Тест на тройное сахарное железо ( TSI ) — это микробиологический тест, названный так из-за его способности проверять способность микроорганизмов ферментировать сахара и вырабатывать сероводород . [1] Его часто используют для дифференциации кишечных бактерий, включая сальмонеллу и шигеллу .
Скошенная среда TSI представляет собой пробирку, содержащую агар , краситель, чувствительный к pH ( феноловый красный ), 1% лактозы , 1% сахарозы , 0,1% глюкозы [2] , а также тиосульфат натрия и сульфат железа или сульфат аммония железа .
Все эти ингредиенты смешиваются, нагреваются до стерильности и застывают в пробирке под наклоном. Наклонная форма этой среды обеспечивает множество поверхностей, которые либо подвергаются воздействию воздуха, содержащего кислород, в разной степени (аэробная среда), либо не подвергаются воздействию воздуха (анаэробная среда).
Агаровая среда TSI была разработана на основе железного агара Клиглера , который использовался для определения бактерий, ферментирующих лактозу, путем добавления сахарозы для возможности обнаружения бактерий, ферментирующих сахарозу. [3]
Бактерии, которые ферментируют любой из трех сахаров в среде, будут производить побочные продукты. [4] Эти побочные продукты обычно являются кислотами, которые изменят цвет красного pH-чувствительного красителя (фенолового красного) на желтый цвет. Положение изменения цвета отличает производство кислоты, связанное с ферментацией глюкозы, от кислых побочных продуктов ферментации лактозы или сахарозы. . Если это происходит, новообразованный сероводород ( H
2S ) реагирует с сульфатом железа в среде с образованием сульфида железа , который виден как черный осадок. Примерами бактерий, продуцирующих сульфид, являются виды Salmonella , Proteus , Citrobacter и Edwardsiella . Почернение среды почти всегда наблюдается в нижней части среды.
Бактерия, которая не ферментирует лактозу и ферментирует глюкозу, сначала вызывает желтый скос/желтое дно (кислотная реакция) через 8 часов, но затем преобразуется в красный скос/желтое дно через 24 часа (щелочная реакция). В то время как, если она ферментирует и лактозу, и глюкозу, это приводит к желтой/желтой трубке и остается такой из-за большого количества кислоты, произведенной в реакции. Почернение дна из-за образования H 2 S может маскировать кислую реакцию (желтый цвет) на дне пробирки. Salmonella enterica serovar Typhi может привести к почернению среды на границе дна и скоса.
В анаэробных условиях (которые возникают ближе к дну пробирки) некоторые бактерии используют тиосульфат в качестве акцептора электронов и восстанавливают его до газообразного водорода. Он не очень растворим и может накапливаться в виде пузырьков вдоль инокуляционной дорожки, между агаром и стеклом или в жидкости, которая накапливается на дне скошенной поверхности. Выработка водорода может поднять агар от конца пробирки или сломать агар (расколоть агар). Диоксид углерода, если он и образуется, может не проявляться в виде пузырьков, поскольку он гораздо более растворим в среде.