Диэлектрофорез ( ДЭП ) — это явление, при котором сила воздействует на диэлектрическую частицу, когда она подвергается воздействию неоднородного электрического поля . [1] [2] [3] [4] [5] [6] Эта сила не требует, чтобы частица была заряжена . Все частицы проявляют диэлектрофоретическю активность в присутствии электрических полей. Однако сила силы сильно зависит от среды и электрических свойств частиц, от формы и размера частиц, а также от частоты электрического поля. Следовательно, поля определенной частоты могут манипулировать частицами с большой избирательностью. Это позволило, например, разделить клетки или ориентировать и манипулировать наночастицами [2] [7] и нанопроводами. [8] Кроме того, изучение изменения силы ДЭП в зависимости от частоты может позволить выяснить электрические (или электрофизиологические в случае клеток) свойства частицы.
Хотя явление, которое мы сейчас называем диэлектрофорезом, было описано вскользь еще в начале 20-го века, оно стало предметом серьезного изучения, названо и впервые понято Гербертом Полем в 1950-х годах. [9] [10] В последнее время диэлектрофорез возродился из-за его потенциала в манипулировании микрочастицами , [2] [4] [5] [11] наночастицами и клетками .
Диэлектрофорез происходит, когда поляризуемая частица подвешена в неоднородном электрическом поле. Электрическое поле поляризует частицу, и полюса затем испытывают силу вдоль линий поля, которая может быть либо притягивающей, либо отталкивающей в зависимости от ориентации на диполе. Поскольку поле неоднородно, полюс, испытывающий наибольшее электрическое поле, будет доминировать над другим, и частица будет двигаться. Ориентация диполя зависит от относительной поляризуемости частицы и среды в соответствии с поляризацией Максвелла-Вагнера-Силларса . Поскольку направление силы зависит от градиента поля, а не от направления поля, DEP будет происходить как в переменном, так и в постоянном электрическом поле; поляризация (и, следовательно, направление силы) будет зависеть от относительной поляризуемости частицы и среды. Если частица движется в направлении увеличения электрического поля, поведение называется положительным DEP (иногда pDEP), если оно действует, чтобы отодвинуть частицу от областей сильного поля, оно известно как отрицательный DEP (или nDEP). Поскольку относительные поляризуемости частицы и среды зависят от частоты, изменение возбуждающего сигнала и измерение способа изменения силы можно использовать для определения электрических свойств частиц; это также позволяет устранить электрофоретическое движение частиц, обусловленное собственным зарядом частиц.
Явления, связанные с диэлектрофорезом, — это электроротация и диэлектрофорез бегущей волны (TWDEP). Они требуют сложного оборудования для генерации сигнала, чтобы создать требуемые вращающиеся или бегущие электрические поля, и в результате этой сложности нашли меньшее признание среди исследователей, чем обычный диэлектрофорез.
Простейшей теоретической моделью является модель однородной сферы, окруженной проводящей диэлектрической средой. [12] Для однородной сферы радиуса и комплексной диэлектрической проницаемости в среде с комплексной диэлектрической проницаемостью (усредненная по времени) сила DEP равна: [4]
Фактор в фигурных скобках известен как комплексная функция Клаузиуса-Моссотти [2] [4] [5] и содержит всю частотную зависимость силы DEP. Если частица состоит из вложенных сфер — наиболее распространенным примером которой является приближение сферической клетки, состоящей из внутренней части (цитоплазмы), окруженной внешним слоем (клеточной мембраной), — то это может быть представлено вложенными выражениями для оболочек и способом их взаимодействия, что позволяет выяснить свойства, когда имеется достаточно параметров, связанных с числом искомых неизвестных. Для более общего эллипсоида , выровненного по полю , радиуса и длины с комплексной диэлектрической проницаемостью в среде с комплексной диэлектрической проницаемостью зависящая от времени диэлектрофоретическая сила определяется как: [4]
Комплексная диэлектрическая проницаемость равна , где — диэлектрическая проницаемость , — электропроводность , — частота поля, а — мнимая единица . [2] [4] [5] Это выражение было полезно для аппроксимации диэлектрофоретического поведения частиц, таких как эритроциты (как сплющенные сфероиды) или длинные тонкие трубки (как вытянутые эллипсоиды), что позволяет аппроксимировать диэлектрофоретический отклик углеродных нанотрубок или вирусов табачной мозаики в суспензии. Эти уравнения точны для частиц, когда градиенты электрического поля не очень велики (например, близко к краям электродов) или когда частица не движется вдоль оси, на которой градиент поля равен нулю (например, в центре осесимметричной решетки электродов), поскольку уравнения учитывают только сформированный диполь , а не поляризацию более высокого порядка . [4] Когда градиенты электрического поля велики или когда через центр частицы проходит нулевое поле, становятся уместными члены более высокого порядка, [4] и приводят к более высоким силам. Если быть точным, то уравнение, зависящее от времени, применимо только к частицам без потерь, поскольку потери создают задержку между полем и индуцированным диполем. При усреднении эффект отменяется, и уравнение остается верным и для частиц с потерями. Эквивалентное уравнение, усредненное по времени, можно легко получить, заменив E на E rms или, для синусоидальных напряжений, разделив правую часть на 2. Эти модели игнорируют тот факт, что клетки имеют сложную внутреннюю структуру и являются гетерогенными. Многооболочковая модель в среде с низкой проводимостью может быть использована для получения информации о проводимости мембраны и диэлектрической проницаемости цитоплазмы. [13] Для клетки с оболочкой, окружающей однородное ядро, с окружающей средой, рассматриваемой как слой, как показано на рисунке 2, общий диэлектрический отклик получается из комбинации свойств оболочки и ядра. [14]
где 1 — ядро (в клеточном смысле — цитоплазма), 2 — оболочка (в клетке — мембрана). r1 — радиус от центра сферы до внутренней части оболочки, а r2 — радиус от центра сферы до внешней части оболочки.
Диэлектрофорез можно использовать для манипулирования, транспортировки, разделения и сортировки различных типов частиц. DEP применяется в таких областях, как медицинская диагностика, разработка лекарств, клеточная терапия и фильтрация частиц.
DEP также использовался в сочетании с технологией полупроводниковых чипов для разработки технологии массива DEP для одновременного управления тысячами клеток в микрофлюидных устройствах. Отдельные микроэлектроды на дне проточной ячейки управляются чипом CMOS для формирования тысяч диэлектрофоретических «клеток», каждая из которых способна захватывать и перемещать одну отдельную клетку под управлением программного обеспечения маршрутизации.
Поскольку биологические клетки обладают диэлектрическими свойствами, [15] [16] [17] диэлектрофорез имеет множество биологических и медицинских применений. Были созданы инструменты, способные отделять раковые клетки от здоровых клеток [18] [19] [20] [21] , а также изолировать отдельные клетки из смешанных образцов для судебной экспертизы. [22] Тромбоциты были отделены от цельной крови с помощью сортировщика клеток, активированного DEP . [23]
DEP сделал возможным характеризовать и манипулировать биологическими частицами, такими как клетки крови , стволовые клетки , нейроны , β-клетки поджелудочной железы , ДНК , хромосомы , белки и вирусы . DEP можно использовать для разделения частиц с разной поляризуемостью знака, поскольку они движутся в разных направлениях при заданной частоте приложенного переменного поля. DEP применялся для разделения живых и мертвых клеток, при этом оставшиеся живые клетки оставались жизнеспособными после разделения [24] или для принудительного контакта между выбранными отдельными клетками для изучения взаимодействия клеток друг с другом. [25] DEP использовался для разделения штаммов бактерий и вирусов. [26] [27] DEP также можно использовать для обнаружения апоптоза вскоре после введения препарата, измеряя изменения электрофизиологических свойств. [28]
DEP в основном используется для характеристики клеток, измеряя изменения их электрических свойств. Для этого доступно множество методов количественной оценки диэлектрофоретического ответа, поскольку невозможно напрямую измерить силу DEP. Эти методы основаны на косвенных измерениях, получая пропорциональный ответ силы и направления силы, который необходимо масштабировать для модельного спектра. Поэтому большинство моделей учитывают только фактор Клаузиуса-Моссотти частицы. Наиболее используемыми методами являются измерения скорости сбора: это самый простой и наиболее используемый метод — электроды погружаются в суспензию с известной концентрацией частиц, и частицы, которые собираются на электроде, подсчитываются; [29] измерения кроссовера: частота кроссовера между положительным и отрицательным DEP измеряется для характеристики частиц — этот метод используется для более мелких частиц (например, вирусов), которые трудно подсчитать с помощью предыдущего метода; [30] измерения скорости частиц: этот метод измеряет скорость и направление частиц в градиенте электрического поля; [31] измерение высоты левитации: высота левитации частицы пропорциональна отрицательной силе DEP, которая применяется. Таким образом, этот метод хорош для характеристики отдельных частиц и в основном используется для более крупных частиц, таких как клетки; [32] измерение импеданса : частицы, собирающиеся на краю электрода, оказывают влияние на импеданс электродов — это изменение можно отслеживать для количественной оценки DEP. [33] Для изучения более крупных популяций клеток свойства можно получить путем анализа диэлектрофоретических спектров. [14]
В начале электроды изготавливались в основном из проводов или металлических листов. В настоящее время электрическое поле в DEP создается с помощью электродов, которые минимизируют величину необходимого напряжения. Это стало возможным с использованием таких методов изготовления, как фотолитография, лазерная абляция и электронно-лучевое моделирование. [34] Эти небольшие электроды позволяют работать с небольшими биочастицами. Наиболее используемые геометрии электродов — изометрическая, полиномиальная, встречно-гребенчатая и крестообразная. Изометрическая геометрия эффективна для манипулирования частицами с помощью DEP, но отталкиваемые частицы не собираются в четко определенных областях, и поэтому разделение на две однородные группы затруднено. Полиномиальная — это новая геометрия, создающая четко определенные различия в областях высоких и низких сил, и поэтому частицы могут собираться положительными и отрицательными DEP. Эта геометрия электродов показала, что электрическое поле было самым высоким в середине межэлектродных зазоров. [35] Интердигитальная геометрия включает в себя чередующиеся электродные пальцы противоположных полярностей и в основном используется для диэлектрофоретического захвата и анализа. Геометрия крестообразных полос потенциально полезна для сетей межсоединений. [36]
Эти электроды были разработаны [37] , чтобы предложить высокопроизводительную, но недорогую альтернативу обычным электродным структурам для DEP. Вместо того, чтобы использовать фотолитографические методы или другие микроинженерные подходы, электроды DEP-well строятся путем укладки последовательных проводящих и изолирующих слоев в ламинат, после чего в структуре просверливаются множественные «колодцы». Если рассмотреть стенки этих колодцев, то слои выглядят как встречно-штыревые электроды, непрерывно идущие вокруг стенок трубки. Когда чередующиеся проводящие слои подключаются к двум фазам сигнала переменного тока, градиент поля, образованный вдоль стенок, перемещает клетки с помощью DEP. [38]
DEP-лунки можно использовать в двух режимах: для анализа или разделения. [39] В первом случае диэлектрофоретические свойства клеток можно контролировать с помощью измерений поглощения света : положительный DEP притягивает клетки к стенке лунки, таким образом, при зондировании лунки световым лучом интенсивность света увеличивается. Обратное верно для отрицательного DEP, при котором световой луч становится скрытым клетками. В качестве альтернативы этот подход можно использовать для создания сепаратора, где смеси клеток продавливаются через большое количество (>100) лунок параллельно; те, которые испытывают положительный DEP, задерживаются в устройстве, в то время как остальные промываются. Отключение поля позволяет выпустить захваченные клетки в отдельный контейнер. Высокопараллельная природа подхода означает, что чип может сортировать клетки на гораздо более высоких скоростях, сравнимых с теми, которые используются в MACS и FACS .
Этот подход предлагает множество преимуществ по сравнению с обычными устройствами на основе фотолитографии, но при этом снижается стоимость, увеличивается количество образца, который может быть проанализирован одновременно, и простота движения клеток сводится к одному измерению (где клетки могут двигаться только радиально к центру скважины или от него). Устройства, изготовленные с использованием принципа DEP-well, продаются под брендом DEPtech.
Использование разницы между диэлектрофоретически действующими силами, действующими на различные частицы в неоднородных электрических полях, известно как разделение DEP. Использование сил DEP было разделено на две группы: миграция DEP и удержание DEP. Миграция DEP использует силы DEP, которые оказывают противоположные знаки силы на различные типы частиц, чтобы притягивать некоторые частицы и отталкивать другие. [40] Удержание DEP использует баланс между силами DEP и потоком жидкости. Частицы, испытывающие отталкивающие и слабые притягивающие силы DEP, вымываются потоком жидкости, тогда как частицы, испытывающие сильные притягивающие силы DEP, захватываются на краях электрода против сопротивления потока. [41]
Фракционирование в потоке поля диэлектрофореза (DEP-FFF), представленное Дэвисом и Гиддингсом, [42] представляет собой семейство методов разделения, подобных хроматографическим. В DEP-FFF силы DEP объединяются с потоком сопротивления для фракционирования образца различных типов частиц. [41] [43] [44] [45] [46] [47] Частицы впрыскиваются в поток носителя, который проходит через камеру разделения, при этом внешняя разделяющая сила (сила DEP) прикладывается перпендикулярно потоку. С помощью различных факторов, таких как диффузия и стерические, гидродинамические, диэлектрические и другие эффекты или их комбинации, частицы (<1 мкм в диаметре) с различными диэлектрическими или диффузионными свойствами достигают различных положений вдали от стенки камеры, которые, в свою очередь, демонстрируют различные характерные профили концентрации. Частицы, которые движутся дальше от стенки, достигают более высоких положений в параболическом профиле скорости жидкости, протекающей через камеру, и будут элюироваться из камеры с большей скоростью.
Использование фотопроводящих материалов (например, в устройствах lab-on-chip) позволяет локализовать индуцирование диэлектрофоретических сил посредством применения света. Кроме того, можно проецировать изображение, чтобы индуцировать силы в узорчатой области освещения, что позволяет выполнять некоторые сложные манипуляции. При манипулировании живыми клетками оптический диэлектрофорез обеспечивает безвредную альтернативу оптическому пинцету , поскольку интенсивность света примерно в 1000 раз меньше. [48]