В биохимии и молекулярной биологии импульсно-погоняющий анализ представляет собой метод изучения клеточного процесса, происходящего с течением времени, путем последовательного воздействия на клетки меченого соединения (импульс), а затем того же соединения в немеченой форме (погоня). [1]
Выбранная клетка или группа клеток сначала подвергается воздействию меченого соединения (импульса), которое должно быть включено в изучаемую молекулу или систему (см. также «Мечение импульсом» ). Затем соединение проходит метаболические пути и используется в синтезе изучаемого продукта. Например, радиоактивно меченная форма лейцина ( 3 H-лейцин) может поступать в группу бета-клеток поджелудочной железы , которые затем используют эту аминокислоту в синтезе инсулина .
Вскоре после введения меченого соединения (обычно около 5 минут, но фактическое время зависит от изучаемого объекта) в окружающую среду попадает избыток того же, но немеченого вещества (погоня). Следуя предыдущему примеру, производство инсулина продолжится, но он больше не будет содержать радиоактивный лейцин , введенный в фазу пульса, и не будет виден с помощью методов радиоактивного обнаружения. Однако движение меченого инсулина, вырабатываемого во время импульсного периода, все же можно было отслеживать внутри клетки. [2]
Этот метод полезен для определения активности определенных клеток в течение длительного периода времени. Метод использовался для изучения протеинкиназы С , убиквитина и многих других белков. Метод также использовался для доказательства существования и функции фрагментов Оказаки . Джордж Паладе использовал импульсную погоню за радиоактивными аминокислотами, чтобы выяснить секреторный путь . [3] [4]
Рисунки и таблицы, показывающие анализ импульсно-чейзингового анализа.
{{cite journal}}: Внешняя ссылка |quote=