Прямая и непрямая пробы Кумбса , также известные как антиглобулиновый тест ( АГТ ), являются анализами крови, используемыми в иммуногематологии . Прямая проба Кумбса обнаруживает антитела, которые прилипают к поверхности эритроцитов. [1] Поскольку эти антитела иногда разрушают эритроциты, они могут вызывать анемию ; этот тест может помочь прояснить состояние. Непрямая проба Кумбса обнаруживает антитела, которые свободно плавают в крови. [1] Эти антитела могут действовать против определенных эритроцитов; тест можно проводить для диагностики реакций на переливание крови . [1]
Прямой тест Кумбса используется для проверки на аутоиммунную гемолитическую анемию , состояние, при котором иммунная система разрушает эритроциты , что приводит к анемии. Прямой тест Кумбса используется для обнаружения антител или белков комплемента , прикрепленных к поверхности эритроцитов. Для проведения теста берется образец крови, и эритроциты промываются (удаляя плазму пациента и несвязанные антитела из эритроцитов), а затем инкубируются с античеловеческим глобулином («реактив Кумбса»). Если затем эритроциты агглютинируются , тест положительный, визуальное указание на то, что антитела или белки комплемента связаны с поверхностью эритроцитов и могут вызывать разрушение этих клеток.
Непрямой тест Кумбса используется при пренатальном тестировании беременных женщин и при тестировании перед переливанием крови. Тест обнаруживает антитела против чужеродных эритроцитов. В этом случае сыворотка извлекается из образца крови, взятого у пациента. Сыворотка инкубируется с чужеродными эритроцитами известной антигенности . Наконец, добавляется античеловеческий глобулин. Если происходит агглютинация, непрямой тест Кумбса положительный. [2]
Два теста Кумбса основаны на связывании античеловеческих антител с человеческими антителами, обычно IgG или IgM . Эти античеловеческие антитела вырабатываются плазматическими клетками животных, не являющихся людьми, после иммунизации их человеческой плазмой . Кроме того, эти античеловеческие антитела также связываются с человеческими антителами, которые могут быть зафиксированы на антигенах на поверхности эритроцитов (эритроцитов). В соответствующих условиях в пробирке это может привести к агглютинации эритроцитов и позволяет визуализировать полученные скопления эритроцитов. Если наблюдается скопление, тест Кумбса положительный; если нет, тест Кумбса отрицательный. [3]
Клинические применения теста Кумбса включают подготовку крови для переливания при перекрестной пробе , атипичные антитела в плазме крови беременных женщин в рамках дородового наблюдения и обнаружение антител для диагностики иммуноопосредованных гемолитических анемий . [ 4 ]
Тесты Кумбса проводятся с использованием эритроцитов или сыворотки (прямой или непрямой, соответственно) из образцов венозной цельной крови, которые берутся у пациентов путем венепункции . Венозная кровь доставляется в лабораторию (или банк крови), где обученный научный технический персонал проводит тесты Кумбса. Клиническая значимость результата оценивается врачом, который запросил тест Кумбса, возможно, с помощью гематолога, работающего в лаборатории . [ необходима цитата ]
Прямой тест Кумбса, также называемый прямым антиглобулиновым тестом (DAT), используется для определения того, связались ли антитела или факторы системы комплемента с поверхностными антигенами эритроцитов . [5] DAT не требуется для предтрансфузионного тестирования [6], но может проводиться некоторыми лабораториями. [ необходимо разъяснение ] Перед переливанием часто проводится непрямой тест Кумбса.
.png/1280px-Algorithm_in_positive_direct_antiglobulin_test_(DAT,_or_direct_Coombs_test).png)
Прямой тест Кумбса используется в клинической практике при подозрении на иммуноопосредованную гемолитическую анемию (разрушение эритроцитов, опосредованное антителами). Положительный тест Кумбса указывает на то, что иммунный механизм атакует эритроциты пациента . Этот механизм может быть аутоиммунным , аллоиммунным или иммуноопосредованным механизмом, вызванным лекарственными средствами. [3]
( Запоминающее устройство, позволяющее запомнить, что DAT проверяет эритроциты и используется для тестирования младенцев на гемолитическую болезнь новорожденных : R h Болезнь ; R = эритроциты, D = DAT.)
Эритроциты пациента промываются (удаляя собственную сыворотку пациента ), а затем центрифугируются с античеловеческим глобулином (также известным как реагент Кумбса). Если иммуноглобулин или факторы комплемента были зафиксированы на поверхности эритроцитов in vitro , античеловеческий глобулин агглютинирует эритроциты, и прямой тест Кумбса будет положительным. (Визуальное представление положительного прямого теста Кумбса показано в верхней половине схемы). [ необходима цитата ]
Непрямой тест Кумбса, также называемый непрямым антиглобулиновым тестом (IAT), используется для обнаружения in vitro реакций антитело-антиген. Он используется для обнаружения очень низких концентраций антител, присутствующих в плазме/сыворотке пациента перед переливанием крови. В дородовой помощи IAT используется для скрининга беременных женщин на наличие антител, которые могут вызывать гемолитическую болезнь новорожденных . IAT также может использоваться для тестов на совместимость , идентификации антител, фенотипирования эритроцитов и титрационных исследований. [ необходима цитата ]
Непрямой тест Кумбса используется для проверки антител при подготовке крови для переливания . Кровь донора и реципиента должна быть совместима по системам ABO и Rh D. Донорская кровь для переливания также проверяется на наличие инфекций в отдельных процессах. [ необходима цитата ]
Образец крови реципиента и образец крови из каждой единицы донорской крови проверяются на антитела с помощью непрямого теста Кумбса. Каждый образец инкубируется против широкого спектра эритроцитов, которые вместе демонстрируют полный спектр поверхностных антигенов (т.е. группы крови ).
Непрямой тест Кумбса используется для проверки образца сыворотки реципиента на наличие антител против образца эритроцитов донора крови . Иногда это называется перекрестной проверкой крови.
Непрямой тест Кумбса используется для скрининга беременных женщин на наличие антител класса IgG , которые могут проникать через плаценту в кровь плода и вызывать гемолитическую болезнь новорожденного . [ необходима ссылка ]
IAT — это двухэтапный тест. (Перекрестная проба визуально показана в нижней половине схемы как пример непрямого теста Кумбса). [ необходима ссылка ]
Непациентные, промытые эритроциты (RBC) с известными антигенами инкубируются с сывороткой пациента, содержащей неизвестное содержание антител. Если сыворотка содержит антитела к антигенам на поверхности RBC, антитела будут связываться с поверхностью RBC. [ необходима цитата ]
Эритроциты промывают три или четыре раза изотоническим солевым раствором, а затем инкубируют с античеловеческим глобулином. Если антитела связались с поверхностными антигенами эритроцитов на первом этапе, эритроциты агглютинируют при инкубации с античеловеческим глобулином (также известным как реагент Кумбса) на этом этапе, и непрямой тест Кумбса будет положительным.
Разбавляя сыворотку, содержащую антитела, можно измерить количество антител в сыворотке. Это делается путем выполнения серийных разведений сыворотки и нахождения максимального разведения тестовой сыворотки, способного вызвать агглютинацию соответствующих эритроцитов. [ необходима цитата ]
Реактив Кумбса (также известный как антиглобулин Кумбса или античеловеческий глобулин ) используется как в прямом тесте Кумбса, так и в непрямом тесте Кумбса. Реактив Кумбса — это античеловеческий глобулин . Он производится путем инъекции человеческого глобулина животным, которые вырабатывают поликлональные антитела, специфичные для человеческих иммуноглобулинов и факторов системы комплемента человека. Можно использовать более специфичные реагенты Кумбса или моноклональные антитела . [ необходима цитата ]
Антитела IgM и IgG прочно связываются со своими комплементарными антигенами. Антитела IgG наиболее реактивны при 37 °C. Антитела IgM легко обнаруживаются в физиологическом растворе при комнатной температуре , поскольку антитела IgM способны образовывать мостики между эритроцитами из-за своего большого размера, эффективно создавая то, что рассматривается как агглютинация . Антитела IgG меньше и требуют помощи для достаточно хорошего связывания, чтобы сформировать визуальную реакцию агглютинации . Реагенты, используемые для улучшения обнаружения IgG, называются потенциаторами. Эритроциты имеют чистый отрицательный заряд, называемый дзета-потенциалом, который заставляет их иметь естественное отталкивание друг от друга. Потенциаторы снижают дзета-потенциал мембран эритроцитов. Обычные потенциаторы включают раствор с низкой ионной силой (LISS), альбумин , полиэтиленгликоль (ПЭГ) и протеолитические ферменты .
Тест Кумбса был впервые описан в 1945 году кембриджскими иммунологами Робином Кумбсом (в честь которого он и назван), Артуром Мурантом и Робом Рейсом . [8] Исторически он проводился в пробирках . Сегодня его обычно проводят с использованием автоматизированной твердофазной или гелевой технологии.