Эфрины (также известные как лиганды эфрина или белки, взаимодействующие с рецепторами семейства Eph ) — это семейство белков , которые служат лигандами рецептора Eph . Рецепторы Eph, в свою очередь, составляют крупнейшее известное подсемейство рецепторных протеинтирозинкиназ (RTK).
Поскольку лиганды эфрина (эфрины) и рецепторы Eph (Ephs) являются мембраносвязанными белками , связывание и активация внутриклеточных сигнальных путей Eph/ephrin могут происходить только посредством прямого взаимодействия клетка-клетка . Сигнализация Eph/ephrin регулирует различные биологические процессы во время эмбрионального развития , включая управление конусами роста аксонов , [1] формирование границ тканей, [2] миграцию клеток и сегментацию . [3] Кроме того, было установлено, что сигнализация Eph/ephrin играет важную роль в поддержании нескольких процессов во взрослом возрасте, включая долгосрочную потенциацию , [4] ангиогенез , [5] и дифференцировку стволовых клеток . [6]
Лиганды эфрина делятся на два подкласса эфрин-A и эфрин-B на основе их структуры и связи с клеточной мембраной. Эфрин-A прикреплены к мембране с помощью гликозилфосфатидилинозитоловой (GPI) связи и не имеют цитоплазматического домена, в то время как эфрин-B прикреплены к мембране с помощью одного трансмембранного домена, который содержит короткий цитоплазматический PDZ-связывающий мотив. Гены, кодирующие белки эфрин-A и эфрин-B, обозначаются как EFNA и EFNB соответственно. Рецепторы Eph, в свою очередь, классифицируются как EphAs или EphBs на основе их связывающей аффинности к лигандам эфрин-A или эфрин-B. [7]
Из восьми эфринов, которые были идентифицированы у людей, есть пять известных лигандов эфрина-A (эфрин-A1-5), которые взаимодействуют с девятью EphA (EphA1-8 и EphA10), и три лиганда эфрина-B (эфрин-B1-3), которые взаимодействуют с пятью EphB (EphB1-4 и EphB6). [4] [8] Эфрины определенного подкласса демонстрируют способность связываться с высоким сродством со всеми эфринами соответствующего подкласса, но в целом имеют мало или вообще не имеют перекрестного связывания с эфринами противоположного подкласса. [9] Однако есть несколько исключений из этой специфичности связывания внутри подкласса, поскольку недавно было показано, что эфрин-B3 способен связываться с рецептором EPH A4 и активировать его , а эфрин-A5 может связываться с рецептором Eph B2 и активировать его . [10] EphAs/ephrin-As обычно связываются с высокой аффинностью, что частично можно объяснить тем фактом, что ephrinAs взаимодействуют с EphAs по механизму «замок-и-ключ», который требует небольшого конформационного изменения EphAs при связывании лиганда. Напротив, EphBs обычно связываются с более низкой аффинностью, чем EphAs/ephring-As, поскольку они используют механизм «индуцированной подгонки», который требует большего конформационного изменения EphBs для связывания ephrin-Bs. [11]
Во время развития центральной нервной системы сигнализация Eph/ephrin играет решающую роль в межклеточно-опосредованной миграции нескольких типов нейронных аксонов к их целевым местам назначения. Сигнализация Eph/ephrin контролирует направление нейронных аксонов посредством их способности ингибировать выживание конусов роста аксонов , что отталкивает мигрирующий аксон от места активации Eph/ephrin. [12] Конусы роста мигрирующих аксонов не просто реагируют на абсолютные уровни Ephs или ephrins в клетках, с которыми они контактируют, но скорее реагируют на относительные уровни экспрессии Eph и ephrin, [13] что позволяет мигрирующим аксонам, которые экспрессируют либо Ephs, либо ephrins, направляться вдоль градиентов клеток, экспрессирующих Eph или ephrin, к месту назначения, где выживание конуса роста аксонов больше не полностью ингибируется. [12]
Хотя активация Eph-ephrin обычно связана с уменьшением выживаемости конусов роста и отталкиванием мигрирующих аксонов, недавно было показано, что выживаемость конусов роста зависит не только от активации Eph-ephrin, но и от дифференциальных эффектов «прямой» сигнализации рецептором Eph или «обратной» сигнализации лигандом ephrin на выживаемость конусов роста. [12] [14]
Формирование организованной ретинотопической карты в верхнем холмике (SC) (называемым зрительным тектумом у низших позвоночных) требует надлежащей миграции аксонов ганглиозных клеток сетчатки (RGC) из сетчатки в определенные области SC, что опосредовано градиентами экспрессии Eph и эфрина как в SC, так и в мигрирующих RGC, покидающих сетчатку. [15] Снижение выживаемости конусов роста аксонов, обсуждавшееся выше, допускает градиент высокой задней экспрессии лиганда эфрина-A до низкой передней в SC, чтобы направлять мигрирующие аксоны RGC из височной области сетчатки, которые экспрессируют высокий уровень рецепторов EphA, к мишеням в переднем SC, а RGC из носовой сетчатки, которые имеют низкую экспрессию EphA, к их конечному месту назначения в заднем SC. [16] [17] [18] Аналогичным образом, градиент экспрессии эфрина-B1 вдоль медиально-вентральной оси SC направляет миграцию дорсальных и вентральных EphB-экспрессирующих RGC в латеральную и медиальную часть SC соответственно. [19]
Эфрины способствуют ангиогенезу в физиологических и патологических состояниях (например, раковый ангиогенез, неоваскуляризация при церебральной артериовенозной мальформации ). [20] [21] В частности, Эфрин-B2 и Эфрин-B4 определяют артериальную и венозную судьбу эндотелиальных клеток, соответственно, посредством регуляции ангиогенеза путем смягчения экспрессии в сигнальном пути VEGF . [20] [22] Эфрин-B2 влияет на рецепторы VEGF (например, VEGFR3 ) через прямые и обратные сигнальные пути. [22] Путь Эфрина-B2 распространяется на лимфангиогенез , что приводит к интернализации VEGFR3 в культивируемых лимфатических эндотелиальных клетках. [22] Хотя роль эфринов в ангиогенезе развития выяснена, ангиогенез опухолей остается неясным. На основании наблюдений за мышами с дефицитом Ephrin-A2 , Ephrin-A2 может функционировать в прямой передаче сигналов при ангиогенезе опухолей; однако этот ephrin не способствует сосудистым деформациям во время развития. [23] Более того, Ephrin-B2 и EphB4 могут также способствовать ангиогенезу опухолей в дополнение к их положению в развитии, хотя точный механизм остается неясным. [23] Пары рецепторов Ephrin B2/EphB4 и Ephrin B3/EphB1 вносят больший вклад в васкулогенез в дополнение к ангиогенезу, в то время как Ephrin A1/EphA2, по-видимому, способствуют исключительно ангиогенезу. [24]
Было обнаружено, что несколько типов эфринов и рецепторов Eph активируются при раке человека, включая рак молочной железы, толстой кишки и печени. [24] Удивительно, но подавление других типов эфринов и их рецепторов также может способствовать возникновению опухолей; а именно, EphA1 при колоректальном раке и EphB6 при меланоме . [24] Демонстрируя схожую полезность, различные эфрины включают схожие механистические пути для поддержки роста различных структур.
Семейство белков эфрина класса А и класса В направляет лиганды с рецепторами клеточной поверхности семейства EphB для обеспечения устойчивой, упорядоченной и специфической миграции эпителиальных клеток кишечника из крипты [ необходимо разъяснение ] в ворсинки . Белок Wnt запускает экспрессию рецепторов EphB глубоко внутри крипты, что приводит к снижению экспрессии Eph и повышению экспрессии лиганда эфрина, чем более поверхностно расположена клетка-предшественник. [25] Миграция вызвана двунаправленным сигнальным механизмом, в котором взаимодействие лиганда эфрина с рецептором EphB регулирует динамику актинового цитоскелета, вызывая «отталкивание». Клетки остаются на месте, как только взаимодействие прекращается. В то время как секретирующие слизь бокаловидные клетки и абсорбирующие клетки движутся к просвету , зрелые клетки Панета движутся в противоположном направлении, ко дну крипты, где они находятся. [26] За исключением лиганда эфрина, связывающегося с EphA5, все остальные белки классов A и B были обнаружены в кишечнике. Однако белки эфрина A4, A8, B2 и B4 имеют самые высокие уровни на стадии плода и снижаются с возрастом.
Эксперименты, проведенные с мышами с нокаутированным рецептором Eph, выявили нарушение в распределении различных типов клеток. [26] Поглощающие клетки различной дифференциации смешивались со стволовыми клетками внутри ворсинок. Без рецептора лиганда Ephrin было доказано недостаточно для правильного размещения клеток. [27] Недавние исследования с нокаутированными мышами также показали доказательства косвенной роли взаимодействия ephrin-eph в подавлении колоректального рака . Развитие аденоматозных полипов, созданных неконтролируемым разрастанием эпителиальных клеток, контролируется взаимодействием ephrin-eph. У мышей с мутацией APC , без белка ephrin-B, отсутствуют средства для предотвращения распространения ephB-положительных опухолевых клеток по всему соединению крипта-ворсинка. [28]
Одно из уникальных свойств лигандов эфрина заключается в том, что многие из них обладают способностью инициировать «обратный» сигнал, который является отдельным и отличным от внутриклеточного сигнала, активируемого в клетках, экспрессирующих рецепторы Eph. Хотя механизмы, посредством которых происходит «обратный» сигнал, не полностью изучены, было показано, что как эфрин-A, так и эфрин-B опосредуют клеточные реакции, которые отличаются от тех, которые связаны с активацией их соответствующих рецепторов. В частности, было показано, что эфрин-A5 стимулирует распространение конуса роста в спинальных двигательных нейронах [12] , а эфрин-B1 способствует созреванию дендритных шипиков. [29]