Микробиологический и биохимический метод идентификации.
Тест на оксидазу используется, чтобы определить, обладает ли организм ферментом цитохром-с-оксидазой . Тест используется в качестве вспомогательного средства для дифференциации видов Neisseria , Moraxella , Campylobacter и Pasteurella (положительных к оксидазе). Он также используется для дифференциации псевдомонад от родственных видов. [1]
Классификация
Штаммы могут быть как оксидазо-положительными (OX+), так и оксидазо-отрицательными (OX-).
ОХ+
OX+ обычно означает, что бактерия содержит цитохром c-оксидазу (также известную как комплекс IV) и поэтому может использовать кислород для производства энергии путем преобразования O 2 в H 2 O 2 или H 2 O с помощью цепи переноса электронов .
OX- обычно означает, что бактерия не содержит цитохром-с-оксидазы и, следовательно, либо не может использовать кислород для производства энергии с помощью цепи переноса электронов , либо использует другой цитохром для переноса электронов на кислород.
В тесте используются диски, пропитанные таким реагентом , как N,N,N',N'- тетраметил -п -фенилендиамин , ТМПД (или N,N -диметил- п -фенилендиамин , ДМПД, который также является окислительно-восстановительным индикатором). Реактив имеет цвет от темно-синего до темно-бордового при окислении и бесцветный при восстановлении. Оксидазо-положительные бактерии обладают цитохромоксидазой или индофенолоксидазой (железосодержащий гемопротеин). [5] Оба они катализируют транспорт электронов от донорных соединений ( НАДН ) к акцепторам электронов (обычно кислороду). Тестовый реагент TMPD действует как искусственный донор электронов для фермента оксидазы. Окисленный реагент образует окрашенное соединение индофенолового синего . Цитохромная система обычно присутствует только у аэробных организмов, которые способны использовать кислород в качестве терминального акцептора электронов. Конечным продуктом этого метаболизма является вода или перекись водорода (расщепляемая каталазой ). [1]
Процедуры
Смочите каждый диск примерно четырьмя инокулирующими петлями деионизированной воды.
Используйте петлю для асептического переноса на диск большой массы чистых бактерий.
Наблюдайте за диском до трех минут. Если область прививки становится темно-синей, бордовой или почти черной, результат положительный. Если изменение цвета не происходит в течение трех минут, результат отрицательный.
Альтернативно, живые бактерии, культивируемые на чашках с триптиказо-соевым агаром, можно получить с использованием стерильной техники с инокуляцией в одну линию. Засеянные чашки инкубируют при 37°C в течение 24–48 часов для образования колоний. Следует использовать свежие бактериальные препараты. После роста колоний на среде на поверхность каждого тестируемого организма добавляют 2-3 капли реагента ДМПД.
Положительный тест (OX+) приведет к изменению цвета с фиолетового на фиолетовый в течение 10–30 секунд.
Отрицательный тест (OX-) приведет к появлению светло-розового цвета или отсутствию окраски.
Рекомендации
^ abc MacFaddin JF, редактор. Биохимические тесты для идентификации медицинских бактерий. 3-е изд. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2000. с. 363-7
^ СТ, Коуэн; Стил, К.Дж. (1993). Руководство Коуэна и Стила по идентификации медицинских бактерий (3-е изд.). Кембридж: Издательство Кембриджского университета. ISBN 9780511527104.
^ "UK SMI" (PDF) .
^ Фармер Дж. Дж., Фэннинг Г. Р., Г. Хантли-Картер и др. (май 1981 г.). «Kluyvera, новый (переопределенный) род семейства Enterobacteriaceae: идентификация Kluyvera ascorbata sp. nov. и Kluyveraryocrescens sp. nov. в клинических образцах». Дж. Клин. Микробиол . 13 (5): 919–33. doi : 10.1128/jcm.13.5.919-933.1981. ПМК 273917 . ПМИД 7240403.
^ Айзенберг HD, редактор. Справочник по процедурам клинической микробиологии. Американское общество микробиологии; 2004. с. 3.3.2-3.3.2.13.
Американское общество микробиологии, протокол теста на оксидазу. 2013. ASM MicrobeLibrary, 1–9.
Cheng WJ, Lin CW, Wu TG, Su CS, Hsieh M S. 2013. Калибровка тест-полосок на основе глюкозооксидазы для измерения капиллярной крови с образцами венозной крови, насыщенной кислородом. Клиника Химика Акта. 415, 152–157.
Корчиа Л., Хубо Р., Квинкенель Б., Н'Гуен. 2015. Быстро развивающийся конъюнктивит, вызванный Pasteurella Multocida, возникающий после прямой инокуляции капель животных у хозяина с ослабленным иммунитетом. БМЦ Офтальмология 15.1, 21.
Флох С., Аларкон-Гутьеррес Э., Крике С. 2007. ABTS-анализ активности фенолоксидазы в почве. Журнал микробиологических методов. 71, 319–324.
Габи В.Л., Хэдли К. 1957. Практические лабораторные испытания по идентификации Pseudomonas aeruginosa. Журнал бактериологии. 74, 356–358.
Гилани М., Мунир Т., Латиф М., Гилани М., Рехман С., Ансари М., Хафиз А., Наджиб С., Саад Н. 2015. Эффективность дорипенема in vitro против Pseudomonas Aeruginosa и Acinetobacter Baumannii по данным электронного теста. Журнал Колледжа врачей и хирургов Пакистана 25, 726–729.
Кусс С., Таннер Э.Л., Ордовас-Монтанес М., Комптон Р.Г. 2017. Электрохимическое распознавание и количественная оценка экспрессии цитохрома C в аэробных/анаэробных средах с использованием ','-тетраметилфенилендиамина (TMPD). Химические науки 8.11, 7682–7688. Веб.
Иванова Н.В., Земляк Т.С., Ханнер Р.Х., Хеберт П.Д. Н. 2007. Универсальные коктейли праймеров для штрих-кодирования ДНК рыб. Заметки по молекулярной экологии. 7, 544–54.
Принц К. 2009. Практическое руководство по медицинской микробиологии (Jaypee Brothers Medical Publishers (P) Ltd.) 112–112.
Шилдс П., Кэткарт Л. 2013. Протокол испытаний на оксидазу — Библиотека. Американское общество микробиологии, ASM MicrobeLibrary, 1–5.
Стил К. Дж. 1961. Оксидазная реакция как таксономический инструмент. Журнал общей микробиологии. 25, 297–306.
Зандериго Ф и др. 2018. [11C] Связывание гармина с моноаминоксидазой А мозга: свойства повторного тестирования и неинвазивная количественная оценка. Молекулярная визуализация и биология. 20, 667–681.
