А. 1625 : 461301. doi : 10.1016/j.chroma.2020.461301. ISSN  0021-9673. ПМИД  32709344.
  13. ^ Донг, Майкл (2018). «Десять следствий здравого смысла в фармацевтическом анализе с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии». LCGC Europe . LCGC Europe-08-01-2018. 31 (8): 432–436.
  14. ^ Снайдер, Ллойд Р.; Киркланд, Джозеф Дж.; Глайх, Джозеф Л. (2012). Разработка практического метода ВЭЖХ (2-е изд.). John Wiley & Sons.
  15. ^ Макмастер, Марвин С. (2007). HPLC: практическое руководство пользователя (2-е изд.). Хобокен, Нью-Джерси: Wiley-Interscience. ISBN 978-0-471-75401-5.
  16. ^ Ханаи, Тосихико; Ханаи, Т. (1999). ВЭЖХ: практическое руководство . Монографии RSC по хроматографии. Королевское химическое общество. Кембридж: Королевское химическое общество. ISBN 978-0-85404-515-0.
  17. ^ ab Karger, Barry L. (1997). "HPLC: Early and Recent Perspectives". Журнал химического образования . 74 (1): 45. Bibcode : 1997JChEd..74...45K. doi : 10.1021/ed074p45.
  18. ^ abcdef Генри, Ричард А. (1 февраля 2009 г.) «Ранние дни ВЭЖХ в компании Dupont» Архивировано 01.08.2020 в Wayback Machine . Хроматография онлайн. Avanstar Communications Inc.
  19. ^ Гиддингс, Кэлвин (1965). Динамика хроматографии: принципы и теория . Марсель Деккер.
  20. ^ ab Левин, Шуламит (2017). Гринберг, Нелу; Карр, Питер В. (ред.). Твердотельные или полностью пористые колонки в сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии — какой путь выбрать для лучшей эффективности разделения? . Достижения в хроматографии. Т. 55 (1-е изд.). Бока-Ратон: CRC Press. стр. 185–203. ISBN 9781315158075.
  21. ^ Айлер, Р.К. (1979) Химия кремния . John Wiley & Sons. Нью-Йорк.
  22. ^ Каргер, Б. Л.; Берри, Л. В. (1971). «Быстрое жидкостно-хроматографическое разделение стероидов на колонках, сильно загруженных неподвижной фазой». Clin. Chem . 17 (8): 757–64. doi : 10.1093/clinchem/17.8.757 . PMID  4254537.
  23. ^ Neue, Uwe D. (1997). Колонки ВЭЖХ: теория, технология и практика . Нью-Йорк, Нью-Йорк: Wiley VCH. ISBN 978-0-471-19037-0.
  24. ^ Гиддингс, Дж. Кэлвин (1965) Динамика хроматографии, часть I. Принципы и теория . Marcel Dekker, Inc., Нью-Йорк. стр. 281.
  25. ^ Эттре, К. (2001). "Вехи в хроматографии: рождение распределительной хроматографии" (PDF) . LCGC . 19 (5): 506–512. Архивировано из оригинала (PDF) 2016-03-04 . Получено 2016-02-26 .
  26. ^ Мартин, А. Дж. П.; Синг, Р. Л. М. (1941). «Разделение высших моноаминокислот методом противоточной экстракции жидкость-жидкость: аминокислотный состав шерсти». Biochemical Journal . 35 (1–2): 91–121. doi :10.1042/bj0350091. PMC 1265473 . PMID  16747393. 
  27. ^ Линдсей, С.; Кили, Д. (1987). Высокоэффективная жидкостная хроматография . Wiley. OSTI  7013902.из обзора Hung, LB; Parcher, JF; Shores, JC; Ward, EH (1988). «Теоретические и экспериментальные основы программирования покрытия поверхности в газо-твердой хроматографии с адсорбируемым газом-носителем». J. Am. Chem. Soc . 110 (11): 1090–1096. doi :10.1021/ac00162a003.
  28. ^ Вытеснительная хроматография. Sacheminc.com. Получено 2011-06-07. Архивировано 15 сентября 2008 года на Wayback Machine
  29. ^ ЛоБрутто, Росарио; Казакевич, Юрий (2007-01-22), Казакевич, Юрий; ЛоБрутто, Росарио (ред.), «Обращенно-фазовая ВЭЖХ», ВЭЖХ для ученых-фармацевтов (1-е изд.), Wiley, стр. 139–239, doi :10.1002/9780470087954.ch4, ISBN 978-0-471-68162-5, получено 2023-10-10
  30. ^ Казакевич, Юрий; ЛоБрутто, Росарио (2007-01-22), Казакевич, Юрий; ЛоБрутто, Росарио (ред.), «Эксклюзионная хроматография», HPLC для ученых-фармацевтов (1-е изд.), Wiley, стр. 263–279, doi :10.1002/9780470087954.ch6, ISBN 978-0-471-68162-5, получено 2023-10-10
  31. ^ Маллой, Барбара; Хит, Алан; Шрайвер, Захари; Джеймейсон, Фабиан; Аль Хаким, Али; Моррис, Тина С.; Шаек, Анита Й. (2014-08-01). "Методология анализа гепарина USP: хроматографическое определение молекулярно-массовых распределений для гепарина натрия". Аналитическая и биоаналитическая химия . 406 (20): 4815–4823. doi :10.1007/s00216-014-7940-3. hdl :1721.1/104914. ISSN  1618-2650. PMID  24958344. S2CID  492085.
  32. ^ Фриц, Джеймс С.; Гджерде, Дуглас Т. (25 апреля 2000 г.). Ионная хроматография (1-е изд.). Уайли. дои : 10.1002/9783527613243. ISBN 978-3-527-29914-0.
  33. ^ Чжан, Чэньхуа; Родригес, Эллиотт; Би, Конг; Чжэн, Сивэй; Суреш, Доддавэнкатана; Су, Кюнга; Ли, Чжао; Элсебаэй, Фаузи; Хаге, Дэвид С. (2018). «Высокопроизводительная аффинная хроматография и связанные с ней методы разделения для анализа биологических и фармацевтических агентов». Аналитик . 143 (2): 374–391. Bibcode :2018Ana...143..374Z. doi :10.1039/C7AN01469D. ISSN  1364-5528. PMC 5768458 . PMID  29200216. 
  34. ^ ab McCalley, David V. (2017-11-10). «Понимание и управление разделением в жидкостной хроматографии с гидрофильным взаимодействием». Журнал хроматографии A. 1523 : 49–71. doi : 10.1016/j.chroma.2017.06.026. ISSN  1873-3778. PMID  28668366.
  35. ^ ab Бушевски, Богуслав; Нога, Сильвия (2012). «Жидкостная хроматография с гидрофильным взаимодействием (HILIC) — мощный метод разделения». Аналитическая и биоаналитическая химия . 402 (1): 231–247. doi :10.1007/s00216-011-5308-5. ISSN  1618-2650. PMC 3249561. PMID 21879300  . 
  36. ^ Шеллингер, Адам П.; Карр, Питер В. (2006). «Изократическая и градиентная элюционная хроматография: сравнение с точки зрения скорости, воспроизводимости удерживания и количественного определения». Журнал хроматографии A. 1109 ( 2): 253–266. doi :10.1016/j.chroma.2006.01.047. PMID  16460742. S2CID  26072994.
  37. ^ Эттре, Л. С.; Златкис, А., ред. (1979), «Csaba Horváth», Библиотека журнала хроматографии , 75 лет хроматографии: исторический диалог, т. 17, Elsevier, стр. 151–158, doi :10.1016/s0301-4770(08)60645-4, ISBN 9780444417541, получено 2023-10-15
  38. ^ Снайдер, Ллойд Р.; Долан, Джон В. (2006). Высокоэффективное градиентное элюирование: практическое применение модели линейной силы растворителя . Wiley Interscience. ISBN 978-0470055519.
  39. ^ Шеллингер, Адам П.; Карр, Питер В. (2006). «Изократическая и градиентная элюционная хроматография: сравнение с точки зрения скорости, воспроизводимости удерживания и количественного определения». Журнал хроматографии A. 19-й Международный симпозиум по микромасштабным биосепарациям. 1109 (2): 253–266. doi :10.1016/j.chroma.2006.01.047. ISSN  0021-9673. PMID  16460742. S2CID  26072994.
  40. ^ Долан, Джон В. (2014). «Масштабирование метода ЖХ, часть II: Градиентное разделение». LCGC North America . 32 (3): 188–193.
  41. ^ Мартин, А. Дж. П.; Синг, Р. Л. М. (1941-12-01). «Новая форма хроматограммы с использованием двух жидких фаз». Biochemical Journal . 35 (12): 1358–1368. doi :10.1042/bj0351358. ISSN  0306-3283. PMC 1265645 . PMID  16747422. 
  42. ^ https://www.usp.org/sites/default/files/usp/document/harmonization/gen-chapter/harmonization-november-2021-m99380.pdf [ URL PDF без ссылки ] , ХРОМАТОГРАФИЯ, этап 4 гармонизации (1 декабря 2022 г.)
  43. ^ Wren, Stephen AC (2005-06-15). "Пиковая емкость в градиентной ультраэффективной жидкостной хроматографии (UPLC)". Журнал фармацевтического и биомедицинского анализа . 38 (2): 337–343. doi :10.1016/j.jpba.2004.12.028. ISSN  0731-7085. PMID  15925228.
  44. ^ Зеленянски, Дора; Фелингер, Аттила (2020-10-01). «Влияние оборудования колонки на эффективность в жидкостной хроматографии (ЖХ)». LCGC Europe . LCGC Europe-10-01-2020. 33 (10): 498–504.
  45. ^ Долан, Джон (2014). «Масштабирование метода ЖХ, часть II: Градиентное разделение». LCGC North America . LCGC North America-03-01-2014. 32 (3): 188–193.
  46. ^ Йенсен, Оле Элванг; Кидал, Штеффен (2006-03-01). «Использование объемного потока для масштабирования хроматографических процессов». BioPharm International . BioPharm International-03-01-2006. 19 (3).
  47. ^ ab Walter, Thomas H.; Andrews, Richard W. (2014). «Последние инновации в колонках и приборах для УВЭЖХ». Тенденции в аналитической химии . 63 : 14–20. doi : 10.1016/j.trac.2014.07.016 . ISSN  0165-9936.
  48. ^ Majors, Ronald E.. (2010-09-07) Быстрая и сверхбыстрая ВЭЖХ на пористых частицах размером менее 2 мкм — куда мы идем отсюда? – LC-GC Europe. Lcgceurope.com. Получено 2011-06-07.
  49. ^ Сян, Y.; Лю Y.; Ли ML (2006). «Жидкостная хроматография сверхвысокого давления с использованием повышенной температуры». Журнал хроматографии A. 1104 ( 1–2): 198–202. doi :10.1016/j.chroma.2005.11.118. PMID  16376355.
  50. ^ Хорват, Ч.; Прейсс Б.А.; Липский С.Р. (1967). «Быстрая жидкостная хроматография. Исследование рабочих параметров и разделение нуклеотидов на пелликулярных ионообменниках». Аналитическая химия . 39 (12): 1422–1428. doi :10.1021/ac60256a003. PMID  6073805.
  51. ^ Нгуен, Дао Т.-Т.; Гийарм, Дэви; Рудаз, Серж; Вейтей, Жан-Люк (2006). «Быстрый анализ в жидкостной хроматографии с использованием частиц малого размера и высокого давления». Журнал науки о разделении . 29 (12): 1836–1848. doi : 10.1002/jssc.200600189 . ISSN  1615-9306. PMID  16970187.
  52. ^ Гритти, Фабрис; Гиошон, Жорж (2013). «Уравнение Ван Деемтера: предположения, ограничения и корректировка современной высокоэффективной жидкостной хроматографии». Журнал хроматографии A. 1302 : 1–13. doi : 10.1016/j.chroma.2013.06.032. PMID  23838304.
  53. ^ Сян, Яньцяо; Лю, Яньшэн; Ли, Милтон Л. (2006). «Жидкостная хроматография сверхвысокого давления с использованием повышенной температуры». Журнал хроматографии A. 1104 ( 1–2): 198–202. doi :10.1016/j.chroma.2005.11.118. PMID  16376355.
  54. ^ 1290 Infinity Quaternary Pump Архивировано 2015-11-20 на Wayback Machine . Agilent
  55. ^ waters. "Торговые марки: Waters". www.waters.com .
  56. ^ К., Робардс (1994). Принципы и практика современных хроматографических методов . Хаддад, П. Р., Джексон, П. Э. Амстердам: Elsevier/Academic Press. ISBN 9780080571782. OCLC  815471219.
  57. ^ "Основы электрохимического обнаружения (ЭХД)". Amuza Inc.
  58. ^ Маркович, Омер; Оттеле, Джим; Вельдман, Обе; Отто, Сиджен (2020). «Автоматизированное устройство для непрерывного перемешивания при отборе проб в системах жидкостной хроматографии». Communications Chemistry . 3 ( 1): 180. doi : 10.1038/s42004-020-00427-5 . PMC 9814086. PMID  36703458. 
  59. ^ Гербер, Фредерик (май 2004 г.). «Практические аспекты быстрой обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием колонок с частицами размером 3 мкм и монолитных колонок в фармацевтической разработке и производстве, работающих в соответствии с текущей надлежащей производственной практикой». Журнал хроматографии . 1036 (2): 127–33. doi :10.1016/j.chroma.2004.02.056. PMID  15146913.
  60. ^ Сиддики, Масум Раза; Аль-Отман, Зейд А.; Рахман, Нафисур (2013). «Аналитические методы в фармацевтическом анализе: обзор». Arabian Journal of Chemistry . 10 : S1409–S1421. doi : 10.1016/j.arabjc.2013.04.016 .
  61. ^ Европейская фармакопея , 2002. четвертое издание, Совет Европы, Страсбург.
  62. ^ Фармакопея США , 2004. 27-е издание. The USP Convention Inc., Роквилл, Мэриленд.
  63. ^ Мероне, Джузеппе М.; Тарталья, Анжела; Росси, Сандра; Сантавенере, Франческо; Бассотти, Элиза; Д'Овидио, Кристиан; Бонелли, Мартина; Розато, Энрика; де Грация, Уго; Локателли, Марчелло; Савини, Фабио (2021). «Быстрое количественное определение запрещенных веществ с помощью ЖХ-МС/МС в твердых и жидких неизвестных изъятых образцах». Аналитическая химия . 93 (49): 16308–16313. doi : 10.1021/acs.analchem.1c03310. ISSN  0003-2700. ПМЦ 8674870 . ПМИД  34843645. 
  64. ^ Песке, Амадео; Розенталь, Мюррей; Уэст, Роберт; Уэст, Кэмерон; Крюс, Бриджит; Микель, Чарльз; Алмазан, Перла; Латышев, Сергей (2010-06-01). «Оценка диагностической точности жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии по сравнению с иммуноферментным тестированием лекарств у пациентов с болью». Pain Physician . 13 (3): 273–281. PMID  20495592.
  65. ^ Tsai, I.-Lin; Weng, Te-I.; Tseng, Yufeng J.; Tan, Happy Kuy-Lok; Sun, Hsiao-Ju; Kuo, Ching-Hua (2013-12-01). «Скрининг и подтверждение 62 наркотиков, вызывающих злоупотребление, и их метаболитов в моче с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрией». Журнал аналитической токсикологии . 37 (9): 642–651. doi : 10.1093/jat/bkt083 . PMID  24084874.
  66. ^ Weinmann, W.; Renz, M.; Vogt, S.; Pollak, S. (2000-01-01). «Автоматизированная твердофазная экстракция и двухэтапная дериватизация для одновременного анализа основных запрещенных наркотиков в сыворотке с помощью ГХ/МС». International Journal of Legal Medicine . 113 (4): 229–235. doi :10.1007/s004149900098. PMID  10929239. S2CID  20451772.
  67. ^ Колмонен, Марджо; Лейнонен, Антти; Пеландер, Анна; Оянперя, Илкка (28 февраля 2007 г.). «Общий метод выявления допинговых веществ в моче человека путем твердофазной экстракции и жидкостной хроматографии/времяпролетной масс-спектрометрии». Аналитика Химика Акта . 585 (1): 94–102. Бибкод : 2007AcAC..585...94K. дои : 10.1016/j.aca.2006.12.028. ПМИД  17386652.
  68. ^ Пеландер, Анна; Оянперя, Илкка; Лакс, Суви; Расанен, Ильпо; Вуори, Эркки (1 ноября 2003 г.). «Токсикологический скрининг с идентификацией метаболитов по формулам методом жидкостной хроматографии / времяпролетной масс-спектрометрии». Аналитическая химия . 75 (21): 5710–5718. дои : 10.1021/ac030162o. ПМИД  14588010.
  69. ^ Nobilis, Milan; Pour, Milan; Senel, Petr; Pavlík, Jan; Kunes, Jirí; Voprsalová, Marie; Kolárová, Lenka; Holcapek, Michal (2007-06-15). "Метаболическое профилирование потенциального противогрибкового препарата 3-(4-бромфенил)-5-ацетоксиметил-2,5-дигидрофуран-2-она в моче мышей с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-фотодиодной матрицей и масс-спектрометрическим детектированием". Journal of Chromatography B. 853 ( 1–2): 10–19. doi :10.1016/j.jchromb.2007.02.045. PMID  17400036.
  70. ^ Гу, Джатин; Патель, Кумар; Шах, Дирен (2016). «ПРИМЕНЕНИЕ ЖХ-МС». ФармаТьютор .
  71. ^ Таллам, Анил Кумар; Алапати, Сахити; Нули, Мохана Вамси (2023). «Обзор разработки биоаналитических методов и валидации противораковых препаратов с использованием ЖХ/МС/МС и их применения в рутинном анализе». Журнал интегральных наук : 4–19. doi : 10.37022/jis.v6i1.51 . ISSN  2581-5679. S2CID  257295079.
  72. ^ О'Дрисколл, Эйми (2021). «ВЭЖХ в фармацевтических приложениях». Менеджер лаборатории .
  73. ^ Беккария, Марко; Кабутер, Дейрдре (2020). «Текущие разработки в области ЖХ-МС для фармацевтического анализа». Аналитик . 145 (4): 1129–1157. Bibcode :2020Ana...145.1129B. doi :10.1039/C9AN02145K. hdl : 11392/2479221 . ISSN  1364-5528. PMID  31971527. S2CID  210866236.
  74. ^ Гу, Чунанг (Кристин); Рассел, Дэвид; Йель, Питер (2016). «Применение ЖХМС при разработке низкомолекулярных препаратов». European Pharmaceutical Review . 21 (4): 54–57.
  75. ^ Д'Овидио, Кристиан; Локателли, Марчелло; Перруччи, Мирьям; Чириоло, Луиджи; Фертон, Кеннет Г.; Газиоглу, Исил; Кабир, Абузар; Мероне, Джузеппе Мария; де Грация, Уго; Али, Имран; Катена, Антонио Мария; Трелья, Микеле; Марселла, Луиджи Т.; Савини, Фабио (2023). «Применение ЖХ-МС/МС в области фармакотоксикологии: современное состояние и новые применения». Молекулы . 28 (5): 2127. doi : 10,3390/molecules28052127 . ISSN  1420-3049. ПМЦ 10004468 . ПМИД  36903374. 
  76. ^ Чжоу, Цзюньто; Чжун, Лицзюнь (2022). «Применение метаболомики на основе жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии в предиктивной и персонализированной медицине». Frontiers in Molecular Biosciences . 9. doi : 10.3389/fmolb.2022.1049016 . ISSN  2296-889X . PMC 9669074. PMID  36406271 . 
  77. ^ Матиас, Патрисия И.; Коннор, Томас Х.; Б'Хаймер, Клейтон (2017). «Обзор методов высокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии мочи для определения воздействия противораковых препаратов на работников здравоохранения». Журнал хроматографии B. 1060 : 316–324. doi :10.1016/j.jchromb.2017.06.028. ISSN  1570-0232. PMC 5585056. PMID 28654869  . 
  78. ^ Эрнандес, Феликс; Санчо, Хуан В.; Ибаньес, Мария; Герреро, Карлос (2007). «Определение остатков антибиотиков в экологических водах методом ЖХ-МС». TrAC Тенденции в аналитической химии . Анализ фармацевтических остатков. 26 (6): 466–485. doi :10.1016/j.trac.2007.01.012. ISSN  0165-9936.
  79. ^ Сегер, Кристоф; Зальцманн, Линда (2020). «Спустя еще одно десятилетие: ЖХ–МС/МС стала рутинной в клинической диагностике». Клиническая биохимия . Развитие и применение масс-спектрометрии в лабораторной медицине. 82 : 2–11. doi : 10.1016/j.clinbiochem.2020.03.004 . ISSN  0009-9120. PMID  32188572. S2CID  213186669.
  80. ^ Sundström, Mira; Pelander, Anna; Angerer, Verena; Hutter, Melanie; Kneisel, Stefan; Ojanperä, Ilkka (2013-10-01). "Метод высокочувствительной сверхвысокой эффективности жидкостной хроматографии/высокоразрешающей времяпролетной масс-спектрометрии (UHPLC-HR-TOFMS) для скрининга синтетических каннабиноидов и других наркотических веществ в моче". Аналитическая и биоаналитическая химия . 405 (26): 8463–8474. doi :10.1007/s00216-013-7272-8. PMID  23954996. S2CID  25743579.
  81. ^ Gelb, Michael H.; Basheeruddin, Khaja; Burlina, Alberto; Chen, Hsiao-Jan; Chien, Yin-Hsiu; Dizikes, George; Dorley, Christine; Giugliani, Roberto; Hietala, Amy; Hong, Xinying; Kao, Shu-Min; Khaledi, Hamid; Klug, Tracy; Kubaski, Francyne; Liao, Hsuan-Chieh (2022). "Жидкостная хроматография–тандемная масс-спектрометрия в лабораториях скрининга новорожденных". Международный журнал неонатального скрининга . 8 (4): 62. doi : 10.3390/ijns8040062 . ISSN  2409-515X. PMC 9781967. PMID 36547379  . 
  82. ^ Ван, Яньюнь; Сан, Юнь; Цзян, Тао (2019). «Клиническое применение ЖХ–МС/МС в последующем наблюдении за лечением детей с метилмалоновой ацидурией». Advances in Therapy . 36 (6): 1304–1313. doi :10.1007/s12325-019-00955-0. ISSN  1865-8652. PMID  31049874. S2CID  143432183.
  83. ^ Арункумар, Ниветитха; Ланган, Томас Дж.; Стэплтон, Молли; Кубаски, Франсин; Мейсон, Роберт В.; Сингх, Раджендра; Кобаяши, Хиронори; Ямагучи, Сейджи; Сузуки, Ясуюки; Ории, Кенджи; Ории, Тадао; Фукао, Тосиюки; Томацу, Сюндзи (2020). «Скрининг мукополисахаридозов новорожденных: прошлое, настоящее и будущее». Журнал генетики человека . 65 (7): 557–567. дои : 10.1038/s10038-020-0744-8. ISSN  1435-232Х. PMID  32277174. S2CID  92042115.
  84. ^ Скогволд, Ханне Бендиксен; Рутвельт, Хельге; Реубсет, Леон; Эльгстен, Катя Бенедикте Престо; Уилсон, Стивен Рэй (2023). «Анализ сухих пятен крови с помощью жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии: тенденции в клинической химии». Журнал науки о разделении . 46 (15): e2300210. дои : 10.1002/jssc.202300210. hdl : 10852/105845 . ISSN  1615-9306. PMID  37269205. S2CID  259047202.
  85. ^ Zahedi Rad, Maliheh; Neyestani, Tirang Reza; Nikooyeh, Bahareh; Shariatzadeh, Nastaran; Kalayi, Ali; Khalaji, Niloufar; Gharavi, Azam (2015-01-01). "Метод иммуноферментного анализа на основе конкурентного связывания белков по сравнению с жидкостной хроматографией высокого давления имеет очень низкую диагностическую ценность для выявления дефицита витамина D у детей в возрасте 9–12 лет". International Journal of Preventive Medicine . 6 : 67. doi : 10.4103/2008-7802.161069 . PMC 4542329. PMID  26330983 . 

Дальнейшее чтение

Внешние ссылки

На Викискладе есть медиафайлы по теме Высокоэффективная жидкостная хроматография .