Пример светлопольной микрофотографии . На этом изображении показано поперечное сечение сосудистой ткани стебля растения.
Микроскопия светлого поля ( BF ) — самый простой из всех методов освещения оптической микроскопии . Освещение образца передается (т.е. освещается снизу и наблюдается сверху) белым светом , а контраст в образце обусловлен ослаблением прошедшего света в плотных участках образца. Микроскопия светлого поля — самый простой из ряда методов, используемых для освещения образцов в световых микроскопах, и ее простота делает его популярным методом. Типичный вид изображения, полученного при микроскопии светлого поля, представляет собой темный образец на светлом фоне, отсюда и название.
Световой путь
Световой путь микроскопа светлого поля чрезвычайно прост, никаких дополнительных компонентов, кроме обычной установки светового микроскопа, не требуется. Таким образом, световой путь состоит из:
источник просвечивающего света, обычно галогенная лампа в штативе микроскопа;
конденсорная линза , фокусирующая свет от источника света на образец;
объектив , который собирает свет от образца и увеличивает изображение;
окуляры и/или камеру для просмотра образца изображения.
Микроскопия светлого поля обычно имеет низкий контраст с большинством биологических образцов, поскольку немногие из них в значительной степени поглощают свет. Окрашивание часто требуется для увеличения контраста, что во многих ситуациях не позволяет использовать его на живых клетках. Яркое поле полезно для образцов, имеющих собственный цвет, например, для митохондрий, обнаруженных в клетках.
Сравнение методов просвечивания, используемых для создания контраста в образце папиросной бумаги (1,559 мкм/пиксель)
Освещение светлого поля, контрастность образца обусловлена поглощением света в образце.
The practical limit to magnification with a light microscope is around 1300X. Although higher magnifications are possible, it becomes increasingly difficult to maintain image clarity as the magnification increases;[2]
Low apparent optical resolution due to the blur of out-of-focus material;
Samples that are naturally colorless and transparent cannot be seen well, e.g. many types of mammalian cells. These samples often have to be stained before viewing. Samples that do have their own color can be seen without preparation, e.g. the observation of cytoplasmic streaming in Chara cells.
Enhancements
Reducing or increasing the amount of the light source by the iris diaphragm.
Use of an oil-immersion objective lens and a special immersion oil placed on a glass cover over the specimen. Immersion oil has the same refraction as glass and improves the resolution of the observed specimen.
Use of sample-staining methods for use in microbiology, such as simple stains (methylene blue, safranin, crystal violet) and differential stains (negative stains, flagellar stains, endospore stains).
Use of a colored (usually blue) or polarizing filter on the light source to highlight features not visible under white light. The use of filters is especially useful with mineral samples.
References
Advanced Light Microscopy vol. 1 Principles and Basic Properties by Maksymilian Pluta, Elsevier (1988)
Introduction to Light Microscopy by S. Bradbury, B. Bracegirdle, BIOS Scientific Publishers (1998)
Microbiology: Principles and Explorations by Jacquelyn G. Black, John Wiley & Sons, Inc. (2005)
Microscopy and Imaging Literature
Notes
^Alberts, Bruce; et al. (2002). Molecular biology of the cell (4th ed.). New York: Garland Science. ISBN 0-8153-3218-1.
^ «Микроскопия: виды микроскопии» (PDF) . Общественный колледж Хиллсборо . Архивировано из оригинала (PDF) 20 апреля 2017 года . Проверено 19 апреля 2017 г.
