Процедура замороженного среза — это патологическая лабораторная процедура для проведения быстрого микроскопического анализа образца. Чаще всего она используется в онкологической хирургии . [1] Техническое название этой процедуры — криосекция . Микротомное устройство, которое режет холодом тонкие блоки замороженной ткани , называется криотом . [2]
Качество слайдов, полученных с помощью замороженных срезов, ниже, чем качество обработки тканей, фиксированных формалином и залитых парафином. Хотя диагноз может быть поставлен во многих случаях, обработка фиксированных тканей предпочтительнее во многих условиях для более точной диагностики.
Интраоперационная консультация — это название, данное патологом всему вмешательству , которое включает в себя не только замороженный срез, но и общую оценку образца, исследование цитологических препаратов, взятых с образца (например, отпечатки пальцев), и аликвотирование образца для специальных исследований (например, методы молекулярной патологии, проточная цитометрия). Отчет, предоставляемый патологом, часто ограничивается «доброкачественным» или «злокачественным» диагнозом и сообщается хирургу, работающему по внутренней связи. При работе с ранее подтвержденной злокачественной опухолью основная цель патолога — сообщить хирургу, свободен ли край резекции от остаточного рака или присутствует ли остаточный рак на краю резекции. Метод обработки обычно выполняется с помощью техники «хлебной буханки » . Но хирургия с контролируемым краем ( CCPDMA ) может быть выполнена с использованием различных методов разрезания и монтажа тканей, включая операцию Мооса .
Процедура замороженных срезов, практикуемая сегодня в медицинских лабораториях, основана на описании доктора Луиса Б. Уилсона в 1905 году. Уилсон разработал технику на основе более ранних отчетов по просьбе доктора Уильяма Майо , хирурга и одного из основателей клиники Майо [3]. Более ранние отчеты доктора Томаса С. Каллена из больницы Джона Хопкинса в Балтиморе также включали замороженные срезы, но только после фиксации формалином, а патологоанатом доктор Уильям Уэлч, также из больницы Хопкинса, экспериментировал с процедурой Каллена, но без клинических последствий. Таким образом, Уилсону обычно приписывают истинное новаторство в этой процедуре (Gal & Cagle, 2005). [4]
Ключевым инструментом для криосекции является криостат , который по сути является микротомом внутри морозильника. Микротом можно сравнить с очень точным «деликатесным» слайсером, способным нарезать срезы толщиной до 1 микрометра. Обычный гистологический срез нарезается на 5–10 микрометров. Хирургический образец помещается на металлический тканевый диск, который затем закрепляется в патроне и быстро замораживается до температуры около –20––30 °C. Образец помещается в гелеобразную заливочную среду, обычно OCT , которая состоит из полиэтиленгликоля и поливинилового спирта ; это соединение известно под многими названиями и при замораживании имеет ту же плотность, что и замороженная ткань. При этой температуре большинство тканей становятся твердыми как камень. Обычно для жировой или липидной ткани требуется более низкая температура. Каждая ткань имеет предпочтительную температуру для обработки. Затем его разрезают, замораживают с помощью микротомной части криостата, срез помещают на предметное стекло и окрашивают (обычно гематоксилином и эозином , краситель H&E ). Подготовка образца происходит гораздо быстрее, чем при использовании традиционной гистологической техники (около 10 минут против 16 часов). Однако техническое качество срезов намного ниже. Вся лаборатория может занимать площадь менее 9 квадратных футов (0,84 м2 ) , и требуется минимальная вентиляция по сравнению со стандартной лабораторией образцов, залитых воском. [ необходима цитата ]
Этапы криотомии:
Основное применение процедуры замороженного среза — это исследование ткани во время операции. Это может быть по разным причинам. При выполнении операции Мооса это простой метод контроля края хирургического образца в реальном времени. Если опухоль, по-видимому, дала метастазы , образец предполагаемого метастаза отправляется на криосекцию для подтверждения его идентичности. Это поможет хирургу решить, есть ли смысл продолжать операцию. Обычно агрессивная операция выполняется только в том случае, если есть шанс вылечить пациента. Если опухоль дала метастазы, операция обычно не является излечивающей, и хирург выбирает более консервативную операцию или вообще не делает резекцию. Если опухоль была резецирована, но неясно, свободен ли край резекции от опухоли, требуется интраоперационная консультация для оценки необходимости проведения дальнейшей резекции для получения чистых краев. При процедуре сторожевого узла сторожевой узел, содержащий опухолевую ткань, побуждает к дальнейшей диссекции лимфатического узла, в то время как доброкачественный узел позволит избежать такой процедуры. [ необходима цитата ]
Если операция является исследовательской, быстрое обследование поражения может помочь определить возможную причину симптомов у пациента. Однако важно отметить, что патологоанатом очень ограничен плохим техническим качеством замороженных срезов. Окончательный диагноз редко предлагается интраоперационно. [ необходима цитата ]
В редких случаях криосрезы используются для обнаружения веществ, потерянных в традиционной гистологической технике, например, липидов. Их также можно использовать для обнаружения некоторых антигенов , замаскированных формалином. Криостат доступен в виде небольшого портативного устройства весом менее 80 фунтов (36 кг) или большого стационарного устройства весом 500 фунтов (230 кг) или более. Вся гистологическая лаборатория может быть перенесена в одном портативном ящике, что делает гистологию замороженных срезов возможным инструментом в примитивной медицине.
Систематический обзор Cochrane, опубликованный в 2016 году, проанализировал все исследования, в которых сообщалось о диагностической точности замороженных срезов у женщин, перенесших операцию по поводу подозрительной опухоли в яичнике. Обзор пришел к выводу, что для опухолей, которые были явно доброкачественными или злокачественными на замороженном срезе, точность диагностики была хорошей, что позже подтвердила обычная биопсия. Напротив, когда диагноз замороженного среза был пограничной опухолью, не подтверждающей и не исключающей рак, диагноз был менее точным. Обзор предполагает, что в таких ситуациях неопределенности хирурги могут решить провести дополнительную операцию у этой группы женщин во время их первоначальной операции, чтобы уменьшить необходимость во второй операции, поскольку в среднем у одной из пяти этих женщин впоследствии обнаруживался рак. [5]
Ультракриотом , который очень похож на критом, может разрезать ультратонкие блоки ткани, и эту ткань можно наблюдать с помощью просвечивающей электронной микроскопии . Толщина разреза ультракриотома составляет около десятков нанометров. Ультраструктурные свойства можно изучать без внедрения ткани, и поэтому молекулярная консервация лучше. [6]
