Трихромное окрашивание — это метод гистологического окрашивания , который использует два или более кислотных красителя в сочетании с поликислотой . Окрашивание дифференцирует ткани, окрашивая их в контрастные цвета. Оно увеличивает контрастность микроскопических особенностей в клетках и тканях , что позволяет легче их увидеть при просмотре через микроскоп .
Слово трихром означает «три цвета». Первый протокол окрашивания, который был описан как «трихром», был трихромным красителем Маллори , который дифференциально окрашивал эритроциты в красный цвет, мышечную ткань в красный цвет и коллаген в синий цвет. Некоторые другие протоколы трихромного окрашивания — это трихромное окрашивание Массона , трихром Лилли и трихромное окрашивание Гёмёри .
Без трихромного окрашивания различение одного признака от другого может быть чрезвычайно сложным. Например, гладкую мышечную ткань трудно отличить от коллагена. Трихромное окрашивание может окрасить мышечную ткань в красный цвет, а коллагеновые волокна в зеленый или синий. Биопсии печени могут иметь тонкие коллагеновые волокна между клетками печени, и количество коллагена можно оценить на основе метода окрашивания. Трихромные методы в настоящее время используются для дифференциации мышц от коллагена, альфа-клеток гипофиза от бета-клеток, фибрина от коллагена и митохондрий в свежезамороженных срезах мышц, среди прочего. Это помогает идентифицировать увеличение коллагеновой ткани (т. е. фиброзные изменения), например, при циррозе печени , и различать опухоли, возникающие из мышечных клеток и фибробластов. [1]
Методы окрашивания трихромом используют два или более кислотных красителя . Обычно кислотные красители окрашивают одни и те же основные белки, но, применяя их последовательно, можно манипулировать рисунком окрашивания. Поликислота (например, фосфорномолибденовая кислота или фосфорновольфрамовая кислота ) используется для избирательного удаления красителя. Считается, что поликислоты ведут себя как красители с высокой молекулярной массой : они вытесняют легко удаляемый краситель из коллагена. [ необходима цитата ]
Обычно сначала наносится красный краситель в разбавленной уксусной кислоте , чтобы перекрасить все компоненты. Затем наносится поликислота, чтобы удалить красный краситель из коллагена и некоторых других компонентов путем вытеснения. Наносится второй кислотный краситель (синий или зеленый) в разбавленной уксусной кислоте, который, в свою очередь, вытесняет поликислоту, в результате чего коллаген окрашивается в цвет, контрастный первоначальному использованному красителю. Если необходимо окрасить эритроциты, перед окрашиванием красным красителем наносится желтый или оранжевый краситель с небольшой молекулярной массой. Обычно его наносят из насыщенного раствора в 80% этаноле и часто в сочетании с пикриновой кислотой (сама по себе краситель) и поликислотой. Методы используют незначительные различия в реакции тканей на красители, плотности, доступности и т. д. [ необходима цитата ]
Трихромные окраски, в которых красители и поликислота наносятся последовательно, называются многошаговыми трихромами . В «одношаговых» методах все красители — с поликислотой или без нее — объединяются в одном растворе. Одним из старейших одношаговых подходов к трихромному окрашиванию является метод Ван Гизона, который окрашивает мышцы и цитоплазму в желтый цвет, а коллаген — в красный. Другим является трихромное окрашивание Гёмёри , которое очень похоже на трихром Массона. В методах «yellowsolve» сначала наносится красный краситель в разбавленной уксусной кислоте, затем срез очень тщательно дегидратируется, чтобы гарантировать отсутствие влаги. Затем красный краситель заменяется желтым красителем в растворителе, таком как целлозольв (2-этоксиэтанол). Название yellowsolve представляет собой смесь терминов желтый и целлозольв . Флоксин-тартразин Лендрума для клеточных включений является одним из примеров желтосольвного окрашивания. [ необходима цитата ]
Среди красителей, используемых для трихромного окрашивания, можно назвать:
Медиа, связанные с окрашиванием трихромом на Wikimedia Commons