stringtranslate.com

Т-трубочка

T-трубочки ( поперечные трубочки ) являются расширениями клеточной мембраны , которые проникают в центр скелетных и сердечных мышечных клеток . Благодаря мембранам, содержащим большие концентрации ионных каналов , транспортеров и насосов, T-трубочки обеспечивают быструю передачу потенциала действия в клетку, а также играют важную роль в регуляции концентрации клеточного кальция.

Благодаря этим механизмам Т-трубочки позволяют клеткам сердечной мышцы сокращаться сильнее, синхронизируя высвобождение кальция из саркоплазматического ретикулума по всей клетке. [1] Структура и функция Т-трубочек изменяются от удара к удару за ударом из-за сокращения кардиомиоцитов, [2] а также из-за заболеваний, потенциально способствуя сердечной недостаточности и аритмиям . Хотя эти структуры были впервые обнаружены в 1897 году, исследования биологии Т-трубочек продолжаются.

Структура

T-трубочки — это трубочки, образованные из того же фосфолипидного бислоя , что и поверхностная мембрана или сарколемма скелетных или сердечных мышечных клеток. [1] Они напрямую соединяются с сарколеммой на одном конце, прежде чем проникнуть глубоко внутрь клетки, образуя сеть трубочек с секциями, проходящими как перпендикулярно (поперечно), так и параллельно (аксиально) сарколемме. [1] Из-за этой сложной ориентации некоторые называют T-трубочки поперечно-аксиальной трубчатой ​​системой. [3] Внутренняя часть или просвет T-трубочки открыта на поверхности клетки, что означает, что T-трубочка заполнена жидкостью, содержащей те же компоненты, что и раствор, окружающий клетку (внеклеточная жидкость). Мембрана, которая образует T-трубочки, не является просто пассивной соединительной трубкой, а является высокоактивной, будучи усеянной белками, включая кальциевые каналы L-типа , натрий-кальциевые обменники , кальциевые АТФазы и бета-адренорецепторы . [1]

T-трубочки находятся как в предсердных , так и в желудочковых сердечных мышечных клетках ( кардиомиоцитах ), в которых они развиваются в первые несколько недель жизни. [4] Они находятся в желудочковых мышечных клетках у большинства видов, а также в предсердных мышечных клетках у крупных млекопитающих. [5] В сердечных мышечных клетках у разных видов T-трубочки имеют диаметр от 20 до 450 нанометров и обычно расположены в областях, называемых Z-дисками , где актиновые миофиламенты закрепляются внутри клетки. [1] T-трубочки в сердце тесно связаны с внутриклеточным хранилищем кальция, известным как саркоплазматический ретикулум , в определенных областях, называемых терминальными цистернами. Связь T-трубочки с терминальной цистерной известна как диада . [6]

В клетках скелетных мышц Т-трубочки в три-четыре раза уже, чем в клетках сердечной мышцы, и имеют диаметр от 20 до 40 нм. [1] Обычно они располагаются по обе стороны от миозиновой полосы, на стыке перекрытия (соединении AI) между полосами A и I. [7] Т-трубочки в скелетных мышцах связаны с двумя конечными цистернами , известными как триада . [1] [8]

Регуляторы

Форма системы Т-трубочек создается и поддерживается различными белками. Белок амфифизин-2 кодируется геном BIN1 и отвечает за формирование структуры Т-трубочки и обеспечение того, чтобы соответствующие белки (в частности, кальциевые каналы L-типа) находились внутри мембраны Т-трубочки. [9] Юнктофилин-2 кодируется геном JPH2 и помогает формировать соединение между мембраной Т-трубочки и саркоплазматическим ретикулумом, что жизненно важно для сопряжения возбуждения и сокращения . [6] Титин-покрывающий белок, известный как телетонин , кодируется геном TCAP и помогает в развитии Т-трубочек и потенциально отвечает за увеличение числа Т-трубочек, наблюдаемое по мере роста мышц. [6]

Функция

Связь возбуждения и сокращения

T-трубочки являются важным звеном в цепочке от электрического возбуждения клетки до ее последующего сокращения (связь возбуждения-сокращения). Когда необходимо сокращение мышцы, стимуляция от нерва или соседней мышечной клетки вызывает характерный поток заряженных частиц через клеточную мембрану, известный как потенциал действия . В состоянии покоя на внутренней стороне мембраны находится меньше положительно заряженных частиц по сравнению с внешней стороной, и мембрана описывается как поляризованная. Во время потенциала действия положительно заряженные частицы (преимущественно ионы натрия и кальция) протекают через мембрану снаружи внутрь. Это меняет нормальный дисбаланс заряженных частиц и называется деполяризацией . Одна область мембраны деполяризует соседние области, и результирующая волна деполяризации затем распространяется вдоль клеточной мембраны. [10] Поляризация мембраны восстанавливается, когда ионы калия текут обратно через мембрану изнутри наружу клетки.

В клетках сердечной мышцы, когда потенциал действия проходит по Т-трубочкам, он активирует кальциевые каналы L-типа в мембране Т-трубочек. Активация кальциевого канала L-типа позволяет кальцию проходить в клетку. Т-трубочки содержат более высокую концентрацию кальциевых каналов L-типа, чем остальная часть сарколеммы, и поэтому большая часть кальция, который попадает в клетку, происходит через Т-трубочки. [11] Этот кальций связывается с рецептором, известным как рианодиновый рецептор , и активирует его, расположенный на собственном внутреннем хранилище кальция клетки, саркоплазматическом ретикулуме. Активация рианодинового рецептора вызывает высвобождение кальция из саркоплазматического ретикулума, заставляя мышечную клетку сокращаться. [12] Однако в клетках скелетных мышц кальциевый канал L-типа напрямую присоединен к рецептору рианодина на саркоплазматическом ретикулуме, что позволяет активировать рецептор рианодина напрямую, без необходимости притока кальция. [13]

Важность Т-трубочек обусловлена ​​не только концентрацией в них кальциевых каналов L-типа, но и их способностью синхронизировать высвобождение кальция внутри клетки. Быстрое распространение потенциала действия по сети Т-трубочек активирует все кальциевые каналы L-типа почти одновременно. Поскольку Т-трубочки приближают сарколемму очень близко к саркоплазматическому ретикулуму во всех областях клетки, кальций может затем высвобождаться из саркоплазматического ретикулума по всей клетке одновременно. Эта синхронизация высвобождения кальция позволяет мышечным клеткам сокращаться сильнее. [14] В клетках, лишенных Т-трубочек, таких как гладкомышечные клетки , больные кардиомиоциты или мышечные клетки, в которых Т-трубочки были искусственно удалены, кальций, который поступает в сарколемму, должен постепенно диффундировать по всей клетке, активируя рецепторы рианодина гораздо медленнее, как волна кальция, приводящая к менее сильному сокращению. [14]

Поскольку Т-трубочки являются основным местом сопряжения возбуждения и сокращения, ионные каналы и белки, участвующие в этом процессе, сосредоточены здесь - в мембране Т-трубочки находится в 3 раза больше кальциевых каналов L-типа по сравнению с остальной частью сарколеммы. Кроме того, бета-адренорецепторы также высоко сконцентрированы в мембране Т-трубочки, [15] и их стимуляция увеличивает высвобождение кальция из саркоплазматического ретикулума. [16]

Контроль кальция

Поскольку пространство внутри просвета Т-трубочки является непрерывным с пространством, окружающим клетку (внеклеточное пространство), концентрации ионов между ними очень похожи. Однако из-за важности ионов внутри Т-трубочек (особенно кальция в сердечной мышце), очень важно, чтобы эти концентрации оставались относительно постоянными. Поскольку Т-трубочки очень тонкие, они по сути улавливают ионы. Это важно, поскольку, независимо от концентрации ионов в других местах клетки, Т-трубочки все еще имеют достаточно ионов кальция, чтобы обеспечить сокращение мышцы. Поэтому, даже если концентрация кальция вне клетки падает ( гипокальциемия ), концентрация кальция внутри Т-трубочки остается относительно постоянной, позволяя сердечному сокращению продолжаться. [6]

Помимо того, что Т-трубочки являются местом входа кальция в клетку, они также являются местом удаления кальция. Это важно, поскольку это означает, что уровни кальция внутри клетки могут строго контролироваться на небольшом участке (т. е. между Т-трубочкой и саркоплазматическим ретикулумом, что известно как локальный контроль). [17] Такие белки, как натрий-кальциевый обменник и сарколеммальная АТФаза, в основном расположены в мембране Т-трубочки. [6] Натрий-кальциевый обменник пассивно удаляет один ион кальция из клетки в обмен на три иона натрия. Таким образом, в качестве пассивного процесса он может позволить кальцию поступать в клетку или из нее в зависимости от комбинации относительных концентраций этих ионов и напряжения на клеточной мембране ( электрохимический градиент ). [10] Кальциевая АТФаза активно удаляет кальций из клетки, используя энергию, полученную из аденозинтрифосфата (АТФ). [10]

Детубуляция

Для изучения функции Т-трубочек, Т-трубочки могут быть искусственно отсоединены от поверхностной мембраны с помощью метода, известного как детубляция . Химические вещества, такие как глицерин [18] или формамид [14] (для скелетных и сердечных мышц соответственно) могут быть добавлены к внеклеточному раствору, который окружает клетки. Эти агенты увеличивают осмолярность внеклеточного раствора, заставляя клетки сжиматься. Когда эти агенты удаляются, клетки быстро расширяются и возвращаются к своему нормальному размеру. Это сокращение и повторное расширение клетки заставляет Т-трубочки отсоединяться от поверхностной мембраны. [19] В качестве альтернативы, осмолярность внеклеточного раствора можно уменьшить, используя, например, гипотонический солевой раствор, вызывая временное набухание клеток. Возвращение внеклеточного раствора к нормальной осмолярности позволяет клеткам вернуться к своему прежнему размеру, что снова приводит к детубляции. [20]

История

Идея клеточной структуры, которая позже стала известна как Т-трубочка, была впервые предложена в 1881 году. Очень короткий временной промежуток между стимуляцией поперечно-полосатой мышечной клетки и ее последующим сокращением был слишком коротким, чтобы быть вызванным сигнальным химическим веществом, проходящим расстояние между сарколеммой и саркоплазматическим ретикулумом. Поэтому было высказано предположение, что мешочки мембраны, проникающие в клетку, могут объяснить очень быстрое начало сокращения, которое наблюдалось. [21] [22]  Прошло до 1897 года, прежде чем были обнаружены первые Т-трубочки с использованием световой микроскопии для изучения сердечной мышцы, инъецированной тушью . Технология визуализации развивалась, и с появлением трансмиссионной электронной микроскопии структура Т-трубочек стала более очевидной [23], что привело к описанию продольного компонента сети Т-трубочек в 1971 году. [24] В 1990-х и 2000-х годах конфокальная микроскопия позволила провести трехмерную реконструкцию сети Т-трубочек и количественно оценить размер и распределение Т-трубочек, [25] а важные связи между Т-трубочками и высвобождением кальция начали раскрываться с открытием кальциевых искр . [26] В то время как ранние работы были сосредоточены на желудочковой сердечной мышце и скелетных мышцах, в 2009 году была обнаружена обширная сеть Т-трубочек в клетках сердечной мышцы предсердий. [27] Текущие исследования сосредоточены на регуляции структуры Т-трубочек и на том, как Т-трубочки подвергаются влиянию сердечно-сосудистых заболеваний и способствуют их возникновению. [28]

Клиническое значение

Структура Т-трубочек может быть изменена болезнью, которая в сердце может способствовать слабости сердечной мышцы или аномальным сердечным ритмам. Изменения, наблюдаемые при болезни, варьируются от полной потери Т-трубочек до более тонких изменений в их ориентации или схемах ветвления. [29] Т-трубочки могут быть потеряны или разрушены после инфаркта миокарда , [29] а также разрушены в желудочках пациентов с сердечной недостаточностью , способствуя снижению силы сокращения и потенциально уменьшая шансы на выздоровление. [30] Сердечная недостаточность также может вызвать почти полную потерю Т-трубочек из предсердных кардиомиоцитов, снижая сократимость предсердий и потенциально способствуя мерцательной аритмии . [27]

Структурные изменения в Т-трубочках могут привести к тому, что кальциевые каналы L-типа отойдут от рецепторов рианодина. Это может увеличить время, необходимое для повышения уровня кальция в клетке, что приведет к более слабым сокращениям и аритмиям . [6] [27] Однако неупорядоченная структура Т-трубочек может быть не постоянной, поскольку некоторые предполагают, что ремоделирование Т-трубочек может быть обращено вспять с помощью интервальных тренировок . [6]

Смотрите также

Ссылки

  1. ^ abcdefg Hong, TingTing; Shaw, Robin M. (2017-01-01). "Микроанатомия и функция сердечной T-трубочки". Physiological Reviews . 97 (1): 227–252. doi :10.1152/physrev.00037.2015. ISSN  0031-9333. PMC  6151489 . PMID  27881552.
  2. ^ Rog-Zielinska EA, et al. (2021). «Деформация Т-трубочек кардиомиоцитов в каждом тактовом ритме приводит к обмену содержимым трубочек». Circ. Res . 128 (2): 203–215. doi : 10.1161/CIRCRESAHA.120.317266 . PMC 7834912. PMID  33228470 . 
  3. ^ Феррантини, Сесилия; Коппини, Рафаэле; Саккони, Леонардо; Тоси, Бенедетта; Чжан, Мэй Ло; Ван, Го Лян; Фрис, Эут де; Хоппенбрауэрс, Эрнст; Павоне, Франческо (01 июня 2014 г.). «Влияние детубуляции на силу и кинетику сокращения сердечной мышцы». Журнал общей физиологии . 143 (6): 783–797. дои : 10.1085/jgp.201311125. ПМК 4035744 . ПМИД  24863933. 
  4. ^ Haddock, Peter S.; Coetzee, William A.; Cho, Emily; Porter, Lisa; Katoh, Hideki; Bers, Donald M.; Jafri, M. Saleet; Artman, Michael (1999-09-03). "Субклеточные градиенты [Ca2+]i во время сопряжения возбуждения и сокращения в желудочковых миоцитах новорожденных кроликов". Circulation Research . 85 (5): 415–427. doi : 10.1161/01.RES.85.5.415 . ISSN  0009-7330. PMID  10473671.
  5. ^ Ричардс, MA; Кларк, JD; Сараванан, P.; Фойгт, N.; Добрев, D.; Эйснер, DA; Траффорд, AW; Дибб, KM (ноябрь 2011 г.). «Поперечные канальцы являются общей чертой в крупных предсердных миоцитах млекопитающих, включая человека». Американский журнал физиологии. Физиология сердца и кровообращения . 301 (5): H1996–2005. doi :10.1152/ajpheart.00284.2011. ISSN  1522-1539. PMC 3213978. PMID 21841013  . 
  6. ^ abcdefg Ибрагим, М.; Горелик, Дж.; Якуб, МХ; Терраччано, CM (2011-09-22). «Структура и функция сердечных Т-трубочек в норме и при патологии». Труды Королевского общества B: Биологические науки . 278 (1719): 2714–2723. doi :10.1098/rspb.2011.0624. PMC 3145195. PMID  21697171 . 
  7. ^ Ди Фиоре, Мариано Ш. Х.; Ерощенко, Виктор П. (2008). Атлас гистологии Ди Фиоре: с функциональными корреляциями . Филадельфия: Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins. стр. 124. ISBN 978-0-7817-7057-6.
  8. ^ "4. Обратный захват кальция и релаксация". www.bristol.ac.uk . Получено 21.02.2017 .
  9. ^ Колдуэлл, Джессика Л.; Смит, Шарлотта Э. Р.; Тейлор, Ребекка Ф.; Китмитто, Ашраф; Эйснер, Дэвид А.; Дибб, Кэтрин М.; Траффорд, Эндрю У. (2014-12-05). «Зависимость поперечных канальцев сердца от белка BAR-домена амфифизина II (BIN-1)». Circulation Research . 115 (12): 986–996. doi :10.1161/CIRCRESAHA.116.303448. ISSN  1524-4571. PMC 4274343. PMID 25332206  . 
  10. ^ abc M., Bers, D. (2001). Сопряжение возбуждения и сокращения и сила сердечного сокращения (2-е изд.). Дордрехт: Kluwer Academic Publishers. ISBN 9780792371588. OCLC  47659382.{{cite book}}: CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  11. ^ Скривен, DR; Дэн, П.; Мур, Э.Д. (ноябрь 2000 г.). «Распределение белков, вовлеченных в сопряжение возбуждения-сокращения в желудочковых миоцитах крыс». Biophysical Journal . 79 (5): 2682–2691. Bibcode :2000BpJ....79.2682S. doi :10.1016/S0006-3495(00)76506-4. ISSN  0006-3495. PMC 1301148 . PMID  11053140. 
  12. ^ Берс, Дональд М. (2002-01-10). «Сцепление возбуждения и сокращения сердца». Nature . 415 (6868): 198–205. Bibcode :2002Natur.415..198B. ​​doi :10.1038/415198a. ISSN  0028-0836. PMID  11805843. S2CID  4337201.
  13. ^ Реббек, Робин Т.; Карунасекара, Ямуна; Борд, Филип Г.; Бирд, Николь А.; Касаротто, Марко Г.; Дулханти, Анджела Ф. (2014-03-01). «Сцепление возбуждения-сокращения скелетных мышц: кто танцующие партнеры?». Международный журнал биохимии и клеточной биологии . 48 : 28–38. doi :10.1016/j.biocel.2013.12.001. ISSN  1878-5875. PMID  24374102.
  14. ^ abc Феррантини, Сесилия; Коппини, Рафаэле; Саккони, Леонардо; Тоси, Бенедетта; Чжан, Мэй Ло; Ван, Го Лян; де Врис, Эут; Хоппенбрауэрс, Эрнст; Павоне, Франческо (01 июня 2014 г.). «Влияние детубуляции на силу и кинетику сокращения сердечной мышцы». Журнал общей физиологии . 143 (6): 783–797. дои : 10.1085/jgp.201311125. ISSN  1540-7748. ПМК 4035744 . ПМИД  24863933. 
  15. ^ Laflamme, MA; Becker, PL (1 ноября 1999 г.). «G(s) и аденилатциклаза в поперечных канальцах сердца: влияние на цАМФ-зависимую сигнализацию». The American Journal of Physiology . 277 (5 Pt 2): H1841–1848. doi :10.1152/ajpheart.1999.277.5.H1841. ISSN  0002-9513. PMID  10564138.
  16. ^ Берс, Дональд М. (2006-05-15). "Фосфорилирование рецепторов сердечного рианодина: целевые сайты и функциональные последствия". Biochemical Journal . 396 (Pt 1): e1–3. doi :10.1042/BJ20060377. ISSN  0264-6021. PMC 1450001 . PMID  16626281. 
  17. ^ Хинч, Р., Гринстейн, Дж. Л., Тансканен, А. Дж., Сюй, Л. и Уинслоу, Р. Л. (2004) «Упрощенная модель локального контроля высвобождения кальция, вызванного кальцием, в миоцитах желудочков сердца», 87(6).
  18. ^ Фрейзер, Джеймс А.; Скеппер, Джереми Н.; Хокадей, Остин Р.; Хуан1, Кристофер Л.-Х. (1998-08-01). «Процесс трубчатой ​​вакуолизации в скелетных мышцах амфибий». Журнал исследований мышц и подвижности клеток . 19 (6): 613–629. doi :10.1023/A:1005325013355. ISSN  0142-4319. PMID  9742446. S2CID  12312117.{{cite journal}}: CS1 maint: числовые имена: список авторов ( ссылка )
  19. ^ Каваи М., Хуссейн М., Орчард Ч. Х. (1999). «Связь возбуждения и сокращения в желудочковых миоцитах крысы после детубулации, вызванной формамидом». Am J Physiol . 277 (2): H603-9. doi :10.1152/ajpheart.1999.277.2.H603. PMID  10444485.
  20. ^ Moench, I.; Meekhof, KE; Cheng, LF; Lopatin, AN (июль 2013 г.). «Разрешение гипоосмотического стресса в изолированных миоцитах желудочков мыши вызывает запечатывание t-трубочек». Experimental Physiology . 98 (7): 1164–1177. doi :10.1113/expphysiol.2013.072470. ISSN  1469-445X. PMC 3746342 . PMID  23585327. 
  21. ^ Хаксли, А.Ф. (1971-06-15). «Активация поперечно-полосатых мышц и их механическая реакция». Труды Лондонского королевского общества. Серия B, Биологические науки . 178 (1050): 1–27. doi :10.1098/rspb.1971.0049. ISSN  0950-1193. PMID  4397265. S2CID  30218942.
  22. ^ Хилл, А. В. (октябрь 1949 г.). «Резкий переход от покоя к активности в мышцах». Труды Лондонского королевского общества. Серия B, Биологические науки . 136 (884): 399–420. Bibcode : 1949RSPSB.136..399H. doi : 10.1098/rspb.1949.0033. ISSN  0950-1193. PMID  18143369. S2CID  11863605.
  23. ^ Линднер, Э. (1957). «[Субмикроскопическая морфология сердечной мышцы]». Zeitschrift für Zellforschung und Mikroskopische Anatomy . 45 (6): 702–746. ISSN  0340-0336. ПМИД  13456982.
  24. ^ Sperelakis, N.; Rubio, R. (август 1971 г.). «Упорядоченная решетка аксиальных канальцев, которые соединяют соседние поперечные канальцы в желудочковом миокарде морской свинки». Журнал молекулярной и клеточной кардиологии . 2 (3): 211–220. doi :10.1016/0022-2828(71)90054-x. ISSN  0022-2828. PMID  5117216.
  25. ^ Savio-Galimberti, Eleonora; Frank, Joy; Inoue, Masashi; Goldhaber, Joshua I.; Cannell, Mark B.; Bridge, John HB; Sachse, Frank B. (август 2008 г.). «Новые особенности поперечной трубчатой ​​системы кролика, выявленные с помощью количественного анализа трехмерных реконструкций из конфокальных изображений». Biophysical Journal . 95 (4): 2053–2062. Bibcode :2008BpJ....95.2053S. doi :10.1529/biophysj.108.130617. ISSN  1542-0086. PMC 2483780 . PMID  18487298. 
  26. ^ Ченг, Х.; Ледерер, В. Дж.; Кэннелл, М. Б. (1993-10-29). «Кальциевые искры: элементарные события, лежащие в основе сопряжения возбуждения и сокращения в сердечной мышце». Science . 262 (5134): 740–744. Bibcode :1993Sci...262..740C. doi :10.1126/science.8235594. ISSN  0036-8075. PMID  8235594.
  27. ^ abc Dibb, Katharine M.; Clarke, Jessica D.; Horn, Margaux A.; Richards, Mark A.; Graham, Helen K.; Eisner, David A.; Trafford, Andrew W. (сентябрь 2009 г.). «Характеристика обширной поперечной трубчатой ​​сети в миоцитах предсердий овец и ее истощение при сердечной недостаточности». Circulation: Heart Failure . 2 (5): 482–489. doi : 10.1161/CIRCHEARTFAILURE.109.852228 . ISSN  1941-3297. PMID  19808379.
  28. ^ Эйснер, Дэвид А.; Колдуэлл, Джессика Л.; Кистамас, Корнель; Траффорд, Эндрю У. (2017-07-07). «Кальций и связь возбуждения и сокращения в сердце». Исследования кровообращения . 121 (2): 181–195. doi :10.1161/CIRCRESAHA.117.310230. ISSN  1524-4571. PMC 5497788. PMID 28684623  . 
  29. ^ ab Pinali, Christian; Malik, Nadim; Davenport, J. Bernard; Allan, Laurence J.; Murfitt, Lucy; Iqbal, Mohammad M.; Boyett, Mark R.; Wright, Elizabeth J.; Walker, Rachel (2017-05-04). "Пост-миокардиальные T-трубочки формируют увеличенные разветвленные структуры с нарушением регуляции Junctophilin-2 и мостикового интегратора 1 (BIN-1)". Журнал Американской кардиологической ассоциации . 6 (5). doi : 10.1161/JAHA.116.004834. ISSN  2047-9980. PMC 5524063. PMID 28473402  . 
  30. ^ Seidel, Thomas; Navankasattusas, Sutip; Ahmad, Azmi; Diakos, Nikolaos A.; Xu, Weining David; Tristani-Firouzi, Martin; Bonios, Michael J.; Taleb, Iosif; Li, Dean Y. (2017-04-25). «Листообразное ремоделирование поперечной канальцевой системы при сердечной недостаточности человека нарушает сопряжение возбуждения и сокращения и функциональное восстановление путем механической разгрузки». Circulation . 135 (17): 1632–1645. doi :10.1161/CIRCULATIONAHA.116.024470. ISSN  1524-4539. PMC 5404964 . PMID  28073805.