Раствор Буэна , или раствор Буэна , представляет собой сложный фиксатор , используемый в гистологии . [1] Он был изобретен французским биологом Полем Буэном и состоит из пикриновой кислоты , уксусной кислоты и формальдегида в водном растворе. [2] Жидкость Буэна особенно полезна для фиксации биоптатов желудочно-кишечного тракта, поскольку этот фиксатор обеспечивает более четкое и лучшее окрашивание ядер , чем 10% нейтральный формалин. Он не является хорошим фиксатором, когда необходимо сохранить ультраструктуру ткани для электронной микроскопии . Однако он является хорошим фиксатором, когда необходимо сохранить структуру ткани с мягкой и нежной текстурой. Уксусная кислота, содержащаяся в этом фиксаторе, лизирует эритроциты и растворяет небольшие отложения железа и кальция в тканях. Вариант, в котором уксусная кислота заменена муравьиной, может быть использован как для фиксации тканей, так и для декальцинации. [3] Эффекты трех химических веществ в растворе Буэна уравновешивают друг друга. Формалин делает цитоплазму базофильной, но этот эффект уравновешивается действием пикриновой кислоты. Это приводит к превосходному ядерному и цитоплазматическому окрашиванию H&E . Тканевый эффект формалина уравновешивается фиксацией мягких тканей пикриновой и уксусной кислот. Эффект уксусной кислоты на отек тканей уравновешивается эффектом пикриновой кислоты на сокращение тканей. [4]
Гидратированные срезы фиксированной формальдегидом ткани обычно предварительно обрабатывают раствором Буэна для получения правильных результатов при окраске трихромом на контрастные цвета коллагеновых и цитоплазматических (мышечных) волокон. Трихромные методы были разработаны для тканей, фиксированных в кислых смесях, содержащих сулему, которые сейчас используются лишь в небольших масштабах.) Для такой коррекции трихромного окрашивания необходим только компонент пикриновой кислоты раствора Буэна. [5]
При использовании раствора Буэна может возникнуть несколько потенциальных проблем. Из-за наличия в растворе формалина при просмотре срезов тканей под микроскопом может присутствовать пигмент формалин. Влажную ткань следует фиксировать в растворе Буэна менее чем на 24 часа. Избыток пикриновой кислоты следует вымывать из ткани несколькими спиртовыми и водными растворами, иначе качество окрашивания со временем может ухудшиться. Влажную ткань, зафиксированную раствором Буэна, следует хранить в спиртово-водном растворе, а не в растворе Буэна. Поскольку раствор Буэна содержит формальдегид, пикриновую кислоту и уксусную кислоту, следует принять соответствующие меры предосторожности в отношении этих веществ и соблюдать правила. В частности, следует отметить, что пикриновая кислота может быть взрывоопасной, чувствительной к трению и ударам, в сухом состоянии и при контакте с некоторыми металлами может образовывать нестабильные пикраты металлов.
Под названием «Жидкость Буэна» этот фиксатор также широко применяется для морских беспозвоночных. [6] Готовят следующим образом: пикриновая кислота, насыщенный водный раствор – 75 мл; формалин, 40% водный раствор – 25 мл; кислота уксусная ледяная – 5 мл. [7]
Жандровый раствор — алкогольный вариант раствора Буэна. При приготовлении этого раствора вместо водного раствора, насыщенного пикриновой кислотой, используют спиртовой раствор, насыщенный пикриновой кислотой. Это решение полезно, когда гликоген и другие углеводы необходимо сохранить в тканях. Его готовят путем смешивания насыщенного раствора пикриновой кислоты в 95% этаноле (80 мл) с формалином (37-40% формальдегида) (15 мл) и ледяной уксусной кислотой (5 мл). [8] Фиксатор Жандра содержит больше пикриновой кислоты, чем фиксатор Буэна, из-за большей растворимости (6,23% мас./об.) в этаноле, чем в воде (1,23% мас./об.). [9]
Раствор Олланда — это вариант раствора Буэна, содержащий ацетат меди . Ацетат меди стабилизирует мембраны эритроцитов и гранулы эозинофилов и эндокринных клеток , так что происходит меньший лизис этих клеточных компонентов, чем в обычном растворе Буэна. [10] Фиксатор Холланда изготавливается путем добавления 6,25 г ацетата меди, 10 г пикриновой кислоты (влажный порошок), 25 мл формалина (37-40% формальдегида) и 2,5 мл ледяной (100%) уксусной кислоты к 250 мл воды. [11]