stringtranslate.com

Дезоксирибонуклеаза

Дезоксирибонуклеаза ( сокращенно ДНКаза ) относится к группе гликопротеиновых эндонуклеаз , которые представляют собой ферменты , которые катализируют гидролитическое расщепление фосфодиэфирных связей в основной цепи ДНК , тем самым разрушая ДНК. Роль фермента ДНКазы в клетках включает разрушение внеклеточной ДНК (вкДНК), выделяемой в результате апоптоза , некроза и нейтрофильных внеклеточных ловушек (NET) клеток, чтобы помочь уменьшить воспалительные реакции, которые в противном случае возникают. Известно большое разнообразие дезоксирибонуклеаз, которые относятся к одному из двух семейств ( ДНаза I или ДНКаза II ), которые различаются субстратной специфичностью, химическими механизмами и биологическими функциями. Лабораторные применения ДНКазы включают очистку белков при их извлечении из прокариотических организмов. Кроме того, ДНКаза применяется для лечения заболеваний, вызванных вкДНК в плазме крови. В области исследований также появляются методы анализа ДНКазы.

Типы

Два основных типа ДНКазы, обнаруженные у животных, известны как дезоксирибонуклеаза I (ДНКаза I) и дезоксирибонуклеаза II (ДНКаза II). Внутри этих двух семейств есть подкатегории.

Семейство ДНКазы I: ДНКаза I, ДНКаза1L1, ДНКаза 1L2, ДНКаза1L3.

Первый набор ДНКаз — это ДНКаза I. Это семейство состояло из ДНКазы I, DNase1L1 , DNase 1L2 и DNase1L3 . ДНКаза I расщепляет ДНК с образованием двух олигонуклеотидных конечных продуктов с 5'-фосфо- и 3'-гидрокси-концами и вырабатывается преимущественно органами пищеварительной системы . Семейство ДНКаз I требует катионов Ca2+ и Mg2+ в качестве активаторов и избирательно экспрессируется. [1] Что касается pH, семейство ДНКаз I активно при нормальном pH от 6,5 до 8.

Семейство ДНКазы II: ДНКаза II ɑ и ДНКаза II ꞵ.

Второй набор ДНКаз — ДНКаза II. Это семейство состояло из ДНКазы II ɑ и ДНКазы II ꞵ. Подобно ДНКазе I, ДНКаза II расщепляет ДНК с образованием двух олигонуклеотидных конечных продуктов с 5'-гидрокси- и 3'-фосфоконцами. Этот тип ДНКазы более широко экспрессируется в тканях из-за высокой экспрессии в макрофагах, но ограниченной экспрессии в клеточных типах. В отличие от ДНКазы I, им не нужны катионы Ca2+ и Mg2+ в качестве активаторов. [2] Что касается pH , семейство ДНКаз II экспрессируется при кислом pH. Характер расщепления ДНКазы II изменяется в присутствии диметилсульфоксида ( ДМСО ), который существенно влияет на структуру ДНК.

Состав

Хотя ДНКаза I и II являются гликопротеиновыми эндонуклеазами, ДНКаза I имеет мономерную структуру сэндвич-типа с углеводной боковой цепью, тогда как ДНКаза II имеет димерную четвертичную структуру .

Гликопротеин ДНКаза I 3D структура PDB: 3DNI

Структура ДНКазы I: ДНКаза I представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 30 000 Да и углеводной цепью из 8-10 остатков, присоединенной к Asn18 (оранжевый). [3] Это 𝛼,𝛽-белок с двумя 6-нитевыми 𝛽-складчатыми листами, которые образуют ядро ​​структуры. [4] Эти два основных листа расположены параллельно, а все остальные — антипараллельно. Листы 𝛽-складки лежат в центре структуры, а 𝛼-спирали обозначены витками на периферии. ДНКаза I содержит четыре ион-связывающих кармана и требует Ca 2+ и Mg 2+ для гидролиза двухцепочечной ДНК. [5] Два сайта прочно связывают Ca 2+, а два других координируют Mg 2+ . Мало что было опубликовано о количестве и расположении сайтов связывания Mg 2+ , хотя было высказано предположение, что Mg 2+ расположен вблизи каталитического кармана и способствует гидролизу. [6] Два Ca 2+ показаны на изображении красным цветом. Они связываются с ДНКазой I в условиях кристаллизации и важны для структурной целостности молекулы, стабилизируя поверхностную петлю от Asp198 до Thr204 (голубой) и ограничивая область высокой термической подвижности в гибкой петле остатками от Gly97 до Gly102 ( желтый).

Гликопротеин ДНКаза II 3D структура PDB: 5UNB

Структура ДНКазы II: ДНКаза II содержит гомодимерную четвертичную структуру, которая способна связывать двухцепочечную ДНК в U-образной архитектуре зажима. Внутренняя часть U-образного зажима в значительной степени электроположительная и способна связывать отрицательно заряженную ДНК. Подобно ДНКазе I, структура ДНКазы II состоит из смешанной 𝛼/𝛽 вторичной структуры с 9 𝛼-спиралями и 20 𝛽-складчатыми листами. [7] Хотя в отличие от ДНКазы I, ДНКаза II не требует ионов двухвалентных металлов для катализа. [7] Структура состоит из протомера A (голубого) и протомера B (зеленого). Каждая структура состоит из двух каталитических мотивов, которые для простоты помечены на протомере B: His100 и Lys102 составляют первый мотив (синий), а His279 и Lys281 составляют второй каталитический мотив (красный).

Механизм действия ферментов ДНКазы

Механизм

Некоторые ДНКазы разрезают или «расщепляют» только остатки на концах молекул ДНК. Этот тип экзонуклеазы известен как экзодезоксирибонуклеазы . Другие расщепляют в любом месте цепи, известные как эндодезоксирибонуклеазы (подгруппа эндонуклеаз ). [8] Некоторые ДНКазы довольно неразборчивы в отношении последовательности ДНК, в которой они разрезают, в то время как другие, включая ферменты рестрикции , очень специфичны к последовательности. Другие ДНКазы расщепляют только двухцепочечную ДНК , другие специфичны для одноцепочечных молекул, а третьи активны в отношении обоих.

Действие ДНКазы происходит в три фазы. На начальном этапе в фосфодиэфирном остове появляются множественные разрывы . Вторая фаза производит кислоторастворимые нуклеотиды. Третья фаза, которая является терминальной, состоит из восстановления олигонуклеотидов, вызывающего гиперхромный сдвиг в УФ-данных. [9]

Механизм ДНКазы I

ДНКаза I преимущественно нацелена на двухцепочечную ДНК и, в меньшей степени, на некоторую одноцепочечную ДНК для расщепления. ДНКаза I катализирует неспецифическое расщепление ДНК, разрывая фосфодиэфирные связи в одной из цепей. Сайт его расщепления расположен между 3'-атомом кислорода и соседним атомом фосфора, образуя 3'-гидроксильные и 5'-фосфорильные олигонуклеотиды с инверсией конфигурации фосфора. Для правильного функционирования фермент ДНКаза зависит от присутствия двухвалентного катиона , которым обычно является Ca 2+ . Активный центр ДНКазы I включает два остатка гистидина (His134 и His252) и два кислотных остатка ( Glu 78 и Asp 212), каждый из которых имеет решающее значение для общего кислотно-основного катализа фосфодиэфирных связей. [10]

Механизм ДНКазы II

Дезоксирибонуклеаза II (ДНКаза II) также известна как кислая дезоксирибонуклеаза, поскольку она обладает оптимальной активностью в среде лизосом с низким pH, где она обычно обнаруживается у высших эукариот. Некоторые формы рекомбинантной ДНКазы II проявляют высокий уровень активности при низких значениях pH и отсутствии ионов двухвалентных металлов, подобно эукариотической ДНКазе II. [7] В отличие от ДНКазы I, ДНКаза II расщепляет фосфодиэфирную связь между 5'-атомом кислорода и соседним атомом фосфора, образуя 3΄-фосфорилированные и 5΄-гидроксильные нуклеотиды.

Приложения

Лабораторные приложения

ДНКаза обычно используется при очистке белков , экстрагированных из прокариотических организмов. Экстракция белка часто включает в себя деградацию клеточной мембраны . Обычно деградировавшая и хрупкая клеточная мембрана лизируется , высвобождая нежелательную ДНК и нужные белки. Полученный экстракт ДНК-белка очень вязкий и его трудно очистить, поэтому для его расщепления добавляют ДНКазу. [11] ДНК гидролизуется, но белки не затрагиваются, и экстракт может подвергаться дальнейшей очистке.

Уход

Внеклеточная ДНК (вкДНК) — это ДНК, которая находится в кровообращении. Он появляется в результате апоптоза , некроза или нейтрофильного внеклеточного ловушки (НЭТ)-оза клеток крови и тканей, но может возникнуть и в результате активной секреции из живых клеток. ЭкДНК и назначенные ею ДНК-связывающие белки способны активировать ДНК-чувствительные рецепторы, рецепторы распознавания образов (PRR). PRR способны стимулировать пути, вызывающие воспалительный иммунный ответ. В результате несколько исследований воспалительных заболеваний обнаружили высокие концентрации вкДНК в плазме крови. По этой причине ДНКаза оказалась возможным средством лечения снижения количества вкДНК в плазме крови. ДНКазы могут выводиться как внутриклеточно, так и внеклеточно и расщеплять фосфодиэфирную связь ДНК . Эту функцию можно использовать для поддержания низкой концентрации вкДНК и, следовательно, для лечения воспаления. Заболевания, возникающие из-за остатков ДНК в крови, лечатся с помощью «разрушающих свойств» ДНКазы. Исследования показали, что ДНКаза может действовать как лечебное средство, уменьшая вязкость слизи. [12] [13] Введение ДНКазы варьируется в зависимости от заболевания. Его можно и применяли перорально , внутриплеврально, внутривенно , внутрибрюшинно и через ингаляцию . [14] В нескольких исследованиях продолжается изучение применения ДНКазы в качестве лечения, а также способов мониторинга здоровья. Например, недавно ДНКазу, полученную из патогенных бактерий, стали использовать в качестве индикатора для мониторинга раневой инфекции. [15]

Респираторные заболевания

Муковисцидоз — это генетическое заболевание , которое влияет на выработку слизи, пота и пищеварительных жидкостей, в результате чего они становятся более вязкими, чем смазочными . Ферменты ДНКазы можно вдыхать с помощью небулайзера больным муковисцидозом . Ферменты ДНКазы помогают, потому что лейкоциты накапливаются в слизи и, когда они разрушаются, высвобождают ДНК, что увеличивает «липкость» слизи. Ферменты ДНКазы расщепляют ДНК, и слизь гораздо легче выводится из легких. В частности, ДНКаза I, также известная как одобренный FDA препарат Пульмозим (также известный как дорназа альфа), используется для лечения легочной функции.

Было обнаружено, что на другие респираторные заболевания, такие как астма , [16] эмпиема плевры , [12] и хроническая обструктивная болезнь легких, свойства ДНКаз положительно влияют.

Кроме того, недавние исследования показывают, что внутриплевральный тканевый активатор плазминогена (tPA), белок, который отвечает за разрушение тромбов, в сочетании с дезоксирибонуклеазой увеличивает плевральный дренаж, сокращает продолжительность пребывания в больнице и снижает необходимость хирургического вмешательства при парапневмонических выпотах и ​​эмпиеме. .

Другие заболевания

Сепсис – это опасное для жизни воспалительное заболевание, вызванное резкой реакцией организма на инфекцию. Организм начинает атаковать сам себя, поскольку воспалительная реакция охватывает человеческое тело. В результате высокие уровни вкДНК были связаны с кровотоком, и поэтому исследователи рассматривали ДНКазу как подходящее лечение. Исследования показали, что ДНКаза успешно разрушает сети и снижает воспалительные реакции. Необходимы дополнительные исследования типа и времени введения, чтобы в дальнейшем утвердить ДНКазу в качестве официального лечения. [17] [18] [19]

Системная красная волчанка (СКВ) — аутоиммунное заболевание , которое приводит к образованию аутоантител, вызывающих воспаление, которое приводит к повреждению органов, суставов и почек. СКВ связана с низким уровнем ДНКазы I, посколькупри этом заболевании апоптотические клетки становятся аутоантигенами . ДНКаза I исследовалась как возможное средство для уменьшения количества апоптотического мусора в организме человека. Было высказано предположение, что их трудность может быть связана с неспособностью фермента разрушить клеточную мембрану хроматина . Исследования показали противоречивые результаты этого лечения, однако проводятся дальнейшие исследования для изучения терапевтических преимуществ ДНКазы I. [14] [18] [20]

Противоопухолевое лечение. Известно, что ДНКаза обладает противоопухолевым действием благодаря своей способности расщеплять ДНК. В крови больных раком обнаружен высокий уровень ДНК, что позволяет предположить, что ДНКаза I может быть возможным лечением. До сих пор отсутствует понимание того, почему существуют такие высокие уровни вкДНК и будет ли ДНКаза действовать как эффективное лечение. Несколько исследований на мышах показали положительные результаты в противоопухолевой прогрессии с использованием внутривенного введения ДНКазы I. Однако необходимо провести дополнительные исследования, прежде чем представить этот метод широкой публике. [21] [14]

Анализы

ДНК поглощает ультрафиолетовый (УФ) свет с длиной волны максимального поглощения около 260 нм. Это поглощение происходит за счет пи -электронов ароматических оснований ДНК. В дцДНК или даже участках РНК , где возникает двухцепочечная структура, основания уложены параллельно друг другу, а перекрытие базовых молекулярных орбиталей приводит к уменьшению поглощения УФ-света. Это явление называется гипохромным эффектом . Когда ДНКаза высвобождает нуклеотиды из дцДНК, основания больше не укладываются друг в друга, как в дцДНК, поэтому перекрытие орбиталей сводится к минимуму и поглощение УФ-излучения увеличивается. Это увеличение поглощения лежит в основе Кунитцевой единицы ДНКазной активности. Одна единица Кунитца определяется как количество фермента, добавленного к 1 мг/мл ДНК спермы лосося, которое вызывает увеличение оптической плотности на 0,001 в минуту при длине волны 260 нм при воздействии на высокополимеризованную ДНК при 25 °C в 0,1 М NaOAc. (рН 5,0) буфер. Название устройства связано с русско-американским биохимиком Мозесом Куницем , который предложил стандартный тест в 1946 году. [22]

Стандартный препарат фермента следует проводить параллельно с неизвестным, поскольку стандартизация препаратов ДНК и степени их полимеризации в растворе невозможна.

Одиночная радиальная диффузия ферментов (SRED). Этот простой метод измерения активности ДНКазы I был предложен Nadano et al. и основан на расщеплении ДНК в агарозном геле ДНКазой, которая присутствует в пробах, вбитых в гель. [14] Активность ДНКазы представлена ​​размером распределенной круглой лунки в слое агарозного геля, в котором равномерно распределена ДНК, окрашенная бромидом этидия . После инкубации образуется круглая темная зона, поскольку фермент диффундирует из лунки радиально в гель и расщепляет ДНК. SRED претерпел множество модификаций, которые привели к повышению чувствительности и безопасности, например, замена бромистого этидия на SYBR Green I или другие гелевые красители ДНК. [23]

Колориметрический анализ активности ДНКазы I

Кинетический колориметрический анализ активности ДНКазы I разработан для оценки стабильности рекомбинантной ДНКазы I человека (Пульмозим). Метод был скорректирован на основе колориметрического анализа активности ферментов по конечной точке, основанного на деградации комплекса ДНК/метиловый зеленый. [24]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Юнович, Э. (1973). «Исследование бычьей панкреатической дезоксирибонуклеазы А. II. Влияние различных двухвалентных металлов на специфичность деградации ДНК». Биохим. Биофиз. Акта . 312 (1): 85–102. дои : 10.1016/0005-2787(73)90054-3. ПМИД  4353710.
  2. ^ Окоучи, С.; Сибата, М; Сасаки, М; Койке, М; Сафиг, П; Питерс, К; Нагата, С; Утияма, Ю. (2013). «Биогенез и протеолитический процессинг лизосомальной ДНКазы II». ПЛОС ОДИН . 8 (3): e59148. Бибкод : 2013PLoSO...859148O. дои : 10.1371/journal.pone.0059148 . ПМЦ 3596287 . ПМИД  23516607. 
  3. ^ Сосать, Д.; Оефнер, К.; Кабш, В. (1984). «Трехмерная структура ДНКазы I бычьей поджелудочной железы при разрешении 2,5 А». Журнал ЭМБО . 3 (10): 2423–2430. doi :10.1002/j.1460-2075.1984.tb02149.x. ПМЦ 557703 . ПМИД  6499835. 
  4. ^ wwwPDB.org. «wwPDB: Всемирный банк данных по белкам». www.wwpdb.org . Проверено 26 октября 2022 г.
  5. ^ Геру, Марк; Пико, Дэниел; Аби-Ганем, Жозефина; Хартманн, Бриджит; Бааден, Марк (18 ноября 2010 г.). Левитт, Майкл (ред.). «Как катионы могут помочь ДНКазе I в связывании и гидролизе ДНК». PLOS Вычислительная биология . 6 (11): е1001000. Бибкод : 2010PLSCB...6E1000G. дои : 10.1371/journal.pcbi.1001000 . ISSN  1553-7358. ПМЦ 2987838 . ПМИД  21124947. 
  6. ^ Джонс, SJ; Уорролл, AF; Коннолли, бакалавр (20 декабря 1996 г.). «Сайт-направленный мутагенез каталитических остатков бычьей панкреатической дезоксирибонуклеазы I». Журнал молекулярной биологии . 264 (5): 1154–1163. дои : 10.1006/jmbi.1996.0703. ISSN  0022-2836. ПМИД  9000637.
  7. ^ abc Варела-Рамирес, Армандо; Абендрот, Ян; Мехия, Адриан А.; Фан, Изабель К.; Лоример, Дональд Д.; Эдвардс, Томас Э.; Агилера, Ренато Дж. (2 июня 2017 г.). «Структура кислой дезоксирибонуклеазы». Исследования нуклеиновых кислот . 45 (10): 6217–6227. дои : 10.1093/nar/gkx222. ISSN  0305-1048. ПМЦ 5449587 . ПМИД  28369538. 
  8. ↑ Боуэн Р.А., Остген Л., Руж М. (20 февраля 2000 г.). «Рестрикционные эндонуклеазы и ферменты, модифицирующие ДНК». Нуклеазы: ДНКаза и РНКаза. Архивировано из оригинала 5 августа 2004 года . Проверено 8 января 2017 г. {{cite book}}: |work=игнорируется ( помощь )
  9. ^ Бернарди, Джорджио (1971-01-01), Бойер, Пол Д. (редактор), «11 дезоксирибонуклеаза кислоты селезенки», The Enzymes , Hydrolysis, vol. 4, Academic Press, стр. 271–287, номер документа : 10.1016/S1874-6047(08)60371-6, ISBN. 9780121227043, получено 27 октября 2022 г.
  10. ^ Лазарус, Роберт А.; Вагенер †, Джеффри С. (2019), «Рекомбинантная человеческая дезоксирибонуклеаза I», Фармацевтическая биотехнология , Cham: Springer International Publishing, стр. 471–488, номер документа : 10.1007/978-3-030-00710-2_22, ISBN 978-3-030-00709-6, ПМК  7124075
  11. ^ Нинфа А.Дж., Баллоу Д.П., Бенор М. (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии (2-е изд.). Соединенные Штаты Америки: John Wiley & Sons, Inc., с. 234. ИСБН 978-0-470-08766-4.
  12. ^ Аб Симпсон, Г.; Румс, Д.; Херон, М. (2006). «Влияние стрептокиназы и дезоксирибонуклеазы на вязкость хирургического гноя и эмпиемы человека». Грудь . 117 (6): 1728–1733. дои : 10.1378/сундук.117.6.1728. ISSN  0012-3692. ПМИД  10858409.
  13. ^ Дж. Б. Армстронг, Дж. К. Уайт. Разжижение вязких гнойных экссудатов дезоксирибонуклеазой Lancet, 259 (1950), стр. 739-742.
  14. ^ abcd Лаукова, Люсия; Конечна, Барбора; Яновичова, Любица; Влкова, Барбора; Селец, Питер (11 июля 2020 г.). «Дезоксирибонуклеазы и их применение в биомедицине». Биомолекулы . 10 (7): 1036. doi : 10.3390/biom10071036 . ISSN  2218-273X. ПМК 7407206 . ПМИД  32664541. 
  15. ^ Сюн З., Ачаванантадит С., Лиан С., Мэдден Л.Е., Онг ZX, Чуа В. и др. (2021). «Беспроводной безбатарейный датчик раневой инфекции на основе гидрогеля ДНК». Достижения науки . 7 (47): eabj1617. Бибкод : 2021SciA....7.1617X. doi : 10.1126/sciadv.abj1617. ПМК 8604401 . ПМИД  34797719. 
  16. ^ Бугаард, Р.; Смит, Ф.; Шорнагель, Р.; Вассен-Верберн, А.а. ПХ; Кувенберг, Дж. М.; Хеккелан, М.; Хендрикс, Т.; Фейт, SWW; Хоп, WCJ; де Йонгсте, JC; Меркус, PJFM (2008). «Рекомбинантная дезоксирибонуклеаза человека для лечения острой астмы у детей». Торакс . 63 (2): 141–146. дои : 10.1136/thx.2007.081703 . ISSN  1468-3296. PMID  17675321. S2CID  309718.
  17. ^ Чен, Цисин; Да, Линг; Джин, Ю Хонг; Чжан, Нин; Лу, Тяньчжэн; Цю, Цзэлян; Джин, Юэ; Ченг, Баоли; Фан, СянМин (2012). «Циркулирующие нуклеосомы как предиктор сепсиса и органной дисфункции у пациентов в критическом состоянии». Международный журнал инфекционных заболеваний . 16 (7): e558–564. дои : 10.1016/j.ijid.2012.03.007 . ISSN  1878-3511. ПМИД  22609014.
  18. ^ аб Яновичова, Любица; Чонка, Йозеф; Лаукова, Люсия; Селец, Питер (01 октября 2022 г.). «Вариабельность активности эндогенной дезоксирибонуклеазы и ее патофизиологические последствия». Молекулярные и клеточные зонды . 65 : 101844. doi : 10.1016/j.mcp.2022.101844. ISSN  0890-8508. PMID  35803442. S2CID  250328196.
  19. ^ Май, Сафия Х.К.†; Хан, Момина*†; Двиведи, Дхрува Дж.†‡; Росс, Кэтрин А.§; Чжоу, Цзи †; Гулд, Трэвис Дж †; Гросс, Питер Л †‡; Вейц, Джеффри I †‡; Фокс-Робишо, Элисон Э †‡∥; Лио, Патрисия К†‡∥ из Канадской группы трансляционной биологии интенсивной терапии. Отсроченное, но не раннее лечение ДНКазой снижает повреждение органов и улучшает исход на мышиной модели сепсиса. Шок: август 2015 г. - Том 44 - Выпуск 2 - стр. 166–172 doi : 10.1097/SHK.0000000000000396
  20. ^ Фернандо Мартинес Валле, Ева Балада, Хосеп Орди-Рос, Микель Виларделл-Таррес, ДНКаза 1 и системная красная волчанка , Обзоры аутоиммунитета, том 7, выпуск 5, 2008 г., страницы 359–363, ISSN  1568-9972, doi : 10.1016/ j.autrev.2008.02.002.
  21. ^ Трехо-Бесеррил, Каталина; Перес-Карденас, Энрике; Гутьеррес-Диас, Бланка; Де Ла Крус-Сигуэнса, Дезире; Таха-Чайеб, Люсия; Гонсалес-Баллестерос, Маурисио; Гарсиа-Лопес, Патрисия; Чанона, Хосе; Дуэньяс-Гонсалес, Альфонсо (26 июля 2016 г.). «Противоопухолевые эффекты системной ДНКазы I и протеаз в модели in vivo». Интегративная терапия рака . 15 (4): NP35–NP43. дои : 10.1177/1534735416631102. ISSN  1534-7354. ПМЦ 5739158 . ПМИД  27146129. 
  22. ^ Роулетт, Расс. «К». Словарь единиц измерения . Университет Северной Каролины в Чапел-Хилл . Проверено 27 октября 2022 г.
  23. ^ Ясуда, Т.; Такешита, Х; Наказато, Э.; Накадзима, Т.; Хосоми, О.; Накашима, Ю.; Киши, К. (1998). «Измерение активности дезоксирибонуклеаз I и II с помощью пикограммной чувствительности на основе флуоресценции ДНК / SYBR Green I». Анальный. Биохим . 255 (2): 274–276. дои : 10.1006/abio.1997.2496. ПМИД  9451514.
  24. ^ Хорни, Д.Л.; Вебстер, Д.А. (1971). «Дезоксирибонуклеаза: чувствительный анализ с использованием радиальной диффузии в агарозе, содержащей комплекс метиловый зеленый-ДНК». Биохим. Биофиз. Акта . 247 (1): 54–61. дои : 10.1016/0005-2787(71)90806-9. ПМИД  4946282.

Внешние ссылки