Far -western blot , или far-western blotting , является молекулярно-биологическим методом, основанным на технике вестерн-блоттинга для обнаружения белок-белкового взаимодействия in vitro . [1] [2] В то время как вестерн- блоттинг использует зонд антител для обнаружения интересующего белка, far-western blot использует зонд не антител, который может связывать интересующий белок. Таким образом, в то время как вестерн-блоттинг используется для обнаружения определенных белков, far-western blotting применяется для обнаружения белок-белковых взаимодействий.
В традиционном вестерн-блоте гель-электрофорез используется для отделения белков из образца; затем эти белки переносятся на мембрану на этапе «блоттинга». В вестерн-блоте специфические белки затем идентифицируются с помощью зонда антитела .
Far-western blot использует неантителовые белки для зондирования интересующего белка на блоте. Таким образом, можно идентифицировать связывающих партнеров зонда (или блотированного) белка. Зондовый белок часто производится в E. coli с использованием вектора экспрессии клонирования .
Затем зондовый белок можно визуализировать с помощью обычных методов — он может быть радиоактивно меченым; он может иметь специфическую аффинную метку, например His или FLAG, для которой существуют антитела; или может существовать специфическое антитело к белку-зонду.
Поскольку клеточные экстракты обычно полностью денатурируют путем кипячения в детергенте перед гель-электрофорезом , этот подход наиболее полезен для обнаружения взаимодействий, не требующих нативной складчатой структуры интересующего белка.