Рецепторные тирозинкиназы ( RTK ) являются высокоаффинными рецепторами клеточной поверхности для многих полипептидных факторов роста , цитокинов и гормонов . Из 90 уникальных генов тирозинкиназ, идентифицированных в геноме человека , 58 кодируют белки рецепторных тирозинкиназ. [1] Было показано, что рецепторные тирозинкиназы не только являются ключевыми регуляторами нормальных клеточных процессов, но и играют важную роль в развитии и прогрессировании многих типов рака . [2] Мутации в рецепторных тирозинкиназах приводят к активации серии сигнальных каскадов, которые оказывают многочисленные эффекты на экспрессию белков. [3] Рецепторы обычно активируются путем димеризации и презентации субстрата . Рецепторные тирозинкиназы являются частью более крупного семейства протеинтирозинкиназ , охватывающего белки рецепторных тирозинкиназ, которые содержат трансмембранный домен, а также нерецепторные тирозинкиназы , которые не обладают трансмембранными доменами. [4]
Первыми РТК, которые были обнаружены в 1960-х годах, были рецепторы EGF и NGF, но классификация рецепторных тирозинкиназ была разработана только в 1970-х годах. [5]
Было идентифицировано около 20 различных классов RTK. [6]
Большинство RTK являются рецепторами из одной субъединицы, но некоторые существуют в виде мультимерных комплексов , например, рецептор инсулина , который образует дисульфидно- связанные димеры в присутствии гормона (инсулина); более того, связывание лиганда с внеклеточным доменом вызывает образование димеров рецептора. [7] Каждый мономер имеет один гидрофобный трансмембранный домен , состоящий из 25–38 аминокислот , внеклеточную N-концевую область и внутриклеточную C-концевую область. [8] Внеклеточная N-концевая область демонстрирует множество консервативных элементов, включая домены, подобные иммуноглобулину (Ig) или эпидермальному фактору роста (EGF), повторы фибронектина типа III или богатые цистеином области, которые характерны для каждого подсемейства RTK; эти домены содержат в основном сайт связывания лиганда, который связывает внеклеточные лиганды , например, определенный фактор роста или гормон . [2] Внутриклеточная С-концевая область демонстрирует самый высокий уровень консерватизма и включает каталитические домены, ответственные за киназную активность этих рецепторов, которая катализирует аутофосфорилирование рецепторов и фосфорилирование тирозина субстратов RTK. [2]
Киназа — это тип фермента , который переносит фосфатные группы (см. ниже) от высокоэнергетических донорных молекул, таких как АТФ (см. ниже) к определенным целевым молекулам ( субстратам ); этот процесс называется фосфорилированием . Противоположный процесс, фермент, который удаляет фосфатные группы из мишеней, называется фосфатазой . Ферменты киназы, которые специфически фосфорилируют аминокислоты тирозина, называются тирозинкиназами .
Когда фактор роста связывается с внеклеточным доменом RTK, запускается его димеризация с другими соседними RTK. Димеризация приводит к быстрой активации доменов цитоплазматической киназы белка, причем первым субстратом для этих доменов является сам рецептор. В результате активированный рецептор затем становится автофосфорилированным на множественных специфических внутриклеточных остатках тирозина .
Связывание внеклеточного лиганда, как правило, различными способами вызывает или стабилизирует димеризацию рецептора. Это позволяет тирозину в цитоплазматической части каждого мономера рецептора трансфосфорилироваться его партнерским рецептором, распространяя сигнал через плазматическую мембрану. [9] Фосфорилирование определенных остатков тирозина в активированном рецепторе создает сайты связывания для белков, содержащих домен Src homology 2 (SH2) и домен связывания фосфотирозина (PTB). [10] [11] Конкретные белки, содержащие эти домены, включают Src и фосфолипазу C γ. Фосфорилирование и активация этих двух белков при связывании рецептора приводят к инициации путей передачи сигнала . Другие белки, которые взаимодействуют с активированным рецептором, действуют как адаптерные белки и не имеют собственной внутренней ферментативной активности. Эти адаптерные белки связывают активацию RTK с путями передачи сигнала ниже по течению , такими как сигнальный каскад киназы MAP . [2] Пример жизненно важного пути передачи сигнала включает рецептор тирозинкиназы, c-met, который необходим для выживания и пролиферации мигрирующих миобластов во время миогенеза . Отсутствие c-met нарушает вторичный миогенез и, как в случае LBX1, предотвращает формирование мускулатуры конечностей. Это локальное действие FGF (факторов роста фибробластов) с их рецепторами RTK классифицируется как паракринная сигнализация . Поскольку рецепторы RTK фосфорилируют множественные остатки тирозина , они могут активировать множественные пути передачи сигнала .
Семейство белков ErbB или семейство рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR) представляет собой семейство из четырех структурно связанных рецепторных тирозинкиназ. Недостаточная сигнализация ErbB у людей связана с развитием нейродегенеративных заболеваний , таких как рассеянный склероз и болезнь Альцгеймера . [12] У мышей потеря сигнализации любым членом семейства ErbB приводит к эмбриональной летальности с дефектами в органах, включая легкие , кожу , сердце и мозг . Избыточная сигнализация ErbB связана с развитием самых разных типов солидных опухолей . ErbB-1 и ErbB-2 обнаруживаются во многих видах рака у человека , и их чрезмерная сигнализация может быть критическими факторами в развитии и злокачественности этих опухолей . [13]
Факторы роста фибробластов составляют крупнейшее семейство лигандов факторов роста, насчитывающее 23 члена. [14] Естественный альтернативный сплайсинг четырех генов рецепторов фактора роста фибробластов (FGFR) приводит к образованию более 48 различных изоформ FGFR. [15] Эти изоформы различаются по своим свойствам связывания лигандов и доменам киназы; однако все они имеют общую внеклеточную область, состоящую из трех доменов, подобных иммуноглобулину (Ig) (D1-D3), и, таким образом, принадлежат к суперсемейству иммуноглобулинов . [16] Взаимодействие с FGF происходит через домены FGFR D2 и D3. Каждый рецептор может активироваться несколькими FGF. Во многих случаях сами FGF также могут активировать более одного рецептора. Однако это не относится к FGF-7, который может активировать только FGFR2b. [15] Также был идентифицирован ген пятого белка FGFR, FGFR5. В отличие от FGFR 1-4, у него отсутствует цитоплазматический домен тирозинкиназы, а одна изоформа, FGFR5γ, содержит только внеклеточные домены D1 и D2. [17]
Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) является одним из основных индукторов пролиферации эндотелиальных клеток и проницаемости кровеносных сосудов . Два RTK связываются с VEGF на поверхности клетки, VEGFR-1 ( Flt-1 ) и VEGFR-2 ( KDR/Flk-1 ). [18]
Рецепторы VEGF имеют внеклеточную часть, состоящую из семи доменов, подобных Ig , поэтому, как и FGFR, принадлежат к суперсемейству иммуноглобулинов. Они также обладают одной трансмембранной охватывающей областью и внутриклеточной частью, содержащей разделенный домен тирозинкиназы . VEGF-A связывается с VEGFR-1 ( Flt-1 ) и VEGFR-2 ( KDR/Flk-1 ). VEGFR-2, по-видимому, опосредует почти все известные клеточные ответы на VEGF. Функция VEGFR-1 менее хорошо определена, хотя считается, что он модулирует сигнализацию VEGFR-2. Другая функция VEGFR-1 может заключаться в том, чтобы действовать как фиктивный/приманочный рецептор, изолируя VEGF от связывания VEGFR-2 (это, по-видимому, особенно важно во время васкулогенеза у эмбриона). Был обнаружен третий рецептор (VEGFR-3); однако VEGF-A не является лигандом для этого рецептора. VEGFR-3 опосредует лимфангиогенез в ответ на VEGF-C и VEGF-D.
Естественный альтернативный сплайсинг гена RET приводит к образованию 3 различных изоформ белка RET. RET51, RET43 и RET9 содержат 51, 43 и 9 аминокислот в своем C-концевом хвосте соответственно. [19] Биологическая роль изоформ RET51 и RET9 наиболее хорошо изучена in vivo , поскольку это наиболее распространенные изоформы, в которых встречается RET.
RET является рецептором для членов семейства внеклеточных сигнальных молекул или лигандов (GFL) нейротрофического фактора, полученного из глиальных клеток (GDNF) . [20]
Для активации RET сначала GFL должны образовать комплекс с корецептором, закрепленным на гликозилфосфатидилинозитоле (GPI) . Сами корецепторы классифицируются как члены семейства белков GDNF рецептора-α (GFRα). Различные члены семейства GFRα (GFRα1-GFRα4) проявляют специфическую связывающую активность для определенных GFL. [21] После образования комплекса GFL-GFRα комплекс затем объединяет две молекулы RET, запуская транс-автофосфорилирование определенных остатков тирозина в домене тирозинкиназы каждой молекулы RET. Фосфорилирование этих тирозинов затем инициирует внутриклеточные процессы передачи сигнала . [22]
Рецепторы эфрина являются крупнейшим подсемейством РТК.
DDR являются уникальными RTK, поскольку они связываются с коллагенами , а не с растворимыми факторами роста. [23]
Путь рецепторной тирозинкиназы (RTK) тщательно регулируется различными положительными и отрицательными обратными связями . [24] Поскольку RTK координируют широкий спектр клеточных функций, таких как пролиферация и дифференциация клеток, их необходимо регулировать, чтобы предотвратить серьезные нарушения в функционировании клеток, такие как рак и фиброз. [25]
Протеиновая тирозинфосфатаза (PTP) представляет собой группу ферментов, обладающих каталитическим доменом с фосфотирозин-специфической фосфогидролазной активностью. PTP способны изменять активность рецепторных тирозинкиназ как в положительном, так и в отрицательном направлении. [26] PTP могут дефосфорилировать активированные фосфорилированные остатки тирозина на RTK [27] , что фактически приводит к прекращению сигнала. Исследования с участием PTP1B, широко известного PTP, участвующего в регуляции клеточного цикла и сигнализации рецепторов цитокинов, показали, что он дефосфорилирует рецептор эпидермального фактора роста [28] и рецептор инсулина. [29] Некоторые PTP, с другой стороны, являются рецепторами клеточной поверхности, которые играют положительную роль в пролиферации клеточной сигнализации. Cd45, гликопротеин клеточной поверхности, играет решающую роль в антиген-стимулированном дефосфорилировании специфических фосфотирозинов, которые ингибируют путь Src. [30]
Герстатин является аутоингибитором семейства ErbB, [31] который связывается с RTK и блокирует димеризацию рецепторов и фосфорилирование тирозина. [27] Клетки CHO, трансфицированные герстатином, привели к снижению олигомеризации рецепторов, клонального роста и фосфорилирования тирозина рецепторов в ответ на EGF. [32]
Активированные RTK могут подвергаться эндоцитозу, что приводит к подавлению рецептора и, в конечном итоге, сигнального каскада. [3] Молекулярный механизм включает поглощение RTK эндоцитозом, опосредованным клатрином, что приводит к внутриклеточной деградации. [3]
RTK стали привлекательной целью для лекарственной терапии из-за их участия в различных клеточных аномалиях, таких как рак, дегенеративные заболевания и сердечно-сосудистые заболевания. Управление по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) одобрило несколько противораковых препаратов, вызванных активированными RTK. Были разработаны препараты для воздействия на внеклеточный домен или каталитический домен, таким образом ингибируя связывание лиганда, олигомеризацию рецептора. [33] Герцептин, моноклональное антитело, способное связываться с внеклеточным доменом RTK, использовалось для лечения сверхэкспрессии HER2 при раке молочной железы. [34]
+ Таблица адаптирована из «Клеточная сигнализация с помощью рецепторных тирозинкиназ», Леммон и Шлессингер, 2010. Клетка , 141 , стр. 1117–1134.