stringtranslate.com

окраска по Романовскому

Мазок крови , окрашенный по Гимзе . Моноциты окружены эритроцитами .

Окрашивание по Романовскому — это прототипическая техника окрашивания , которая была предшественником нескольких отдельных, но похожих красителей, широко используемых в гематологии (изучение крови) и цитопатологии (изучение больных клеток). Окрашивание по Романовскому используется для дифференциации клеток при микроскопическом исследовании в патологических образцах, особенно в снимках крови и костного мозга , [1] и для обнаружения паразитов, таких как малярия, в крови. [2] [3] [4] [5]

Метод окрашивания назван в честь русского врача Дмитрия Леонидовича Романовского (1861–1921), который одним из первых осознал его потенциал для использования в качестве окраски крови. [6]

Окраски, которые связаны с окрасками типа Романовского или являются их производными, включают окраски Гимзы , Дженнера , Райта , Филда , Мая–Грюнвальда , Паппенгейма и Лейшмана . Они различаются по протоколам и добавкам, и их названия часто путают друг с другом на практике.

Механизм

Ценность окрашивания по Романовскому заключается в его способности производить широкий спектр оттенков, что позволяет легко дифференцировать клеточные компоненты. Это явление называется эффектом Романовского , или, более широко, метахромазией . [7]

Эозиновая часть красителя обусловливает розово-оранжевый оттенок эритроцитов и гранул внутри цитоплазмы эозинофильных лейкоцитов .

эффект Романовского

Мазок крови , окрашенный по Гимзе, на котором виден плазмодий (в центре изображения) — паразит, вызывающий малярийную инфекцию.

В 1891 году Романовский [8] [9] [10] разработал краситель, используя смесь эозина (обычно эозина Y ) и выдержанных растворов метиленового синего , который образовывал оттенки, не приписываемые только компонентам окрашивания: отличительные оттенки фиолетового в хроматине клеточного ядра и внутри гранул цитоплазмы некоторых лейкоцитов . Это стало известно как эффект Романовского. [11] [12] [6] [13] [4] Эозин и чистый метиленовый синий по отдельности (или в сочетании) не вызывают эффект Романовского, [13] [4] и активными красителями, которые вызывают этот эффект, теперь считаются азур B и эозин. [14] [3] [13]

Полихромный метиленовый синий

Красители типа Романовского могут быть получены либо из комбинации чистых красителей, либо из метиленового синего, который был подвергнут окислительному деметилированию , что приводит к расщеплению метиленового синего на множество других красителей, некоторые из которых необходимы для получения эффекта Романовского. [15] [4] Метиленовый синий, который подвергся этому окислительному процессу, известен как «полихромный метиленовый синий». [ 15] [4] Полихромный метиленовый синий может содержать до 11 красителей, включая метиленовый синий , азур А , азур В, азур С, тионин , метиленовый фиолетовый Бернтезена, метилтионолин и тионолин. [4] Точный состав полихромного метиленового синего зависит от используемого метода, и даже партии красителя от одного и того же производителя могут отличаться по составу. [15]

Обычный метод быстрого окисления заключается в повышении pH раствора с помощью карбоната калия и кипячения его, что вводит атмосферный кислород . [16] Также использовались и другие методы, такие как окисление в кислой среде с помощью дихромат-аниона .

Хотя было показано, что азур В и эозин являются необходимыми компонентами для получения эффекта Романовского, [14] [3] [13] эти красители в чистом виде не всегда использовались в рецептуре окрашивающих растворов. [4] Первоначальными источниками лазура В (одного из продуктов окисления метиленового синего) были полихромные растворы метиленового синего, которые обрабатывались окислителями или подвергались естественному старению в случае Романовского. [3] [13] Эрнст Малаховский в 1891 году был первым, кто намеренно полихромировал метиленовый синий для использования в окрашивании типа Романовского. [15] [17]

Типы

пятно Райта

Окрашивание Райта можно использовать отдельно или в сочетании с окрашиванием по Гимзе, которое известно как окрашивание по Райту-Гимзе. [1] Окрашивание по Райту названо в честь Джеймса Гомера Райта, который в 1902 году [18] опубликовал метод, использующий нагревание для получения полихромного метиленового синего, который сочетается с эозином Y. [19] [20] [21] [1] Полихромный метиленовый синий смешивают с эозином и дают ему выпасть в осадок, образуя эозинат, который повторно растворяется в метаноле . [4] Добавление Гимзы к окрашиванию по Райту увеличивает яркость «красновато-фиолетового» цвета цитоплазматических гранул. [1] [21] Окрашивания по Райту и Райту-Гимзе являются двумя из красителей типа Романовского, широко используемых в Соединенных Штатах, и в основном используются для окрашивания мазков крови и костного мозга. [21] [1]

пятно Дженнера

Окраска Дженнера используется в микроскопии для окраски мазков крови . Окраска темно-синяя и приводит к очень заметному, четко окрашенному ядру.

окраска по Гимзе

Краситель Гимзы состоит из «Azure II» и эозина Y с метанолом и глицерином в качестве растворителя. [15] «Azure II» считается смесью азура B (который Гимза называл «azure I») и метиленового синего, хотя точный состав «azure I» считается коммерческой тайной. [4] [15] Сравнимые составы с использованием известных красителей были опубликованы и имеются в продаже. Краситель Гимзы считается стандартным красителем для обнаружения и идентификации малярийного паразита. [5]

окраска по Май-Грюнвальду

Окрашивание по Май-Грюнвальду-Гимзе применяется для окрашивания препаратов, полученных методом тонкоигольной аспирации в гистопатологической лаборатории для диагностики опухолевых клеток.

окраска по Паппенгейму

Этот метод представляет собой комбинацию окраски по Май-Грюнвальду и Гимзе.

пятно Лейшмана

В 1901 году Уильям Лейшман [22] разработал краситель, похожий на краситель Луи Дженнера, но с заменой чистого метиленового синего на полихромный метиленовый синий. [19] [15] [4] Краситель Лейшмана готовится из эозината полихромного метиленового синего и эозина Y с использованием метанола в качестве растворителя. [4]

пятно Филда

Полевой краситель используется для окраски толстых мазков крови с целью обнаружения малярийных паразитов.

Клиническое значение

Патология крови и костного мозга

Образец бронхоальвеолярного лаважа , окрашенный Diff-Quik , коммерческим вариантом красителя Романовского, широко используемым в цитопатологии.

Окрашивание по Романовскому широко используется при исследовании крови в виде мазков крови , а также при микроскопическом исследовании биопсий костного мозга и мазков аспирата. [1] [23] Исследование как крови, так и костного мозга может иметь важное значение для диагностики различных заболеваний крови. [1] [23] В Соединенных Штатах широко используются варианты окраски по Романовскому Райта и Райта-Гимзы, [1] в то время как в Европе обычно применяется окраска по Гимзе. [1]

Обнаружение малярии и других паразитов

Из всех красителей типа Романовского окраска по Гимзе особенно важна для обнаружения и идентификации малярийных паразитов в образцах крови . [5] [15] Тесты на обнаружение антигена малярии являются альтернативой окрашиванию и микроскопическому исследованию мазков крови для обнаружения малярии. [5]

Использование в цитопатологии

Окрашивание по Романовскому также используется для окрашивания цитопатологических образцов, например, полученных из тонкоигольных аспиратов и спинномозговой жидкости, полученной при люмбальных пункциях . [24]

История

Дмитрий Леонидович Романовский (1861-1921)

Хотя ведутся споры о том, кто заслуживает признания за этот общий метод окрашивания, общепринято приписывать его Дмитрию Леонидовичу Романовскому . [14] [17] [19]

В 1870-х годах Пауль Эрлих использовал смесь кислых и основных красителей, включая кислый фуксин (кислый краситель) и метиленовый синий (основной краситель), для исследования мазков крови. [25] [26] [27] [28] [17] В 1888 году Чеслав Иванович Чензинский использовал метиленовый синий, но заменил кислый фуксин, используемый Эрлихом, на эозин. [14] [27] [28] Комбинация красителей Чензинского была способна окрашивать малярийного паразита (представителя рода Plasmodium ) . [28] [19] Ни красители Эрлиха, ни Чензинского не давали эффекта Романовского, поскольку метиленовый синий, который они использовали, не был полихромным. [17]

Дмитрий Романовский в 1890 году опубликовал предварительные результаты своего окрашивания крови (комбинация выдержанного метиленового синего и эозина), включая результаты при применении к крови, инфицированной малярией. [6] Это использование полихромного метиленового синего отличало окрашивание Романовского (и последующие формулировки) от окрашивания Эрлиха и Чензинского, в котором отсутствовал фиолетовый оттенок, связанный с эффектом Романовского. [17] Публикация Романовского 1890 года не включала описание того, как он модифицировал свой раствор метиленового синего, [6] [17] но в своей докторской диссертации 1891 года он лучше всего описал метиленовый синий, как используемый после того, как на поверхности начала образовываться плесень. [6] [17] За исключением использования выдержанного раствора метиленового синего, окрашивание Романовского было основано на технике окрашивания Чензинского. [17] Использование Романовским своего метода для изучения малярийного паразита было приписано постоянному интересу к его методу окрашивания. [26]

Эрнст Малаховский

Эрнсту Малаховскому приписывают независимое наблюдение той же комбинации окраски, что и Дмитрию Романовскому в 1891 году, [6] [13] хотя ему также приписывают то, что он был первым, кто это сделал. [17] [19] Малаховский был первым, кто намеренно использовал полихромный раствор метиленового синего, [15] чего Малаховский добился, добавив буру в красящую смесь. [17] Сообщается, что Малаховский продемонстрировал окраску 15 июня 1890 года и в том же году опубликовал статью, «описывающую его публичную демонстрацию». [19] Оба метода — Романовского и Малаховского — позволяли окрашивать ядро ​​и цитоплазму малярийного паразита , тогда как до этого момента используемые красители окрашивали только цитоплазму. [19]

Густав Гимза

В 1899 году Луи Леопольд Дженнер разработал более стабильную версию окраски метиленовым синим и эозином, собрав осадок , который образуется в смесях на водной основе, и растворив его в метаноле . [28] [15] [4] Окраски типа Романовского, приготовленные из собранных осадков, иногда называют эозинатами . [4] Помимо повышения стабильности окраски, использование метанола в окраске Дженнера имело эффект фиксации образцов крови, [4] хотя версия окраски Дженнера не дает эффекта Романовского. [28] [19] [15]

Ричард Мэй и Людвиг Грюнвальд в 1892 году опубликовали версию окраски (теперь известную как окраска Мая–Грюнвальда ), которая похожа на версию, предложенную Дженнером в 1899 году, и также не вызывает эффекта Романовского. [28] [19] [15]

В 1901 году Карл Рейтер и Уильям Лейшман [22] разработали красители, которые объединили использование спирта Луи Дженнером в качестве растворителя и использование Малаховским полихромного метиленового синего. [19] [15] [4] Окраска Рейтера отличалась от окраски Дженнера использованием этилового спирта вместо метанола, а окраска Лейшмана отличалась от окраски Дженнера использованием эозина B вместо эозина Y. [ 19] [4]

Джеймс Хомер Райт в 1902 году опубликовал [18] метод, использующий нагревание для полихромии метиленового синего, который он объединил с эозином Y. Этот метод известен как окраска Райта . [19] [20]

Имя Густава Гимзы также стало ассоциироваться с красителем, поскольку ему приписывают публикацию полезной формулы и протокола в 1902 году. [13] [6] [26] Гимза попытался использовать комбинации чистых красителей, а не полихромные растворы метиленового синего, которые сильно различаются по составу. [20] [19] [15] Гимза продал права на производство своего красителя, но никогда полностью не публиковал подробности о том, как он его производил, [19] хотя считается, что он использовал комбинацию лазура B и метиленового синего. [15] Гимза опубликовал ряд модификаций своих красителей между 1902 и 1934 годами. В 1904 году [29] он предложил добавлять глицерин в свой краситель вместе с метанолом, чтобы повысить его стабильность. [23] [19]

Порошки красителей Гимза, производимые в Германии, широко использовались в Соединенных Штатах до перебоев с поставками во время Первой мировой войны , что привело к более широкому использованию метода Джеймса Гомера Райта для полихромирования метиленового синего. [19] [1]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ abcdefghij Theil, Karl S. (2012). «Обработка костного мозга и нормальная морфология». Практика лабораторной гематологии . С. 279–299. doi :10.1002/9781444398595.ch22. ISBN 9781444398595.
  2. ^ Бэйн, Барбара Дж.; Бейтс, Имельда; Лаффан, Майк А. (11 августа 2016 г.). «Глава 4: Методы подготовки и окрашивания для пленок крови и костного мозга». Dacie and Lewis Practical Hematology (12-е изд.). Elsevier Health Sciences. ISBN 978-0-7020-6925-3.
  3. ^ abcd Horobin, RW (2011). «Как работают красители Романовского и почему они остаются ценными — включая предложенный универсальный механизм окрашивания Романовского и рациональную схему устранения неполадок». Biotechnic & Histochemistry . 86 (1): 36–51. doi :10.3109/10520295.2010.515491. ISSN  1052-0295. PMID  21235292. S2CID  207513741.
  4. ^ abcdefghijklmnop Маршалл, П. Н. (1978). «Окрашивание по Романовскому в гематологии». The Histochemical Journal . 10 (1): 1–29. doi :10.1007/BF01003411. PMID  74370. S2CID  37939306.
  5. ^ abcd Ли, Цигуй; Вайна, Питер Дж.; Миллер, Р. Скотт (2012). «Анализ малярии». Практика лабораторной гематологии . С. 626–637. doi :10.1002/9781444398595.ch48. ISBN 9781444398595.
  6. ^ abcdefg Безруков, АВ (2017). «Окрашивание по Романовскому, эффект Романовского и мысли по вопросу о научном приоритете». Biotechnic & Histochemistry . 92 (1): 29–35. doi :10.1080/10520295.2016.1250285. ISSN  1052-0295. PMID  28098484. S2CID  37401579.
  7. ^ Рибатти, Доменико (2018). «Окрашивание тучных клеток: исторический обзор». Международный архив аллергии и иммунологии . 176 (1): 55–60. doi : 10.1159/000487538 . hdl : 11586/227987 . ISSN  1018-2438. PMID  29597213.
  8. ^ Романовский Д.Л. (1890). «Къ вопрос о построении чужеядныхъ малярии». Врачъ . 52 : 1171–1173.
  9. ^ Романовский Д.Л. Къ вопросу о паразитологиях и терапии болотной лихорадки. Диссертация доктора философии. Спб. 1891 г., 118 с.
  10. ^ Романовский Д (1891). «Zur Frage der Parasitologie und Therapie der Malaria». Санкт-Петербург Мед Вохеншр . 16 : 297–302, 307–315.
  11. ^ Horobin RW, Walter KJ (1987). «Понимание окрашивания по Романовскому. I: Эффект Романовского-Гимзы в мазках крови». Гистохимия . 86 (3): 331–336. doi :10.1007/bf00490267. PMID  2437082. S2CID  25723230.
  12. ^ Woronzoff-Dashkoff KK. (2002). «Окрашивание по Райту-Гимзе. Секреты раскрыты». Clin Lab Med . 22 (1): 15–23. doi :10.1016/S0272-2712(03)00065-9. PMID  11933573.
  13. ^ abcdefg Wittekind, DH (1983). «О природе окрашивания по Романовскому-Гимазе и его значении для цитохимии и гистохимии: общий взгляд». The Histochemical Journal . 15 (10): 1029–1047. doi :10.1007/BF01002498. ISSN  0018-2214. PMID  6196323. S2CID  23896062.
  14. ^ abcd Cooksey, CJ (2017). «Особенности номенклатуры красителей. 8. Метиленовый синий, лазурный и фиолетовый». Biotechnic & Histochemistry . 92 (5): 347–356. doi :10.1080/10520295.2017.1315775. ISSN  1052-0295. PMID  28598697. S2CID  46746062.
  15. ^ abcdefghijklmno Лилли, Ральф Дугалл (1977). Биологические пятна Х. Дж. Конна (9-е изд.). Балтимор: Williams & Wilkins. С. 692.
  16. ^ Goodpasture, EW (1917). «Раствор кислотного полихрома-метиленового синего для рутинного и специального окрашивания». Журнал Американской медицинской ассоциации . LXIX (12): 998. doi :10.1001/jama.1917.25910390002016c . Получено 16.01.2024 .
  17. ^ abcdefghij Лилли, RD (1978). «Окрашивание по Романовскому–Малаховскому: так называемое окрашивание по Романовскому: использование Малаховским в 1891 году щелочного полихромированного метиленового синего для выявления малярийных плазмодиев». Технология окрашивания . 53 (1): 23–28. doi :10.3109/10520297809111439. PMID  78544.
  18. ^ ab Wright JH (1902). «Быстрый метод дифференциального окрашивания мазков крови и малярийных паразитов». J Med Res . 7 (1): 138–144. PMC 2105822. PMID  19971449 . 
  19. ^ abcdefghijklmnop Крафтс, КП; Хемпельманн, Э; Олексин, Б. Дж. (2011). «Пурпурный цвет: от королевской власти до лаборатории, с извинениями Малаховскому». Biotechnic & Histochemistry . 86 (1): 7–35. doi :10.3109/10520295.2010.515490. ISSN  1052-0295. PMID  21235291. S2CID  19829220.
  20. ^ abc Гейтенби, Дж. Б.; Бимс, Х. У. (1950). Карманный справочник микротомиста (11-е изд.). Филадельфия: The Blackstone Company.
  21. ^ abc Woronzoff-Dashkoff KK (2002). «Окрашивание по Райту-Гимзе. Секреты раскрыты». Clin Lab Med . 22 (1): 15–23. doi :10.1016/S0272-2712(03)00065-9. PMID  11933573.
  22. ^ ab Leishman W (1901). «Заметка о простом и быстром методе получения окраски по Романовскому в малярийных и других мазках крови». Br Med J . 2 (2125): 757–758. doi :10.1136/bmj.2.2125.757. PMC 2507168 . PMID  20759810. 
  23. ^ abc Peterson, Powers; McNeill, Sheila; Gulati, Gene (2012). «Клеточный морфологический анализ периферической крови». Практика лабораторной гематологии . С. 10–25. doi :10.1002/9781444398595.ch2. ISBN 9781444398595.
  24. ^ Крафтс, КП; Памбуччан, СЭ (2011). «Окрашивание по Романовскому в цитопатологии: история, преимущества и ограничения». Биотехника и гистохимия . 86 (2): 82–93. doi :10.3109/10520295.2010.515492. ISSN  1052-0295. PMID  21395493. S2CID  5168332.
  25. ^ Эрлих П. (1880). «Methodologische Beiträge zur Physiologie und Pathologie der verschiedenen Formen der Leukocyten» (PDF) . З Клин Мед . 1 : 553–560. Архивировано из оригинала (PDF) 19 июля 2011 г.
  26. ^ abc Брейсгердл, Брайан (1986). История микротехники: эволюция микротома и развитие подготовки тканей (2-е изд.). Линкольнвуд, Иллинойс: Science Heritage Ltd. ISBN 978-0940095007.
  27. ^ ab Крафтс, Кристин; Хемпельманн, Эрнст; Олексин, Барбара Дж. (2011). «В поисках малярийного паразита». Parasitology Research . 109 (3): 521–529. doi :10.1007/s00436-011-2475-4. ISSN  0932-0113. PMID  21660627. S2CID  1823696.
  28. ^ abcdef Woronzoff-Dashkoff, Kristine Pauline Krafts (1993). «Окрашивание Эрлиха-Чензинского-Плена-Малаховского-Романовского-Нохта-Дженнера-Мая-Грюнвальда-Лейшмана-Рейтера-Райта-Гимзы-Лилли-Роу-Уилкокса: тайна раскрывается». Clinics in Laboratory Medicine . 13 (4): 759–771. doi :10.1016/S0272-2712(18)30406-2. ISSN  0272-2712. PMID  7508837.
  29. ^ Гимза Г (1904). «Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Mmethylenazur-Mmethylenblau-Eosin-Färbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nochtschen Chromatinfärbung». Centralbl F Bakt и т . д . 37 : 308–311.